HPLC法測定鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍的含量

路明亮

摘要：目的 通過HPLC方法測定二甲雙胍在鹽酸二甲雙胍片劑中的含量。方法 在色譜條件：選擇Hypersil CN （200 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，流動相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)至pH=3.5）（30：70），檢測波長：232 nm， 進(jìn)樣量10 μl，1.0 ml/min為流速，柱溫為30℃條件下進(jìn)行檢測。結(jié)果 二甲雙胍在1.14 ug/ml～57.00 ug/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為：Y=46657X-341531（r=0.9993）， 平均回收率為100.12%，RSD為1.4%。結(jié)論 采用高效液相色譜方法，可有效評估鹽酸二甲雙胍片劑中二甲雙胍的含量，本法簡單、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：HPLC法；鹽酸二甲雙胍；含量

中圖分類號：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1959（2017）13-0178-02

二甲雙胍是治療2型糖尿病的首選藥物，該藥可通過多種作用機(jī)制控制空腹及餐后血糖，且能改善患者血脂代謝[1]，目前主要用于飲食和運(yùn)動控制血糖不滿意的2型糖尿病患者，尤其是胰高血糖素和肥胖患者[2-5]。此類藥物的質(zhì)量控制對于臨床用藥安全至關(guān)重要，本文由此出發(fā)，考察高效液相法在鹽酸二甲雙胍片劑含量測定中的應(yīng)用，結(jié)果報道如下。

1材料與方法

1.1儀器與試藥

島津 LC-2010CHT 型高效液相色譜儀；超聲波清洗器；乙腈（色譜純，霍尼韋爾貿(mào)易（上海）有限公司）；磷酸（色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、磷酸二氫鉀（色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；鹽酸二甲雙胍對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：151113-160117）；鹽酸二甲雙胍片（華潤雙鶴藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H11020541，規(guī)格：0.25 g，批號為：151223、160316、160721）。

1.2方法

1.2.1方法學(xué)驗證

1.2.1.1色譜條件 色譜柱選擇Agilent C18 （150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（加磷酸調(diào)至pH=3.5）（30∶70），檢測波長：232 nm， 進(jìn)樣量10 μl，1.0 ml/min流速，柱溫為室溫（30℃）。

1.2.1.2溶液的制備 ①供試品溶液的制備：精密稱取20顆鹽酸二甲雙胍片，研細(xì)后混勻，采用十萬分位天平精密稱定0.100 g供試品，轉(zhuǎn)移入50 ml容量瓶中，加入20 ml流動相后，加蓋超聲至澄清，放置室溫后加流動相至對應(yīng)刻度后，用0.25 um有機(jī)濾膜過濾，取續(xù)濾液待用。②對照品溶液的制備：精密稱定10.19 mg鹽酸二甲雙胍對照品，轉(zhuǎn)移入20 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻至澄清即得。

1.2.1.3高效液相色譜法 ①精密度試驗：于“1.2.1.1”項色譜條件下，取對照品溶液重復(fù)進(jìn)樣（n=6），進(jìn)樣量均為10 ul，測定每次峰面積，結(jié)合所得數(shù)據(jù)計算RSD，結(jié)果RSD=1.3%<2.0%，達(dá)到藥典規(guī)定[6]，提示本法精密度良好。②重復(fù)性試驗： 取同批次二甲雙胍膠囊6份，根據(jù)“1.2.1.2①”項下供試品制備方法制備供試品溶液，采用“1.2.1.1” 項色譜條件，每份樣品進(jìn)樣10ul，采集每次峰面積，結(jié)合所得數(shù)據(jù)計算RSD，結(jié)果RSD=1.2%<2.0%，達(dá)到藥典規(guī)定，提示本法重復(fù)性良好。③穩(wěn)定性試驗：于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h分別取“1.2.1.2①”項供試品與“1.2.1.2②”項對照品溶液，采用“1.2.1.1” 項色譜條件，測定不同時間點(diǎn)的色譜峰面積，結(jié)合所得峰面積計算不同時間供試品濃度變化，結(jié)果RSD=1.2%<2.0%，達(dá)到藥典規(guī)定，提示對照品及供試品溶液在24 h內(nèi)較為穩(wěn)定。④回收率考察：采用5 ml移液管精密量取5 ml供試液（n=3），保存至3個錐形瓶內(nèi)，依次加鹽酸二甲雙胍對照品2.17 mg、5.46 mg和10.19 mg，根據(jù)“1.2.1.2①”項步驟制備供試品溶液，進(jìn)樣10 ul，測定對應(yīng)樣品的峰面積，結(jié)合所得濃度計算回收率，所得回收率分別為：100.18%、100.22%和99.97%，平均100.12%，RSD 1.4%，達(dá)到藥典規(guī)定[3]。

1.2.1.4線性關(guān)系考察 采用對應(yīng)刻度移液管分別量取“1.2.1.2②”下對照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用0.25 um有機(jī)濾膜過濾，取對應(yīng)續(xù)濾液即為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。采用“1.2.1.1”項色譜條件，進(jìn)樣10 ul，測定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰面積，并以峰面積為橫坐標(biāo)和濃度縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程為：Y =46657X-341531（r=0.9993），提示，鹽酸二甲雙胍濃度在1.14ug/ml～57.00ug/ml范圍內(nèi)與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

1.2.2樣品中鹽酸二甲雙胍含量測定 采用“1.2.1.1項”下色譜條件，分別測定鹽酸二甲雙胍對照品溶液與3批供試品溶液含量，并通過自身對照法對供試品中相關(guān)含量進(jìn)行測定。

2結(jié)果

結(jié)果顯示，HPLC測定鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍平均含量（與標(biāo)識量比較）為（101.55±0.47）%，見表1。

3討論

鹽酸二甲雙胍（C4H12ClN5）屬雙胍類降糖藥物，目前在糖尿病疾病控制中應(yīng)用廣泛，其含量監(jiān)測一直備受醫(yī)藥工作者所重視。本文選擇232 nm為檢測波長，其一是因此波段吸收系數(shù)大，吸光度強(qiáng)，其二是因此波段經(jīng)色譜分離后，無雜峰干擾，檢測準(zhǔn)確；而選擇緩沖鹽作為流動相則是因為本藥物屬鹽類物質(zhì)[7-8]，在色譜柱分配過程中多存在多種離子形式共存，而存在雙頭或拖尾現(xiàn)象，加入緩沖鹽，可讓其pH穩(wěn)定，保持酸堿平衡狀態(tài)，進(jìn)而利于測量準(zhǔn)確，經(jīng)分析可知，上述檢測條件下，C4H12ClN5色譜峰形良好，分離度高。

通過本文結(jié)果我們可知，HPLC法準(zhǔn)確性高、精密度好、重現(xiàn)性和相關(guān)性均符合相關(guān)要求，HPLC法通過色譜柱的分離作用，將鹽酸二甲雙胍制備過程中的有關(guān)物質(zhì)、雜質(zhì)等干擾有效分離，故而能方便的定位主要成分含量，從而更好的用于此類物質(zhì)的質(zhì)量控制，確保用藥安全。

參考文獻(xiàn)：

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[3]孟梅，馬維青，陶存武，等.肥胖初發(fā)2型糖尿病患者早期降糖治療對血胰高血糖素、C肽的影響[J].中日友好醫(yī)院學(xué)報， 2013， 27（1）：21-24.

[4]李晗，高宏凱，胥陽，等.胃轉(zhuǎn)流術(shù)后非肥胖2型糖尿病患者血清胰高血糖素樣肽-1濃度變化的研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2012，06（7）：119-121.

[5]李晗，高宏凱，胥陽，等.胃轉(zhuǎn)流術(shù)后非肥胖2型糖尿病患者血清胰高血糖素樣肽-1濃度變化的研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2012，06（7）：119-121.

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