ESAT—6、INF—γ對老年結(jié)核性腦膜炎患者的臨床意義

張虹+鄒金艷+葉麗君

摘要：目的 探討結(jié)核分枝桿菌早期分泌性抗原-6（ESAT-6）和干擾素-γ（INF-γ）對老年結(jié)核性腦膜炎患者的臨床意義。方法 選取2013年1月～2016年12月住院治療的老年結(jié)核性腦膜炎患者11例，非感染性神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者15例。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測患者的ESAT-6和INF-γ水平并比較。結(jié)果 老年結(jié)核性腦膜炎患者的ESAT-6、INF-γ水平較對照組明顯升高（P<0.05）。結(jié)論 檢測ESAT-6、INF-γ水平對診斷老年結(jié)核性腦膜炎具有重要臨床意義。

關(guān)鍵詞：ESAT-6；INF-γ；結(jié)核性腦膜炎

中圖分類號(hào)：R529.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）13-0056-02

Abstract：Objective To investigate the clinical significance of early secretory antigen-6（ESAT-6）and interferon-γ（INF-γ）of Mycobacterium tuberculosis in elderly patients with tuberculous meningitis.Methods Eleven patients with tuberculous meningitis were enrolled in this study from January 2013 to December 2016，and 15 patients with non-infectious neurological diseases were enrolled.The levels of ESAT-6 and INF-γ were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.Results The levels of ESAT-6 and INF-γ in elderly patients with tuberculous meningitis were significantly higher than those in the control group（P<0.05）.Conclusion The detection of ESAT-6 and INF-γ levels is of great clinical significance in the diagnosis of elderly patients with tuberculous meningitis.

Key words：ESAT-6；INF-γ；Tuberculous meningitis

結(jié)核性腦膜炎（tuberculous meningitis，TBM）是全球流行性疾病，是最嚴(yán)重的肺外結(jié)核病，占結(jié)核病死亡病因的首位[1]。隨著人口老齡化的加劇，老年TBM患者逐漸增多，并因其發(fā)病隱匿、臨床癥狀不典型、免疫功能減退、各臟器功能衰退、合并多種疾病等特點(diǎn)，使得老年TBM的診治面臨更多挑戰(zhàn)。本研究通過檢測11例老年結(jié)核性腦膜炎患者的結(jié)核分枝桿菌早期分泌性抗原-6（early secreted antigenic target 6，ESAT-6）、干擾素-γ（interferon-γ，INF-γ）水平并探討其臨床意義，為臨床提供更多理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年1月～2016年12月在臺(tái)州市第一人民醫(yī)院住院治療的老年TBM患者11例（TBM組），男7例，女4例，平均年齡（65.7±4.8）歲。對照組為同期住院治療的老年非感染性神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者15例，男10例，女5例，平均年齡（66.2±5.3）歲。兩組患者性別構(gòu)成、年齡等一般資料對比無明顯差異（P>0.05）。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)

年齡>60歲，且符合以下結(jié)核性腦膜炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]的病例納入本研究：①臨床表現(xiàn)有發(fā)熱、頭痛、嘔吐、意識(shí)障礙，存在腦膜刺激征或伴有局灶性神經(jīng)損害；②腦脊液檢查顯示白細(xì)胞數(shù)增加，蛋白含量增高，糖和氯化物濃度降低，墨汁染色無隱球菌，革蘭染色未見細(xì)菌和真菌，腦脊液細(xì)菌和真菌培養(yǎng)陰性；③顱腦CT或MRI檢查發(fā)現(xiàn)腦積水、腦基底池滲出、腦梗死；④存在顱外結(jié)核，如肺結(jié)核、腎結(jié)核等；⑤抗結(jié)核治療有效；⑥排除其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

1.3標(biāo)本采集

所有患者入院24 h內(nèi)排除腰穿禁忌癥后，在無菌條件下腰椎穿刺采集腦脊液2管，一管用于腦脊液常規(guī)和生化檢測，當(dāng)天完成；另一管3000 r/min離心10 min，取上清液-20℃儲(chǔ)存，用于檢測ESAT-6和INF-γ。

1.4標(biāo)本檢測

采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA法）檢測ESAT-6和INF-γ水平，ELISA試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司，根據(jù)試劑盒說明書操作，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用Rayto-6100酶標(biāo)儀檢測吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線計(jì)算各樣本濃度值。

1.5統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1老年TBM患者腦脊液常規(guī)和生化特點(diǎn)

老年TBM患者腦脊液白細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白質(zhì)濃度及腺苷脫氨酶（adenosine deaminase，ADA）水平明顯高于對照組（P<0.05），腦脊液葡萄糖、氯化物濃度明顯低于對照組（P<0.05），見表1。TBM組和對照組白細(xì)胞計(jì)數(shù)、葡萄糖、氯化物、蛋白質(zhì)、ADA水平均符合結(jié)核性腦膜炎和非感染性神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者腦脊液常規(guī)和生化改變的典型特征，具有代表性和研究意義。

2.2老年TBM患者ESAT-6和INF-γ水平檢測

老年TBM患者ESAT-6和INF-γ水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3討論

1882年德國細(xì)菌學(xué)家羅伯特科赫首次發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌并證實(shí)其為結(jié)核病的病原菌，隨后人類逐漸重視并深入研究結(jié)核桿菌及結(jié)核病，但由于多重耐藥、合并感染人類免疫缺陷病毒等多種因素，結(jié)核病的發(fā)病率和死亡率依然堪憂，結(jié)核桿菌感染的早期診斷和有效治療仍然是全球性的挑戰(zhàn)。

TBM是由結(jié)核桿菌感染引起的腦膜和脊髓膜的非化膿性炎癥性疾病，病變可累及腦實(shí)質(zhì)、蛛網(wǎng)膜、軟腦膜、腦血管等，伴或不伴肺結(jié)核、腎結(jié)核、骨結(jié)核等其他部位結(jié)核病，是常見肺外結(jié)核病之一[3]。典型的TBM患者可有結(jié)核接觸史，有中樞神經(jīng)系統(tǒng)外結(jié)核病灶，有低熱、盜汗、消瘦等結(jié)核中毒癥狀，有發(fā)熱、頭痛、嘔吐和腦膜刺激征，可出現(xiàn)顱內(nèi)壓增高表現(xiàn)，病變進(jìn)展還可引起腦神經(jīng)損害，導(dǎo)致不可逆性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。老年TBM患者容易合并顱外結(jié)核，腦血管等基礎(chǔ)疾病多，起病隱匿，缺乏典型腦脊液改變，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣化，容易誤診、漏診，是臨床診治和實(shí)驗(yàn)室診斷的共同難點(diǎn)。

腦脊液檢查是TBM重要的實(shí)驗(yàn)室檢查手段，傳統(tǒng)的腦脊液檢查方法包括腦脊液細(xì)胞學(xué)（白細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞分類等）、腦脊液生化（糖、氯化物、蛋白質(zhì)、ADA等）、腦脊液涂片抗酸染色、腦脊液培養(yǎng)等。ADA是核酸代謝中的一種關(guān)鍵酶，廣泛存在于肝、肺、骨骼等組織中，肝損傷、腫瘤等疾病均可升高，缺乏特異性。ADA是TBM的常規(guī)檢查項(xiàng)目，可用于鑒別結(jié)核和其他感染性腦膜炎。TBM患者腦脊液一般為無色，白細(xì)胞計(jì)數(shù)增高，以淋巴細(xì)胞為主，蛋白質(zhì)定量、葡萄糖、氯化物和ADA增高，本研究數(shù)據(jù)中TBM患者腦脊液常規(guī)和生化檢測的特點(diǎn)與之相符。但腦脊液細(xì)胞學(xué)和生化改變?nèi)狈μ禺愋?，容易受較多因素影響，不適于TBM的確診。腦脊液涂片抗酸染色和腦脊液培養(yǎng)是TBM診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但其敏感性低，無法滿足臨床需求。分子生物學(xué)方法如PCR，敏感性偏低，存在假陽性率，對實(shí)驗(yàn)室條件有一定要求，檢測結(jié)果容易受操作者影響。Ruiz-Hernandez G的Meta分析[4]顯示，結(jié)核桿菌DNA擴(kuò)增試驗(yàn)敏感性為56%，特異性98%，DNA擴(kuò)增試驗(yàn)陰性不能排除結(jié)核感染。研究表明，TBM患者PCR檢測結(jié)果變異系數(shù)大，敏感性33%～90%，特異度88%～100%。結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-spot）是一種敏感性和特異性均較高的新的結(jié)核病免疫學(xué)診斷方法，但診斷TBM敏感性較低?？傊壳皯?yīng)用于臨床的免疫學(xué)、細(xì)菌學(xué)和分子生物學(xué)方法都存在敏感性過低或特異性偏低的問題。因而，我們需要尋找一個(gè)敏感性和特異性都能滿足臨床需求的新的、經(jīng)濟(jì)的指標(biāo)。

ESAT-6是結(jié)核桿菌在病變早期分泌的一種蛋白，包含95個(gè)氨基酸，分子量為9.975kDa，編碼基因位于D1區(qū)[5]。IFN-γ是由單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生的具有多種功能的活性蛋白質(zhì)，可以調(diào)節(jié)免疫功能、影響免疫細(xì)胞的增殖和活化。ESAT-6在正常人體內(nèi)含量很低，一旦結(jié)核分枝桿菌大量繁殖，ESAT-6含量迅速增高，高表達(dá)的ESAT-6可以刺激機(jī)體產(chǎn)生IFN-γ等細(xì)胞因子，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，影響結(jié)核的病程進(jìn)展和預(yù)后轉(zhuǎn)歸。另外，卡介苗和非致病性環(huán)境分枝桿菌均不分泌ESAT-6，接種卡介苗不會(huì)引起假陽性，非結(jié)核分枝桿菌感染不會(huì)引起ESAT-6升高。因而，ESAT-6是結(jié)核分枝桿菌較特異的抗原，適合于臨床檢測。IFN-γ是TBM病程中由ESAT-6等多種因素刺激產(chǎn)生，研究表明[6]，TBM患者腦脊液中分泌IFN-γ的特異性T細(xì)胞明顯高于外周血，同時(shí)檢測IFN-γ有助于TBM輔助診斷。

國內(nèi)外已有ESAT-6和INF-γ在結(jié)核性腦膜炎中應(yīng)用的相關(guān)報(bào)道。陳子松[7]等的研究表明，ESAT-6和INF-γ在兒童結(jié)核性腦膜炎中明顯升高，具有重要早期診斷價(jià)值。張春曉[8]等通過研究49例結(jié)核性腦膜炎患者發(fā)現(xiàn)，ESAT-6診斷結(jié)核性腦膜炎的敏感性為89.80%，特異度為96.43%，曲線下面積為0.876。Feng GD[9]等報(bào)道了280例疑似患者的研究，發(fā)現(xiàn)ESAT-6診斷結(jié)核性腦膜炎的敏感性為75.1%，特異性為90.0%。Song FX等[10]用免疫組化方法檢測腦脊液單核細(xì)胞中的ESAT-6，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TBM患者發(fā)病第1 w和第2 w腦脊液中ESAT-6陽性細(xì)胞明顯高于第4周，ESAT-6在TBM的早期診斷中的敏感性和特異性分別為90%和92%。楊璟[11]檢測了46例TBM患者腦脊液單核細(xì)胞內(nèi)的ESAT-6抗原，發(fā)現(xiàn)ESAT-6診斷TBM的靈敏度為91.30%，特異度92.5%，假陽性率7.5%，假陰性率8.70%，陽性預(yù)測值93.33%，陰性預(yù)測值90.24%。

本研究顯示，與對照組相比，老年TBM患者的ESAT-6和INF-γ水平顯著升高（P<0.05），可用于老年患者結(jié)核性腦膜炎的輔助診斷。另外，本研究采用ELISA方法檢測TBM患者腦脊液ESAT-6和INF-γ，檢測方法成熟，操作簡便，可以定量檢測，易于基層醫(yī)院推廣，有深入研究開發(fā)價(jià)值。

綜上所述，腦脊液ESAT-6和INF-γ檢測對于老年結(jié)核性腦膜炎患者具有一定診斷價(jià)值，可以減少誤診和漏診，給臨床診斷提供更多參考。

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