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    嗜酸乳桿菌NCFM雙精氨酸分泌信號肽蛋白的預(yù)測分析

    2017-07-05 02:50:02朱德全王茗悅姚嘉張躍華韓誠武盧偉欒積毅劉向東
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年14期
    關(guān)鍵詞:基因組

    朱德全 王茗悅 姚嘉 張躍華 韓誠武 盧偉 欒積毅 劉向東

    摘要[目的] 對嗜酸乳桿菌NCFM中Tat途徑分泌信號肽蛋白進行預(yù)測分析。[方法] 以嗜酸乳桿菌NCFM基因組序列為對象,采用SignalP4.0、LipoP1.0、TatP 軟件分析該菌株基因組中的雙精氨酸途徑分泌信號肽蛋白。[結(jié)果] 嗜酸乳桿菌NCFM中有酶切位點也有motif的Tat途徑信號肽蛋白94個。[結(jié)論] 對嗜酸乳桿菌NCFM中Tat途徑分泌信號肽蛋白的預(yù)測分析,為進一步分析該菌胞外蛋白的分泌機制打下基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞嗜酸乳桿菌NCFM;基因組;信號肽蛋白;Tat分泌途徑

    中圖分類號S188文獻標識碼A文章編號0517-6611(2017)14-0129-03

    Abstract[Objective] To predict their signal peptide proteins secreted by Tat pathway in Lactobacillus acidophilus NCFM.[Method] The genome sequences of L.acidophilus NCFM were used to predict to secretory proteins of Tat pathway and functional analysis by using SignalP4.0,LipoP1.0,TatP.[Result] There were 94 proteins containing cleavage site of enzyme and motif of Tat pathway in L.acidophilus NCFM.[Conclusion] These results lay the foundation for analyzing the secretion mechanism of extracellular protein in L.acidophilus NCFM.

    Key wordsLactobacillus acidophilus NCFM;Genome;Signal peptide proteins;Tat secretion pathway

    嗜酸乳桿菌NCFM(Lactobacillus acidophilus NCFM)是一株分離自人體腸道的重要商業(yè)化益生菌株,經(jīng)常以益生菌的形式應(yīng)用在嬰兒配方乳粉、酸奶和液態(tài)乳制品中。2005年Altermann 等[1]對該菌株進行了全基因組測序,該菌株基因組全長為1.99 Mb,G+C含量為34.7%,1 927個基因,1 832個編碼蛋白。

    細菌的分泌蛋白在介導(dǎo)菌體與宿主細胞黏附定殖、與外界環(huán)境相互作用方面扮演重要的作用[2-3]。細菌蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)合成后,通過不同的途徑跨膜分泌到細胞外。Sec 途徑是細菌蛋白分泌跨膜轉(zhuǎn)運的主要途徑,而雙精氨酸轉(zhuǎn)運(twinarginine translocation,Tat) 途徑是另外一個蛋白分泌跨膜轉(zhuǎn)運系統(tǒng),該系統(tǒng)的特征是在分泌蛋白的信號肽中含有一個高度保守的雙精氨酸基序。Tat途徑的優(yōu)點是它只分泌已正確折疊的蛋白,從而保證了分泌產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)上的正確性[4]。但目前在NCFM中還未見大規(guī)模地分析鑒定這類分泌蛋白。筆者以嗜酸乳桿菌NCFM全基因組序列為研究對象,用SignalP4.0、LipoP1.0、TatP 軟件分析該基因組中Tat途徑信號肽蛋白和分泌信號肽的特征,為進一步分析該菌胞外蛋白的分泌機制奠定基礎(chǔ)。

    1材料與方法

    1.1材料美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)GenBank公布的嗜酸乳桿菌NCFM基因組序列的編碼蛋白質(zhì),GenBank 的登錄號是NC_006814.3。

    1.2方法采用SignalP 4.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP) 和LipoP1.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/LipoP/)軟件分析該菌株的Sec途徑分泌蛋白[5]。利用TatP軟件(http://www.cbs.dtu.dk/services/TatP)預(yù)測Tat途徑的分泌蛋白。TatP軟件預(yù)測為陽性,而SignalP 4.0和LipoP1.0預(yù)測為陰性的蛋白,才被歸類為Tat途徑的分泌信號肽蛋白。

    2結(jié)果與分析

    該研究先后使用3種軟件對嗜酸乳桿菌NCFM基因組中的1 832個蛋白進行Tat信號肽蛋白的預(yù)測分析,有酶切位點也有motif的Tat信號肽蛋白94個(表1)。

    3討論與結(jié)論

    分泌蛋白是微生物吸收營養(yǎng)物質(zhì)、適應(yīng)外界環(huán)境和細菌與宿主相互作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。盡管Sec途徑是細菌中蛋白分泌跨膜轉(zhuǎn)運的主要途徑,但是Tat途徑只轉(zhuǎn)運折疊正確的蛋白質(zhì),產(chǎn)物更加穩(wěn)定,具有較強的現(xiàn)實意義。目前一些具有工業(yè)價值的重組蛋白已通過Tat途徑實現(xiàn)有效的分泌表達[6]。

    芽孢桿菌是較早完成分泌蛋白預(yù)測的菌株,發(fā)現(xiàn)總共301個分泌蛋白,占基因組總數(shù)的7.3%。芽孢桿菌的分泌蛋白類型和數(shù)量都比較多,可能與適應(yīng)土壤微生物環(huán)境有關(guān)[7]。研究發(fā)現(xiàn)嗜酸乳桿菌NCFM基因組Tat途徑的既有酶切位點又有motif信號肽蛋白94個。對嗜酸乳桿菌NCFM基因組Tat途徑分泌蛋白的預(yù)測和功能分析有助于了解該菌株適應(yīng)外界環(huán)境的分子機制,也為該菌株目標蛋白的高效表達提供新的途徑。

    參考文獻

    [1] ALTERMANN E,RUSSELL W M,AZCARATEPERIL M A,et al.Complete genome sequence of the probiotic lactic acid bacterium Lactobacillus acidophilus NCFM [J].Proceedings of the national academy of sciences of the United States of America,2005,102(11):3906-3912.

    [2] LIU C,ZHANG Z Y,DONG K,et al.Adhesion and immunomodulatory effects of Bifidobacterium lactis HN019 on intestinal epithelial cells INT-407 [J].World journal of gastroenterology,2010,16(18):2283-2290.

    [3] BARINOV A,LOUX V,HAMMANI A,et al.Prediction of surface exposed proteins in Streptococcus pyogenes, with a potential application to other Grampositive bacteria[J].Proteomics,2009,9(1):61-73.

    [4] MLLER M.Twinargininespecific protein export in Escherichia coli[J].Research in microbiology,2005,156(2):131-136.

    [5] BABU M M,PRIYA M L,SELVAN A T,et al.A database of bacterial lipoproteins (DOLOP) with functional assignments to predicted lipoproteins [J].Journal of bacteriology,2006,188(8):2761-2773.

    [6] ZHANG C C,XIN Y P,WANG Y,et al.Identification of a novel dyedecolorizing peroxidase,EfeB,translocated by a twinarginine translocation system in Streptococcus thermophilus CGMCC 7.179 [J].Applied and environmental microbiology,2015,81(18):6108-6119.

    [7] VAN DIJL J M,BOLHUIS A,TJALSMA H,et al.Protein transport pathways in Bacillus subtilis:A genomebased road map[M]//SONENSHENIN A L,HOCH J A,LOSICK R,et al.Bacillus subtilis and its closest relatives:from genes,to cells.Washington.DC:ASM Press,2002:337-355.45卷14期朱德全等嗜酸乳桿菌NCFM雙精氨酸分泌信號肽蛋白的預(yù)測分析

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