地諾孕素治療子宮內(nèi)膜異位癥臨床療效分析

劉 曉 娟

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 張家口 075000)

地諾孕素治療子宮內(nèi)膜異位癥臨床療效分析

劉 曉 娟

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 張家口 075000)

目的 探討地諾孕素治療子宮內(nèi)膜異位癥的臨床效果。方法 92例未接受剝除術(shù)晚期增殖期子宮內(nèi)膜(異位囊腫組織)育齡期女性依據(jù)子宮內(nèi)膜病變狀況結(jié)合用藥方式分為異位對照組(正常培養(yǎng)異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞)及異位地諾孕素組(以50 nmol·L-1地諾孕素對異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞進行處理)各組46例；92例無子宮內(nèi)膜異位癥子宮內(nèi)膜組織正常并行子宮全切術(shù)者依據(jù)用藥方式分為正常對照組(正常培養(yǎng)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞)及正常地諾孕素組(以5092例nM地諾孕素對正常子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞進行處理)各46例。觀察各組Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a等指標(biāo)的mRNA表達水平及蛋白表達水平，分析細(xì)胞凋亡狀況。結(jié)果 異位地諾孕素組Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a的mRNA表達水平及蛋白表達水平均低于正常地諾孕素組、異位對照組，且細(xì)胞凋亡率高于其他3組，差異有顯著性(P<0.05)。結(jié)論 地諾孕素治療子宮內(nèi)膜異位癥，可經(jīng)Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a等有關(guān)因子及NF-κB通路途徑促使異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞凋亡，抑制DNA合成，實現(xiàn)治療目的，改善患者預(yù)后。

子宮內(nèi)膜異位癥；地諾孕素；Bcl-2；NF-κB；Bcl-XL；p21Waf1/Cip1；p16INK4a；NF-κB通路

子宮內(nèi)膜異位癥主要指子宮腔以外生長子宮內(nèi)膜所引起的病變及癥狀，臨床多表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜組織異位生長、不育不孕、痛經(jīng)、盆腔疼痛等，有調(diào)查發(fā)現(xiàn)，近年該病患病率呈逐年增長趨勢，約50%的患者伴有不孕不育，80%的患者伴有盆腔疼痛。目前，子宮內(nèi)膜異位癥病因及發(fā)病機制尚未完全清晰，有研究發(fā)現(xiàn)地諾孕素對該病有一定療效，但具體作用機制尚未明確[1]。我們探討了地諾孕素治療子宮內(nèi)膜異位癥臨床效果，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院2013-01—2015-05月接收的184例子宮內(nèi)膜組織，患者年齡26～49歲，平均(52.36±3.72)歲；病程2～14周，平均(7.62±2.31)周。納入標(biāo)準(zhǔn)：①初診者；②年齡25歲及以上者；③臨床資料齊全，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有子宮內(nèi)膜癌者；②嚴(yán)重肝、心、腎、呼吸、循環(huán)、神經(jīng)、代謝功能不全者；③伴有傳染性疾病者；④不配合本次研究者。

1.2 方法

1.2.1 分組方法

實驗組：育齡期女性晚期增殖期子宮內(nèi)膜(異位囊腫組織)，均未接受剝除術(shù)，從子宮內(nèi)膜病變狀況出發(fā)結(jié)合用藥方式分為異位對照組(正常培養(yǎng)異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞)及異位地諾孕素組(以50 nmol·L-1地諾孕素對異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞進行處理)各46例。對照組：無子宮內(nèi)膜異位癥并行子宮全切術(shù)者的子宮正常內(nèi)膜組織，依據(jù)用藥方式分為正常對照組(正常培養(yǎng)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞)及正常地諾孕素組(以50 nmol·L-1地諾孕素對正常子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞進行處理)各46例。

1.2.2 研究方法

實驗組取育齡期女性晚期增殖期子宮內(nèi)膜(異位囊腫組織，未行剝除術(shù))，對照組取正常子宮內(nèi)膜組織(排除內(nèi)異癥接受子宮全切術(shù)者)，所有患者術(shù)前1年均未行激素治療。于卵巢異位子宮內(nèi)膜組織中將異位囊腫基質(zhì)細(xì)胞分離，酶消化處理獲取異位囊腫基質(zhì)細(xì)胞，種植在6孔板[含青霉素100 IU·mL-1+鏈霉素50 mg·mL-1+DMEM高糖培養(yǎng)基(10%熱滅活胎牛血清)]中，置于5%CO2、37 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)5～6 d，瓶底長滿細(xì)胞時可予以傳代處理。吸去上清液，2.5 g·L-1胰酶消化處理，顯微鏡下對細(xì)胞收縮吸取。待其變圓后吸去消化液，輔以培養(yǎng)液，借助吸管將細(xì)胞自瓶壁上吹打下來，誘導(dǎo)培養(yǎng)擴大。3代培養(yǎng)后，確保純度在99%以上，為獲取足夠數(shù)量的細(xì)胞,以第3代細(xì)胞為依據(jù)，進行實驗。每次分離細(xì)胞均行實驗1次。借助ON-TARGETplus SMART與siRNAs相連接。于6孔板中行異位囊腫基質(zhì)細(xì)胞種植，并借助DMEM/F12培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，利用DMEM/F12培養(yǎng)液(800 L)構(gòu)建轉(zhuǎn)錄混合物，并采用Opti-MEN(50nMsiRNA混合物)預(yù)培養(yǎng)至20 min。于DMEM/F12培養(yǎng)前，以1 000 L轉(zhuǎn)錄混合液進行培養(yǎng)，維持24 h。siRNA轉(zhuǎn)錄2 d后，細(xì)胞于濃度0.5%前應(yīng)用DMEM/F12[經(jīng)地諾孕素(50 μM)處理過]予以血清饑餓培養(yǎng)。應(yīng)用Westernblot對敲減效果進行系統(tǒng)評估。

1.3 檢測指標(biāo)

應(yīng)用ELISA法分析405 nm處細(xì)胞中核小體抗體吸光度，觀察地諾孕素治療后各組細(xì)胞凋亡率；應(yīng)用實時熒光定量法觀察地諾孕素治療后細(xì)胞中Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a基因表達水平；應(yīng)用Western blot法觀察地諾孕素治療后各組Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a蛋白表達水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a mRNA表達水平比較

異位地諾孕素組Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a mRNA表達水平均較正常地諾孕素組、異位對照組低，差異有顯著性(P<0.05)(見表1)。

表1 Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a mRNA表達水平比較

注：與異位對照組比較*P<0.05；與正常地諾孕素組比較#P<0.05。

2.2 Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a蛋白表達水平比較

異位地諾孕素組Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a蛋白表達水平均較正常地諾孕素組、異位對照組低，差異有顯著性(P<0.05)(見表2)。

表2 Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a蛋白表達水平比較

注：與異位對照組比較*P<0.05；與正常地諾孕素組比較#P<0.05。

2.3 細(xì)胞凋亡狀況比較

正常對照組細(xì)胞凋亡率為(9.10±0.22)%，正常地諾孕素組為(9.30±0.27)%，異位對照組為(10.33±1.24)%，異位地諾孕素組為(30.12±1.36)%，異位地諾孕素組細(xì)胞凋亡率高于其他3組，差異有顯著性(P<0.05)。

3 討 論

子宮內(nèi)膜異位癥臨床多表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜組織生長異位，往往伴有不孕不育、痛經(jīng)、盆腔疼痛等癥狀[2]。有調(diào)查發(fā)現(xiàn)，針對育齡女性人群而言，該病患病率約為10%左右，為臨床常見病與多發(fā)病[3]。該病病因復(fù)雜，病理類型多，臨床表現(xiàn)具有多樣性及多變性，發(fā)病機制尚未完全清晰，由于其伴有復(fù)發(fā)性、侵襲性，惡變潛能大，故往往被認(rèn)為為良性癌[4]。

地諾孕素為混合型孕激素，亦為臨床上較為常見的一種新型避孕藥物，藥理學(xué)特征明顯，能有效改善子宮內(nèi)膜異位癥疼痛，作用與醋酸亮丙瑞林類似，但耐受性、安全性值得肯定[5]。加拿大衛(wèi)生部已批準(zhǔn)地諾孕素可用于婦女子宮內(nèi)膜異位相關(guān)骨盆疼痛的治療，該藥物可阻滯雌二醇對子宮內(nèi)膜組織的刺激，緩解骨盆疼痛，已成為一種新型子宮內(nèi)膜異位治療藥物[6]。

本研究結(jié)果顯示異位地諾孕素組經(jīng)地諾孕素治療后Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a蛋白表達水平及mRNA表達水平均較正常地諾孕素組、異位對照組低，細(xì)胞凋亡率較正常對照組、正常地諾孕素組及異位對照組高，表明地諾孕素主要經(jīng)Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a因子及NF-κB通路途徑發(fā)揮治療子宮內(nèi)膜異位癥的作用，對子宮內(nèi)膜異位癥療效確切。

NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在該病病理中具有介導(dǎo)作用，NF-κB因子于真核細(xì)胞中廣泛存在，以異源或同源二聚體為主要形式，與其抑制物(IκB)構(gòu)成復(fù)合物，在胞漿中為非活性狀態(tài)，刺激后易變至活性狀態(tài)，激活后NF-κB-IκBs復(fù)合物中NF-κB解離，侵入細(xì)胞核，結(jié)合靶基因，促使轉(zhuǎn)錄啟動。成活細(xì)胞中NF-κB抗凋亡效果明顯，研究發(fā)現(xiàn)，在子宮內(nèi)膜異位囊腫基質(zhì)細(xì)胞中核因子NF-κB活性存在增加現(xiàn)象，抗凋亡效果明顯。地諾孕素經(jīng)Bcl-2、NF-κB、Bcl-XL、p21Waf1/Cip1、p16INK4a等因子及NF-κB通路途徑阻滯卵巢巧克力囊腫間質(zhì)細(xì)胞增殖，抑制DNA合成，下調(diào)抗凋亡因子，阻滯囊腫間質(zhì)細(xì)胞周期，促使其凋亡，最終達到調(diào)節(jié)患者臨床癥狀，改善其預(yù)后[7]的目的。

綜上，地諾孕素治療子宮內(nèi)膜異位癥療效確切，值得臨床借鑒。

[1]康美霞,李進杰,游麗雅，等.左炔諾孕酮宮內(nèi)緩釋系統(tǒng)治療子宮內(nèi)膜異位癥的臨床觀察[J].中國醫(yī)師進修雜志,2011,34(12):15-17.

[2]孫麗華.子宮內(nèi)膜異位癥患者盆腔疼痛與病灶特點的相關(guān)性分析[J].山東醫(yī)藥,2013,53(26):66-67.

[3]朱焰,謝淑武,曹霖.新型孕激素及抗孕激素國外研發(fā)進展[J].中國新藥雜志,2011,20(19):1880-1885.

[4]陳良康,張培翼,陳海林，等.地諾孕素類似物的合成及其抑制黃體細(xì)胞的生物活性[J].生殖與避孕,2012,32(1):5-9.

[5]劉曉娟,張玉虹,王虹，等.地諾孕素對異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響及其機制研究[J].重慶醫(yī)學(xué),2014,43(33):4434-4435.

[6]周維維.高劑量地諾孕素治療子宮內(nèi)膜異位癥的療效及安全性評價[J].山東醫(yī)藥,2013,53(44):66-68.

[7]張玉虹，梁登輝，孫喜斌，等.地諾孕素治療子宮內(nèi)膜異位癥的機制分析[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2015，44(4)：400-402.

[責(zé)任編輯：李薊龍]

劉曉娟(1982-)，女，河北張家口人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤。

R 711.71

B

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.02.008

來稿日期：2016-11-16