比較兩種酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的結(jié)果

徐戰(zhàn)鋒

(濮陽市紅十字中心血站，河南 濮陽 457000)

比較兩種酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的結(jié)果

徐戰(zhàn)鋒

(濮陽市紅十字中心血站，河南 濮陽 457000)

乙肝表面性抗原；鉤狀效應(yīng)；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)

乙型肝炎是目前全球危害性嚴(yán)重的一種病毒性且具有傳染性的肝炎，流行性較廣。目前，我國是乙型肝炎的高流行區(qū)，約有10%～15%的正常人攜帶有乙型肝炎病毒[1]。乙肝表面抗原(HBsAg)是乙肝病毒在肝細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)產(chǎn)物，同時(shí)也是一種血清標(biāo)志物，是現(xiàn)在臨床上檢查乙肝病毒的主要檢測指標(biāo)之一[2]。酶聯(lián)免疫吸附法是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中檢測感染性疾病抗體/抗原的主要方法，具有操作簡便、反應(yīng)迅速、特異性強(qiáng)、重復(fù)性高、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。血液傳播是乙型肝炎最主要的傳播途徑，因此為了防止血液傳播，對于獻(xiàn)血者要根據(jù)“獻(xiàn)血者健康檢查要求”進(jìn)行乙肝表面抗原的篩查。在采用一步法檢測的過程中，往往會由于鉤狀效應(yīng)使抗原/抗體濃度較高的樣本出現(xiàn)假陰性或者漏檢的現(xiàn)象，從而增加了乙肝病毒經(jīng)血液傳播的風(fēng)險(xiǎn)[3]。本文通過采用兩種酶聯(lián)免疫吸附法對本血站收集的血液樣本中的HBsAg的檢測結(jié)果進(jìn)行分析，探討鉤狀效應(yīng)對一步法檢測HBsAg的影響，同時(shí)分析兩種方法的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究對象是濮陽市紅十字中心血站2015年5月～2016年5月采集的1 100份無償獻(xiàn)血者的血液樣本。將其作為本次研究的初檢實(shí)驗(yàn)材料，采用酶聯(lián)免疫吸附一步法與二步法的試劑盒進(jìn)行，所有試劑盒均購于北京萬泰生物藥業(yè)；選用全自動加樣系統(tǒng)(愛康A(chǔ)E280)進(jìn)行加樣，酶免分析采用全自動酶免系統(tǒng)(HAMILTON)。

1.2 方法

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者檢測情況

在本次檢測的過程中，采用酶聯(lián)免疫吸附一步法進(jìn)行檢測時(shí)，結(jié)果中有26例樣本呈現(xiàn)陽性，陽性率為2.36%；采用酶聯(lián)免疫吸附二步法檢測時(shí)有31例樣本呈現(xiàn)陽性，陽性率為2.82%，兩種方法測得的陽性率結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 兩組患者檢測陽性率情況比較(%)

2.2 5份可能存在鉤狀效應(yīng)的樣本經(jīng)稀釋后一步反應(yīng)檢測結(jié)果

表2 5份可能存在鉤狀效應(yīng)的樣本經(jīng)稀釋后一步反應(yīng)檢測結(jié)果

注：OD值表示吸光度值，“+”表示檢測結(jié)果為陽性，“-”表示檢測結(jié)果為陰性。

2.3 5份可能存在鉤狀效應(yīng)的樣本采用兩種方法檢測結(jié)果

采用兩種方法檢測5份可能存在鉤狀效應(yīng)的結(jié)果比較，具體數(shù)據(jù)見表3。

注：OD值表示吸光度值，“+”表示檢測結(jié)果為陽性，“-”表示檢測結(jié)果為陰性。

3 討論

乙型肝炎病毒的主要病原標(biāo)志物為乙肝病毒的表面抗原，酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)的一步法和二步法是檢測該病原標(biāo)志物最常用的方法[4]。目前我國用于乙型肝炎病毒的篩選和普查中的首選方法即為酶聯(lián)免疫吸附法，尤其對用于血站獻(xiàn)血員血液樣本的篩查意義重大。酶聯(lián)免疫吸附一步法檢測的優(yōu)勢在于其使用應(yīng)用方便，操作簡單，耗時(shí)較短，且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。但是在檢測過程中，由于待檢樣本和酶標(biāo)抗體同時(shí)存在于檢測系統(tǒng)中，當(dāng)所檢樣品中抗原/抗體濃度較高時(shí)，常常會出現(xiàn)競爭性抑制效應(yīng)的產(chǎn)生，進(jìn)而導(dǎo)致目標(biāo)結(jié)合物的濃度大大降低，出現(xiàn)顯色降低或者不顯色的現(xiàn)象。在一步反應(yīng)法檢測中由于這一限制性因素的存在，往往導(dǎo)致檢測結(jié)果受到鉤狀效應(yīng)的影響，發(fā)生假陰性的現(xiàn)象。酶聯(lián)免疫吸附二步法檢測與一步法相比，其主要的優(yōu)勢在于該方法提高了酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)的靈敏度，是該反應(yīng)在檢測過程中的檢測最低限度達(dá)到不超過0.1IU/mL，這樣可以減少酶聯(lián)免疫吸附一步反應(yīng)中鉤狀效應(yīng)對結(jié)果的影響[5]。對血站篩查獻(xiàn)血員的檢測而言，這樣可以減少因?yàn)榧訇幮远鴮?dǎo)致的乙型肝炎病毒經(jīng)過血液傳播的發(fā)生；同時(shí)對于臨床上的診斷檢測而言，可以降低因?yàn)槁z而出現(xiàn)錯(cuò)診和誤診的發(fā)生。

本文結(jié)果證實(shí)，在血站對大量樣本進(jìn)行篩查時(shí)，采用酶聯(lián)免疫吸附二步法進(jìn)行檢測乙肝表面抗原/抗體所得結(jié)果的準(zhǔn)確性要顯著高于采用酶聯(lián)免疫吸附一步法的檢測結(jié)果(P<0.05)。在采用酶聯(lián)免疫吸附一步法檢測乙肝表面抗原/抗體時(shí)需要考慮鉤狀效應(yīng)對檢測結(jié)果產(chǎn)生的影響。在對大量樣本進(jìn)行檢測時(shí)，為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，建議選擇酶聯(lián)免疫吸附二步法檢測或者對樣本進(jìn)行稀釋以消除鉤狀效應(yīng)，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)備度和靈敏度。另外，有研究資料顯示，在采用酶聯(lián)免疫吸附檢測時(shí)，在樣品孵育過程中進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼袷幰部杀苊忏^狀效應(yīng)的發(fā)生，這一觀點(diǎn)將在今后的實(shí)驗(yàn)中研究。

[1] 伍榮兵. 酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝五項(xiàng)結(jié)果的常見影響因素探討[J]. 按摩與康復(fù)醫(yī)學(xué)，2015(13): 108.

[2] 嚴(yán) 莉，彭宇生，龍 琴，等. 酶聯(lián)免疫技術(shù)在乙型肝炎表面抗原檢測中的應(yīng)用[J]. 國際病毒學(xué)雜志，2014, 21(4): 191-193.

[3] 靳四海. 酶聯(lián)免疫法檢測乙肝患者的血清標(biāo)志物的臨床價(jià)值分析[J]. 中國處方藥，2015, 13(5): 115.

[4] 王 彬. 微粒子酶聯(lián)免疫分析技術(shù)檢測乙肝兩對半的表現(xiàn)模式分析[J]. 現(xiàn)代醫(yī)院，2014, 14(3): 60-62.

[5] 張 龍，銀廣悅，武彩虹，等. 全自動酶聯(lián)免疫分析儀檢測乙肝核心抗體的加樣質(zhì)量控制[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2015,12(16): 2342-2343.

本文編輯：王 霞

徐戰(zhàn)鋒，男，主管技師，從事臨床輸血檢驗(yàn)工作

R446

B

1671-0126(2017)02-0032-03