高效液相色譜法測(cè)定逍遙丸中柴胡皂苷a、b2的含量

宿健桃，羅晉萍，崔宇宏

(1.山西廣譽(yù)遠(yuǎn)國(guó)藥有限公司，山西 太谷 030800；2.山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西 太原 030001)

·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

高效液相色譜法測(cè)定逍遙丸中柴胡皂苷a、b2的含量

宿健桃1，羅晉萍2，崔宇宏2

(1.山西廣譽(yù)遠(yuǎn)國(guó)藥有限公司，山西 太谷 030800；2.山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西 太原 030001)

逍遙丸；HPLC；含量測(cè)定；柴胡皂苷a、b2

逍遙丸為中國(guó)藥典2015年版收載品種。全國(guó)有190家生產(chǎn)企業(yè),為常用中成藥。柴胡為方中的君藥，具有疏肝解郁之功效。中國(guó)藥典2015年版該品種項(xiàng)下未對(duì)柴胡進(jìn)行定量控制。通過建立高效液相色譜法測(cè)定柴胡皂苷a、b2含量，方法準(zhǔn)確、可靠、簡(jiǎn)便，可實(shí)現(xiàn)更有效控制其質(zhì)量。

1 儀器與試藥

島津2010高效液相色譜儀；采用資生堂及島津C184.6 mm×250 mm,5 μm色譜柱，乙腈為色譜純,水為純化水,其他溶劑均為分析純。逍遙丸(生產(chǎn)批號(hào)110601，藥都制藥集團(tuán)股份有限公司)。柴胡皂苷a對(duì)照品(110777-201108)，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所；柴胡皂苷b2對(duì)照品(MUST-12041002)，購(gòu)于北京恒元啟天化工技術(shù)研究院—北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.2 波長(zhǎng)的選擇

參考中國(guó)藥典2010年版[1]柴胡項(xiàng)下，選擇210nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。柱溫：室溫；流速：1.0 mL/min。

2.3 提取時(shí)間的考察

取同一樣品5g(3份), 按照同供試品方法，超聲提取時(shí)間分別為20、40、60 min，制備成供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果以提取40 min提取完全且節(jié)能省時(shí)。不同提取時(shí)間柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2的含量見表1。

表1 不同提取時(shí)間的柴胡皂苷a、b2含量 mg/mL

2.4 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、對(duì)照品適量，分別加甲醇分別制成每1 mL含45 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.5 供試品溶液的制備與測(cè)定

取本品大蜜丸5 g,水丸和濃縮丸2.5 g，精密稱定，精密量取70%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 w，頻率33 kHz)40 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL,蒸干。殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次，20 mL/次，合并正丁醇液，繼用1%氫氧化鈉溶液洗滌2次，20 mL/次，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，20 mL/次，正丁醇液蒸干， 殘?jiān)蛹状际谷芙獠⒍ㄈ苤? mL量瓶中，搖勻，濾過，即得。

測(cè)定法[2]分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。(見圖1～2)

圖1 對(duì)照品Fig1 Reference Substance

圖2 供試品Fig2 Sample Substance

2.6 陰性試驗(yàn)(空白試驗(yàn))

取陰性樣品，按照同供試品方法制成陰性對(duì)照溶液并進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果在柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2峰相應(yīng)保留時(shí)間處無吸收峰，陰性無干擾(見圖3)。

圖3 陰性樣品Fig3 Negative

2.7 線性關(guān)系考察

取柴胡皂苷a對(duì)照品(0.045 5 mg/ mL)、柴胡皂苷b2對(duì)照品(0.046 7 mg/ mL),分別進(jìn)樣5、10、15、20、30、40 μL,分別測(cè)得其峰面積。以其進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算回歸方程：柴胡皂苷aY=3×10-6X+0.004 801,在0.227 5～1.820 0 μg呈良好的線性關(guān)系(r=0.999)(見表2)；柴胡皂苷b2Y=4×10-6X+0.010 024,在0.233 5～1.86 80 μg呈良好的線性關(guān)系(r=0.999)。見表3。

表2 柴胡皂苷a標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)列表

2.8 精密度試驗(yàn)

取同一份供試品溶液,重復(fù)測(cè)定6次。測(cè)定，結(jié)果柴胡皂苷a：RSD=1.80%；柴胡皂苷b2：RSD=2.55%。見表4。

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液,間隔一定時(shí)間測(cè)定一次。測(cè)定48 h，共測(cè)11份供試品溶液。結(jié)果柴胡供試品在48 h內(nèi)穩(wěn)定性見表5。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.10 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份,照供試品測(cè)定方法，依法測(cè)定。結(jié)果其重復(fù)性良好。見表6。

表6 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.11 加樣回收試驗(yàn)

精密量取本品10 mL9份，分別精密加入一定量的柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2對(duì)照品(柴胡皂苷a：2.275、2.700、3.640 μg/mL；柴胡皂苷b2：1.401、1.868、2.335 μg/mL)70%乙醇溶液50 mL各3份，照供試品法制備，依法測(cè)定。結(jié)果見表7，8。

表7 柴胡皂苷a加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表8 柴胡皂苷b2加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.12 耐用性試驗(yàn)

分別采用自裝柱日本富士填料，C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)。島津2010、waters2695-2996及島津Lc20A高效液相色譜儀進(jìn)樣，結(jié)果耐用性良好。

3 討論

本次研究同時(shí)對(duì)柴胡皂苷a、b2、d進(jìn)行測(cè)定，但柴胡皂苷d與其他雜質(zhì)成分分離度較差，經(jīng)改變提取方法及調(diào)整流動(dòng)相均未達(dá)到理想效果，故最終選定柴胡皂苷a和b2作為檢測(cè)指標(biāo)。

[1] 中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2015.

[2] 張光仁，嚴(yán)亨波，董秀芳，等.高效液相色譜測(cè)定丹梔逍遙丸中丹皮酚的含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2013(15)：46-67.

本文編輯：王知平

The Concentration of Saikosaponins a、b2 in Xiaoyao Wan Determined by HPLC

SU Jiantao1，LUO Jinping2，CUI Yuhong2

(1.ShanxiGuangyuyuanCountryMedicineLimitedCompany,Taigu030800，Shanxi,China; 2.ShanxiInstituteforFoodandDrugControl，Taiyuan030001，Shanxi,China)

xiaoyao wan; HPLC; concentration; saikosaponins a、b2

宿健桃，女，工程師，從事中成藥生產(chǎn)管理工作

R917

A

1671-0126(2017)02-0001-03