重慶市墊江地區(qū)高風(fēng)險(xiǎn)人群珠蛋白生成障礙性貧血檢出率及基因型分布

余登瓊,廖俐雅，張存亮，馬明炎，雷明容

(重慶市墊江縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 408300)

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重慶市墊江地區(qū)高風(fēng)險(xiǎn)人群珠蛋白生成障礙性貧血檢出率及基因型分布

余登瓊,廖俐雅△，張存亮，馬明炎，雷明容

(重慶市墊江縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 408300)

目的 研究重慶市墊江縣高風(fēng)險(xiǎn)人群珠蛋白生成障礙性貧血的發(fā)生率及基因型分布。方法 通過(guò)檢測(cè)該院門(mén)診、住院患者和孕前、產(chǎn)前檢查夫婦外周血的平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血高風(fēng)險(xiǎn)人群篩查，以紅細(xì)胞平均體積MCV<80 fL和/或MCH<27 pg/L作為高危人群判斷標(biāo)準(zhǔn)，篩選并收集2013年7月至2016年6月，年齡5個(gè)月至83歲珠蛋白生成障礙性貧血高危人群血液標(biāo)本，對(duì)其中404例用跨躍斷裂點(diǎn)PCR(Gap-PCR)及反向斑點(diǎn)膜條雜交技術(shù)(RDB)法進(jìn)行基因診斷，未檢查到常見(jiàn)突變者進(jìn)一步通過(guò)基因突變熱點(diǎn)測(cè)序、比對(duì)。結(jié)果 404人中檢出珠蛋白生成障礙性貧血168例(41.6%)，其中α-珠蛋白生成障礙性貧血77例(19.0%)，β-珠蛋白生成障礙性貧血89例(22.0%)，檢出β-珠蛋白生成障礙性貧血復(fù)合α-珠蛋白生成障礙性貧血雙重雜合子1例(0.25%)，β-珠蛋白生成障礙性貧血少見(jiàn)型[ⅣS-Ⅱ-81(C-T)]1例(0.25%)。結(jié)論 墊江縣高危人群中珠蛋白生成障礙性貧血總檢出率為41.6%，其中β-珠蛋白生成障礙性貧血檢出率明顯高于α-珠蛋白生成障礙性貧血。

珠蛋白生成障礙性貧血；高風(fēng)險(xiǎn)人群；檢出率；基因型分布

珠蛋白生成障礙性貧血又稱(chēng)地中海貧血(thalassemia)，是因某個(gè)或多個(gè)珠蛋白基因異常引起一種或一種以上珠蛋白鏈合成減少或缺乏，導(dǎo)致珠蛋白鏈比例失衡所引起的遺傳性溶血性疾病，以溶血、無(wú)效紅細(xì)胞生成及不同程度的小細(xì)胞低色素性貧血為特征[1-2]。輕型珠蛋白生成障礙性貧血可無(wú)或僅有輕度貧血，中重型患者生存質(zhì)量受到嚴(yán)重影響，重型可有嚴(yán)重貧血、肝脾腫大，全身水腫、骨骼改變等，最嚴(yán)重者可于妊娠30～ 40周宮內(nèi)死亡或產(chǎn)后數(shù)小時(shí)死亡，嚴(yán)重影響家庭和兒童生活質(zhì)量[1,3-5]。由于目前對(duì)珠蛋白生成障礙性貧血尚無(wú)有效根治方法，因此，本研究分析高危人群中珠蛋白生成障礙性貧血的發(fā)生率及基因型頒布，以期為遺傳咨詢(xún)、產(chǎn)前診斷，貧血患者的診斷及治療提供支持。

1 資料與方法

1.1 檢測(cè)對(duì)象 所有標(biāo)本來(lái)自2013年7月至2016年6月本院門(mén)診、住院患者和孕前、產(chǎn)前檢查夫婦，年齡5個(gè)月至83歲，用Sysmex XT-2000i血細(xì)胞分析儀進(jìn)行全血細(xì)胞分析，篩選出紅細(xì)胞平均體積(MCV)<80 fL和/或平均血紅蛋白含量(MCH)<27 pg/L的珠蛋白生成障礙性貧血高風(fēng)險(xiǎn)人群，收集高危人群血液標(biāo)本共404份。

1.2 試劑 使用深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供的珠蛋白生成障礙性貧血基因診斷試劑盒，按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 方法

1.3.1 缺失型α-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè) 用跨躍斷裂點(diǎn)PCR(Gap-PCR)法，將PCR產(chǎn)物在1．2%的瓊脂糖膠電泳，然后在紫外燈下觀察基因圖譜為1 800、2 000、1 600、1 300 bp的條帶,分別為α-珠蛋白正?；?，3．7缺失型，4．2缺失型，SEA缺失型的擴(kuò)增產(chǎn)物，即進(jìn)行3．7、4．2、SEA 3種缺失型的基因診斷。

1.3.2 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因及非缺失型α-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè) 采用單管多重PCR及反向斑點(diǎn)膜條雜交技術(shù)(RDB)法，檢測(cè)中國(guó)人較常見(jiàn)的β-珠蛋白生成障礙性貧血基因17種突變位點(diǎn)和α-基因QS、CS、WS 3種點(diǎn)突變類(lèi)型。

1.3.3 罕見(jiàn)型珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè) 表型陽(yáng)性而α-基因診斷試劑盒及RDB法未見(jiàn)基因型異常的樣品通過(guò)PCR擴(kuò)增α-珠蛋白基因的常見(jiàn)突變區(qū)域和β-珠蛋白全長(zhǎng)測(cè)序。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用EXCEL 2013軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié) 果

2.1 高危人群中珠蛋白生成障礙性貧血基因檢出情況 MCV<80 fL和/或MCH<27 pg/L的404例患者中，共檢出珠蛋白生成障礙性貧血患者168例，檢出率為41.6%。其中α-珠蛋白生成障礙性貧血77例(19.0%)，β-珠蛋白生成障礙性貧血89例(22.0%)，β-珠蛋白生成障礙性貧血復(fù)合α-珠蛋白生成障礙性貧血雙重雜合子1例(0.25%)，β-珠蛋白生成障礙性貧血少見(jiàn)型[ⅣS-Ⅱ-81(C-T)]1例(0.25%)。

2.2 α-珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布 168例珠蛋白生成障礙性貧血患者中單純攜帶α-珠蛋白生成障礙性貧血基因患者共77例(45.8%)。各基因型構(gòu)成比見(jiàn)表1。

表1 重慶市墊江縣α-珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布

2.3 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布 168例珠蛋白生成障礙性貧血患者中單純攜帶β-珠蛋白生成障礙性貧血基因患者共89例，構(gòu)成比為53.0%，共檢出9種突變類(lèi)型。以ⅣS-Ⅱ-654(C-T)、CD41-42(-TCTT)、 CD17(A-T)多見(jiàn)(表2)。

2.4 其他 168例珠蛋白生成障礙性貧血患者中檢出雙重雜合子1例，其基因型為β41-42βA/-α3.7/αα，構(gòu)成比0.6%。168例珠蛋白生成障礙性貧血患者中檢出少見(jiàn)基因型1例，其基因型為 ⅣS-Ⅱ-81(C-T) ，構(gòu)成比0.6%

表2 重慶市墊江縣β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布

3 討 論

珠蛋白生成障礙性貧血是溶血性貧血的常見(jiàn)病因[6-8]。本病呈世界性分布，多見(jiàn)于東南亞、地中海區(qū)域，我國(guó)西南、華南一帶為高發(fā)地區(qū)[9-13]。重慶市墊江縣位于西南部，本研究篩選出小細(xì)胞低色素貧血的高危患者用Gap-PCR及RDB進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)，其檢出率為41.6%，低于袁暉等[14]深圳地區(qū)的研究(50.7%)，符合我國(guó)兩廣地區(qū)發(fā)病率最高的趨勢(shì)。

在本縣404例高危受檢者中檢出珠蛋白生成障礙性貧血168例，檢出率為41.6%，β-珠蛋白生成障礙性貧血(22.0%)檢出率高于α-珠蛋白生成障礙性貧血(19.0%)，αβ復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血、β珠蛋白生成障礙性貧血少見(jiàn)型檢出率較低，各僅檢出1例(0.25%)。所有突變基因中，-SEA/αα型珠蛋白生成障礙性貧血在本地區(qū)檢出率最高，構(gòu)成比為75.3%，因此在高危人群中進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血篩查能有效減少Bart′s水腫兒出生概率，對(duì)于優(yōu)生優(yōu)育有重要意義[2]。

PCR及RDB珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)方法作為珠蛋白生成障礙性貧血的診斷方法，比較于傳統(tǒng)血紅蛋白電泳技術(shù)，能有效檢出靜止型α-珠蛋白生成障礙性貧血及β-珠蛋白生成障礙性貧血復(fù)合α-珠蛋白生成障礙性貧血雙重雜合子，減少漏診率，能為產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢(xún)提供更可靠的理論支持[8,15-16]。

珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)可作為貧血的鑒別診斷依據(jù)，對(duì)明確診斷的珠蛋白生成障礙性貧血患者制訂科學(xué)合理的個(gè)性化治療方案，避免無(wú)效用藥和盲目補(bǔ)鐵，減少患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和藥物造成的損害。

綜上所述,本縣屬于珠蛋白生成障礙性貧血高發(fā)地區(qū)，珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)在優(yōu)生優(yōu)育、遺傳咨詢(xún)及貧血鑒別診斷和治療中都有重要意義。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2017.13.035

余登瓊(1968-)，本科，副主任技師，主要從事臨床檢驗(yàn)工作?！?/p>

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1671-8348(2017)13-1832-03

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