2種高脂血癥大鼠模型比較

嚴(yán)家榮，王 弋，劉盛來，黃小瓊，李金鳳，鄺少松

（廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 佛山 528248）

·實(shí)驗(yàn)研究·

2種高脂血癥大鼠模型比較

嚴(yán)家榮，王 弋，劉盛來，黃小瓊，李金鳳，鄺少松

（廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 佛山 528248）

目的 比較2種高脂血癥大鼠的造模方法，為高脂血癥的預(yù)防和治療研究提供更理想的動(dòng)物造模方法。方法 2次試驗(yàn)中正常對(duì)照組、高脂飼料組、高脂高糖乳劑組SD大鼠連續(xù)造模40 d，其中正常對(duì)照組大鼠給予正常飼料喂養(yǎng)，高脂飼料組大鼠給予高脂飼料，高脂高糖乳劑組大鼠給予高脂高糖乳劑，造模結(jié)束后測定血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）以及肝臟病理組織學(xué)的變化。結(jié)果 與正常對(duì)照組相比，高脂飼料組TC，HDL－C，LDL－C水平均顯著升高（P＜0.01），高脂高糖乳劑組 TC，TG，HDL－C和 LDL－C均顯著升高（P＜0.01）；與高脂飼料組相比，高脂高糖乳劑組 TC，TG和LDL－C均顯著升高(P＜0.01)。病理組織學(xué)顯示，肝臟均產(chǎn)生彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性。結(jié)論 高脂高糖乳劑造模法更適用于制作混合型高脂血癥大鼠模型。

高脂血癥；動(dòng)物模型；造模方法；高脂飼料；高脂高糖乳劑

隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，生活水平的提升，高脂、高蛋白、高糖食物逐漸成為人們?nèi)粘Ｉ攀辰Y(jié)構(gòu)中的主要成分，同時(shí)，由于人們生活節(jié)奏快，運(yùn)動(dòng)量少，導(dǎo)致高脂血癥發(fā)病率高，且呈年輕化趨勢[1]，故如何防治高脂血癥成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。目前，國內(nèi)的高脂血癥動(dòng)物模型多采用高脂飼料喂養(yǎng)法和脂肪乳劑灌胃法制作，但此種模型大鼠血清三酰甘油（TG）的升高與否各文獻(xiàn)報(bào)道不一[2－5]。本試驗(yàn)中通過比較高脂飼料和高脂高糖乳劑2種造模方法對(duì)SD大鼠血清總膽固醇（TC）、TG、高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）的影響及肝臟病理組織學(xué)的差異，以求復(fù)制出理想的混合型高脂血癥大鼠模型?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試藥與儀器

動(dòng)物：SPF級(jí)雄性 Soraque－Daw ley大鼠 30只，150～170 g，來自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（粵）2008－0002。動(dòng)物飼養(yǎng)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房，試驗(yàn)合格證號(hào)SYXK（粵）2008－0002，并按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道關(guān)懷。

試藥：TC，TG試劑盒（北京康思潤業(yè)生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為101109，101108）；HDL－C，LDL－C試劑盒（北京北化康泰臨床試劑有限公司，批號(hào)分別為20110303，20110312）；吐溫80（天津福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)為20110706）；膽固醇和膽鹽（廣州威佳科技有限公司，批號(hào)分別為20110701，20110703）；精煉豬油（廣州市加益食品有限公司，批號(hào)為20110806）；丙硫氧嘧啶片（丙賽優(yōu)，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)為110301）；果糖（廣州威佳科技有限公司，批號(hào)為20110101）；蛋黃粉（南通康德生物制品有限公司，批號(hào)為20110105）。

儀器：BS－3000A型電子分析天平（感量0.1 g，上海友聲衡器有限公司）；Mikr020型臺(tái)式離心機(jī)（德國Hettich公司）；HWS－28型電熱恒溫水浴鍋，UV－2100型紫外分光光度計(jì)（廣州市正一科技有限公司）；TS－12N型生物組織全自動(dòng)脫水機(jī)，BM－Ⅶ型生物組織包埋機(jī)及冷凍機(jī)，CS－Ⅵ型攤片烤片機(jī)，RS－18型生物組織全自動(dòng)染色機(jī)（湖北孝感醫(yī)用儀器有限公司）；BX41型病理圖像分析系統(tǒng)（日本奧林巴斯公司）；ECHO全自動(dòng)血液生化分析儀（意大利Logotech公司）。

1.2 方法

1.2.1 造模配方

高脂飼料配方：取1%膽固醇，5%蛋黃粉，10%豬油，5%果糖，0.2%膽酸鈉，78.8%基礎(chǔ)飼料，充分混勻攪拌，壓成圓條狀，烘干，包裝成袋，經(jīng)輻照滅菌。

高脂高糖乳劑配方：取豬油20m L置200 m L的燒杯中，放在磁力攪拌器上加熱，待溫度升到100℃時(shí)，加入10 g膽固醇，溶化，加入1 g蛋黃粉，再加入1 g丙硫氧嘧啶片，充分?jǐn)噭颍缓蠹尤?0mL吐溫80，制成油相。同時(shí)在另一燒杯中加入40 m L蒸餾水、20 m L丙二醇和30 g果糖，放在電爐上加熱至60℃，然后加入2 g膽酸鈉，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙猓瞥伤?。然后將水相加入油相，充分混勻，即制成?0%豬油、10%膽固醇、2%膽酸鈉、1%蛋黃粉、1%丙硫氧嘧啶片和30%果糖的高脂高糖乳劑，分裝，置4℃冰箱保存，使用時(shí)用37℃水浴解凍灌胃[6]。

1.2.2 造模方法

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，分為3組，各10只。高脂飼料組(B組)大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)外，正常對(duì)照組(A組)、高脂高糖乳劑組(C組)大鼠均給予普通飼料喂養(yǎng)。除C組大鼠經(jīng)口灌服高脂高糖乳劑，其余大鼠均給予純凈水，按1 m L／kg體質(zhì)量給予，連續(xù)40 d。所有試驗(yàn)大鼠采血前禁食12 h，不禁水，分別于造模前、造模結(jié)束經(jīng)眼眶靜脈叢采血，3 000 r／min離心備用。造模結(jié)束后取肝臟組織于10%福爾馬林固定液中固定，進(jìn)行病理組織形態(tài)學(xué)檢查。

1.3 生化指標(biāo)檢測及病理血檢查

測定血清TC，TG，HDL－C，LDL－C含量；10%福爾馬林固定液中固定肝臟組織標(biāo)本，石蠟包埋切片，進(jìn)行蘇木素－伊紅(HE)染色，光鏡下觀察肝臟病理學(xué)改變。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 血脂變化

結(jié)果見表1?？梢?，與A組相比，B組造模后的TC，HDL－C，LDL－C水平均明顯提高（P＜0.01），TG水平明顯下降（P＜0.01）；與本組造模前相比，C組造模后的TC，LDL－C，TG，HDL－C水平造模后明顯提高（P＜0.01）。與B組相比，C組造模后的TC，TG，LDL－C水平均明顯提高（P＜0.01）。結(jié)果顯示，通過喂食高脂飼料和高脂高糖乳劑建立高脂血癥模型的方法可行，但該高脂飼料配方只能制作高膽固醇血癥型大鼠模型，而高脂高糖乳劑可以制作混合型高血脂大鼠模型。

表1 高脂血癥大鼠模型治療前后TC，TG，HDL－C，LDL－C的變化比較（±s，mmol／L，n＝10）

表1 高脂血癥大鼠模型治療前后TC，TG，HDL－C，LDL－C的變化比較（±s，mmol／L，n＝10）

注：與A組相比，▲P＜0.01；與B組相比，*P＜0.01。

TC TG HDL－C LDL－C組別A組B組C組造模前2.17±0.10 2.28±0.16 2.20±0.07造模40 d 2.57±0.22 5.58±0.24▲25.10±5.62▲*造模前0.90±0.12 0.92±0.09 0.88±0.13造模40 d 1.16±0.10 0.81±0.07▲1.56±0.11▲*造模前1.11±0.06 1.17±0.08 1.12±0.04造模40 d 1.44±0.12 3.35±0.14▲3.76±0.84▲*造模前0.95±0.05 0.99±0.04 0.97±0.03造模40 d 1.02±0.09 1.91±0.06▲19.20±4.30▲*

2.2 肝臟組織病理學(xué)觀察

肝細(xì)胞脂肪變性評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分，含脂滴的肝細(xì)胞散在稀少；1分，含脂滴的肝細(xì)胞≤1／4；2分，含脂滴的肝細(xì)胞＞1／4且≤1／2；3分，含脂滴的肝細(xì)胞＞1／2且≤3／4。詳見圖1。

肝臟HE染色結(jié)果：結(jié)果見表2?？梢?，與A組相比，B組和C組肝細(xì)胞脂肪變性評(píng)分有顯著差異（P＜0.01）。結(jié)果提示，2種造模方法均可引起肝細(xì)胞的脂肪變性。

3 討論

臨床根據(jù)人體內(nèi)血脂水平，主要將高脂血癥分為高膽固醇血癥(血清TC水平增高)、混合型高脂血癥(血清TC與TG水平均增高)、高三酰甘油血癥(血清TG水平增高)、低高密度脂蛋白血癥(血清HDL－C水平降低)。目前，試驗(yàn)中采用化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)高脂血癥模型主要通過喂食高脂飼料[7－9]或采用灌胃高脂乳劑[10－12]的方法進(jìn)行造模，但流行病學(xué)調(diào)查顯示，高脂血癥模型動(dòng)物血清中TG的升高主要與高糖飲食有關(guān)。

圖1 肝細(xì)胞脂肪變性評(píng)分病理圖(HE，×200)

表2 各組肝細(xì)胞脂肪變性評(píng)分情況(只)

本試驗(yàn)中分別采用了高脂飼料及高脂高糖乳劑方法制作高脂血癥模型，并嘗試比較2種造模方法的優(yōu)勢。由模型動(dòng)物治療前后的血生化數(shù)據(jù)可見，喂食高脂飼料的大鼠血清中TC，HDL－C，LDL－C值均有明顯升高，但TG不升反降，與文獻(xiàn)[5]的研究結(jié)果一致，表明喂食該配方的高脂飼料建立的高脂血癥模型比較適用于單純的高膽固醇血癥的研究中，不適用于高三酰甘油血癥研究。而食用高脂高糖乳劑的大鼠血清中TC，TG，HDL－C，LDL－C水平均明顯升高，表明高脂高糖乳劑灌胃法建立的高脂血癥動(dòng)物模型適用于高膽固醇血癥、混合型高脂血癥、高三酰甘油血癥的研究，也進(jìn)一步證明高糖有助于升高TG水平。故若要用高脂飼料制作混合型高血脂大鼠模型，可適當(dāng)提高飼料中糖的含量。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，采用高脂高糖乳劑制作高脂血癥大鼠模型，動(dòng)物血清中TC和LDL－C的增長幅度非常大，這易導(dǎo)致掩蓋藥物的治療效果。因此，若要降低高脂血癥大鼠模型血脂水平，可進(jìn)一步優(yōu)化高脂高糖乳劑的配方。丙硫氧嘧啶是甲狀腺的阻斷劑，通過抑制甲狀腺內(nèi)過氧化物酶，從而抑制甲狀腺激素的合成，影響脂質(zhì)代謝，促使TC和LDL－C增高，HDL－C降低，但丙硫氧嘧啶在造模過程中易損傷大鼠的肝臟和淋巴結(jié)，且降低大鼠的食欲及活動(dòng)，并不符合人類的正常代謝過程。為了更接近人類的飲食習(xí)慣，在改良高脂高糖乳劑配方的過程中，可嘗試選擇減少或不使用丙硫氧嘧啶，減少豬油和膽固醇的加入量，可用食用蔗糖代替果糖，植物油代替豬油。這樣的配方不僅貼近人類的飲食習(xí)慣，且降低了灌胃難度，不易損傷大鼠的食道或降低大鼠的食欲。試驗(yàn)進(jìn)程中發(fā)現(xiàn)，高脂高糖乳劑模型組大鼠體型偏瘦，且有輕微腹瀉情況，故為解決體質(zhì)量不增加的問題，還可在配方中考慮加入礦物質(zhì)或維生素C，增強(qiáng)模型大鼠的營養(yǎng)吸收，進(jìn)而提升體質(zhì)量。

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Com parison of Two M odels on Hyper lipidem ia of Rats

Yan Jiarong，Wang Yi，Liu Shenglai，Huang Xiaoqiong，Li Jinfeng，Kuang Shaosong
（Guangdong Medical Laboratory Animal Center，F(xiàn)oshan，Guangdong，China 528248）

Ob jective To compare two methods for the preparation of hyperlipidemia rat model，in order to provide a better animal model for the prevention and treatment of hyperlipidemia.M ethods In two experiments，the SD rats in normal control group，high fat group，and high fat and high sugar emulsion group were fed for 40 days.The rats in normal control group were fed with normal diet，the rats in high fat group were fed with high fat diet，and the rats in high fat and high sugar emulsion group were fed with high fat and high sugar emulsion diet.After the experiment，the TC，TG，HDL－C and LDL－C and liver histopathological changes were detected.Results Compared with the normal control group，the levels of TC，HDL－C，LDL－C in the highfat feed group were significant increased（P＜0.01），the levels of TC，TG，HDL－C and LDL－C in the high fat and high sugar emulsion group were significantly increased（P＜0.01）.Histopathology showed that livers had serious fatty change，it was evident that different degrees of diffuse liver cells of fatty degeneration.Conclusion The method of high fat and high sugar emulsion modeling was more suitable for the production of mixed hyperlipidemia model.

hyperlipidemia；animal model；modeling method；high fat diet；high fat and high sugar emulsion

R361＋.2

A

1006－4931(2017)08－0005－03

2017－01－15)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.08.002

廣東省中醫(yī)藥局資助項(xiàng)目[20122200]；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目[2013B060300033，2016A030303026]。

嚴(yán)家榮（1981－），男，碩士研究生，助理研究員，主要從事動(dòng)物疾病模型研究工作，（電子信箱）83711089＠qq.com。通

訊作者：鄺少松（1 9 7 3－），女，博士研究生，高級(jí)獸醫(yī)師，研究方向?yàn)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物藥理、毒理學(xué)，（電子信箱）k u a n g s s＠1 2 6.c om。