紫嬌花揮發(fā)油成分的GC睲S分析及抗氧化能力測定

何月秋 林立 杜甜鈿 黃艾

摘要： 采用水蒸氣蒸餾法和固相微萃取法提取紫嬌花不同部位的揮發(fā)油，結(jié)合氣相色譜—質(zhì)譜（GCMS）與計(jì)算機(jī)檢索聯(lián)用技術(shù)對其化學(xué)成分進(jìn)行分析和鑒定，用面積歸一化法測定各組分的相對含量，并對該揮發(fā)油清除DPPH·自由基能力和總抗氧化能力進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：紫嬌花揮發(fā)油具有成分及相對含量差異大、成分較簡單、化合物種類以含硫化合物為主的特點(diǎn)。兩種方法在紫嬌花不同部位揮發(fā)油中共檢測出了16種化學(xué)成分，以硫醚類和含硫烴類化合物為主，相對含量占總成分在80%以上，其中Disulfide， bis（2sulfhydrylethyl）含量最高，其余許多成分還具有一定的藥用價(jià)值。兩種方法所得到的揮發(fā)油化學(xué)成分具有一定的差異性，固相微萃取法對醇類、醛類和酯類物質(zhì)提取效果較好，而水蒸氣蒸餾法對含硫烴類、硫醚類和萜類的提取效果更好。實(shí)驗(yàn)條件下紫嬌花揮發(fā)油清除DPPH·自由基的IC50為17.46 mg·mL1，清除率可達(dá)54.86%；紫嬌花揮發(fā)油在相同條件下較L抗壞血酸具有更強(qiáng)的總抗氧化力。該研究結(jié)果為進(jìn)一步開發(fā)利用該植物資源提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 紫嬌花， 揮發(fā)油， 化學(xué)成分， 氣相色譜—質(zhì)譜（GCMS）， 抗氧化能力

中圖分類號： Q946.8

文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A

文章編號： 10003142（2017）05062707

Abstract： The essential oils of Tulbaghia violacea were obtained from different organs by steam distillation （SD） and solid phase microextraction （SPME）， which were analyzed by gaschromatographymass spectrometry （GCMS）， and the antioxidant activities of the essential oils were also investigated through the measurement of DPPH scavenging activity and total antioxidant capacity. The results showed that the compositions of the essential oils and their relative contents in different organs of T. violacea were significantly different， and totally sixteen compounds were indentified through two methods. Most of the ingredients in volatile oil were sulfide or sulfur compounds， accounting for more than 80% of the total composition， and the relative content of Disulfide， bis（2sulfhydrylethyl）was the highest. Some consitituents of the essential oils were valuable for pharmaceutical and for the production of spices. SPME was more effective for extraction of alcohols， aldehydes and esters， and SD was better for sulfur， sulfide and terpenoids extraction. IC50 for the essential oils on scavenging DPPH was 17.46 mg·mL1 and the scavenging rate against DPPH free radicals could reach 54.86%. The essential oils of T. violacea maintained higher antioxidant capacity than Lascorbic acid. Our analysis on the compositions and their relative contents of essential oils in T. violacea provides the information for further utilization of this plant.

Key words： Tulbaghia violacea， essential oil， chemical constituents， GCMS， antioxidant capacity

紫嬌花（Tulbaghia violacea），別名野蒜或非洲小百合，原產(chǎn)于南非，為石蒜科（Amaryllidaceae）多年生常綠球根花卉，株高45～60 cm，葉狹長線形，花紫紅色，觀賞價(jià)值極高，在我國主要用于園林綠化（何月秋等，2010）。紫嬌花在南非為當(dāng)?shù)刂匾膫鹘y(tǒng)藥用植物（Van Wyk & Wink，2004），被用于治療呼吸道感染、支氣管炎、咳嗽、哮喘、胃潰瘍以及肺結(jié)核等疾?。╒an Wyk & Wink，2004；Hutchings et al，1996）。近年來，有研究揭示了紫嬌花更多方面的藥用價(jià)值（Olorunnisola et al，2011）。Raji et al（2010）研究表明紫嬌花可用于治療高血壓和心臟病。紫嬌花的乙醇提取液對于糖尿病的治療具有潛在應(yīng)用價(jià)值（Van Huyssteen et al， 2011）。在抗癌藥物研究中，Lyantagaye（2013）發(fā)現(xiàn)紫嬌花葉片提取物具有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的作用。在對動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的研究中，Olorunnisola（2012）研究表明紫嬌花根莖的甲醇提取物可有效防止高脂飲食引起的主動(dòng)脈病變、酶的消耗性腎小球硬化和肝損傷，原因可能是提取物中含有高抗氧化性成分。同時(shí)，紫嬌花的揮發(fā)性成分也具有良好的抑菌效果（Bull et al，2005；Ncube et al，2012），特別是對金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和草綠色鏈球菌（S. viridians）的一些耐藥性菌株具有明顯的抑制效果，而對HEK293和HepG2細(xì)胞株系的毒害作用則較小，表明該植物揮發(fā)油在抗生素藥物開發(fā)中具有重要價(jià)值（Soyingbe，2013）。

目前，國內(nèi)外有關(guān)植物揮發(fā)油研究的報(bào)道越來越多（周紅艷，2014；Kezemi et al，2011；ValeSilva et al，2010），許多植物揮發(fā)性成分的藥用價(jià)值也不斷被發(fā)現(xiàn)（Chiara et al，2010；Kadri et al，2011）。然而，有關(guān)紫嬌花揮發(fā)油成分的研究報(bào)道還不多（Soyingbe，2013）。本研究擬對紫嬌花揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行成分鑒定和相對含量分析，并研究其抗氧化能力，以期為今后紫嬌花的開發(fā)利用提供一定的參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1 材料、儀器和試劑

2015年8月于寧波奉化市采集當(dāng)?shù)卦灾驳淖蠇苫?，?jīng)過寧波植物園徐絨娣副教授鑒定并確認(rèn)。取其根、鱗莖、葉片、花瓣以及花梗等為實(shí)驗(yàn)材料，剪切后備用；乙酸乙酯為HPLC級，無水硫酸鈉、DPPH、無水乙醇、L抗壞血酸均為AR級。

7890A/5977型GCMS聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；手動(dòng)SPME進(jìn)樣器（美國Supelco公司），萃取頭為100 μm聚二甲基硅烷（PDMS），配50 μL硅膠墊螺紋口樣品瓶（Supelco公司）；電熱恒溫水浴鍋（上海璽恒實(shí)業(yè)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 水蒸氣蒸餾提取及GCMC操作根據(jù)《中國藥典》2005年版一部附錄XD揮發(fā)油測定甲法，準(zhǔn)確稱取200 g切碎的材料于1 000 mL圓底燒瓶中進(jìn)行水蒸氣蒸餾，得到特殊氣味黃色油狀液體，重復(fù)操作后混合所得提取物，用乙酸乙酯進(jìn)行萃取和純化，取上層溶液加入足量無水硫酸鈉除去水分；剩下的溶液過濾膜除盡雜質(zhì)后進(jìn)行GCMS操作。

氣相色譜條件：色譜柱為HP5MS毛細(xì)石英柱（30 m × 0.25 mm × 0.25 μm）；自動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣量1 μL，氣體流速為1.0 mL·min1；進(jìn)樣口、連接口溫度250 ℃；柱溫初始溫度為40 ℃，保持1 min，以20 ℃·min1的速度升至100 ℃，保持1 min，再以6 ℃·min1的速度升到225 ℃。

質(zhì)譜條件：離子源EI；電離能70 eV；離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃；質(zhì)量掃描范圍15～500 amu；溶劑延遲時(shí)間為2 min。通過工作站的NIST圖譜庫進(jìn)行初步檢索，結(jié)合相關(guān)研究（林琳等，2008；鄭福平等，2009）確定化合物成分，并根據(jù)峰面積歸一化法計(jì)算每種成分的相對含量。

1.2.2 SPME萃取及GCMC操作將固相微萃取裝置的萃取頭插入氣相色譜的進(jìn)樣口中，在250 ℃條件下老化30 min；同時(shí)，取切碎的紫嬌花材料3 g放入50 mL樣品瓶中，加入5 g的NaCl后蓋上蓋子；將老化好的萃取頭插入樣品瓶中，萃取頭與樣品保持1 cm的距離，40 ℃水浴恒溫40 min；拔出萃取頭，插入氣相色譜進(jìn)樣口，250 ℃條件下解析5 min，再以與水蒸氣提取物相同的GCMS條件進(jìn)行揮發(fā)物的成分和相對含量分析。

1.2.3 清除DPPH自由基能力測定以紫嬌花整株為材料，通過水蒸氣蒸餾法得到揮發(fā)油，共提取10次，計(jì)算得油率為0.11%（V/W）。按Simelane et al（2007）和趙金偉等（2010）的方法測定紫嬌花揮發(fā)油對DPPH的清除作用。配制不同濃度樣品醇溶液，分別取1 mL樣品液與1 mL濃度為18 μg·mL1的DPPH乙醇（95%）溶液混合，避光條件放置2 h，以不加精油樣品的DPPH乙醇液為對照，在波長517 nm處測定各溶液的吸光度，平行測定3個(gè)樣。

自由基清除率（%）=（1-Ai/A0） × 100%。

式中，A0為t=0時(shí)空白樣的吸光度，Ai為t=2 h時(shí)樣品的吸光度。以L抗壞血酸為對照物。

1.2.4 總抗氧化活性的測定參考盧賽賽等（2015）的方法，利用FRAP法進(jìn)行揮發(fā)油抗氧化活性的測定，并以L抗壞血酸為對照。用70%乙醇溶解得到100～1 000 μmol·L1的FeSO4溶度，根據(jù)FRAP法加入工作液并在37 ℃下放置10 min，在593 nm測其吸光度值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。濃度與吸光度形成良好線性關(guān)系（R2 = 0.994），擬合方程y=0.000 8x+0.031，表明將吸光度值換算成樣品的FeSO4濃度的方法是可行的。

用70%乙醇稀釋揮發(fā)油至30%濃度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法測定樣品吸光度值，以1.0 mmol·L1 FeSO4為標(biāo)準(zhǔn)，樣品抗氧化活性以達(dá)到同樣吸光度所需FeSO4濃度表示，F(xiàn)eSO4濃度越大表示抗氧化能力越強(qiáng)。以100 mg·L1的L抗壞血酸為對照物。

2結(jié)果與分析

2.1 揮發(fā)油成分分析

利用兩種方法提取紫嬌花不同部位揮發(fā)性成分并進(jìn)行GCMS分析，得到總離子色譜圖（圖1為紫嬌花葉片揮發(fā)油總離子色譜圖）。利用NIST圖譜庫共鑒定出了16種化合物，包含有醇（2種）、酯（1種）、酸（2種）、醛（1種）、萜烯（1種）、烷烴（6種）以及硫醚類化合物（3種）。根據(jù)峰面積歸一化法計(jì)算各化合物的相對含量。結(jié)果見表1。

水蒸氣蒸餾和固相微萃取兩種方法在紫嬌花葉片、花瓣、鱗莖以及根中分別檢測到了12種、11種、12種和10種化學(xué)物質(zhì)。葉片揮發(fā)油中相對含量較高的成分有Disulfide， bis（2sulfhydrylethyl）、三（甲基硫代）甲烷、2，3，5三硫雜己烷、二甲基二硫和巰基乙酸等。花瓣揮發(fā)油種類與葉片相當(dāng)，但不含有二甲基三硫醚和（甲硫基）乙酸2種成分。鱗莖和根中相對含量較高的成分也是Disulfide， bis（2sulfhydrylethyl）、三（甲基硫代）甲烷、2，3，5三硫雜己烷、二甲基二硫和Methane， （methylsulfinyl）（methylthio）等，但不含巰基乙酸、苯甲醇和壬醛，而含有花和葉中沒有的順馬鞭草烯醇、Bicyclo [5.1.0]octane， 8methylene和17Norkaur15ene等成分。通過水蒸氣蒸餾得到的紫嬌花花梗揮發(fā)油中含有8種成分，相對含量較高的有Disulfide， bis（2sulfhydrylethyl）（65.071%）、三（甲基硫代）甲烷（16.251%）和2，3，5三硫雜己烷（6.833%）等。

2.2 兩種提取方法比較

結(jié)合水蒸氣蒸餾法和固相微萃取法，在紫嬌花不同部位共檢測到了16種成分，其中水蒸氣蒸餾產(chǎn)物中檢測到了13種成分，SPME萃取物中檢測到了14種成分，兩種方法得到的揮發(fā)油成分較相似，但各成分的相對含量有較大的差異（表2）。兩種方法檢測到相對含量最高的成分都為硫醚類，其次是含硫的烴類，兩類成分占揮發(fā)油總量的80%以上，而萜類、酯類、醇類、醛類和酸類等成分含量較少。相比而言， SPME法對醇類、醛類和酯類顯示出了更好

的吸附性，而水蒸氣蒸餾法則對含硫烴類、硫醚類和萜類的提取效果更好。

2.3 清除DPPH自由基能力

紫嬌花揮發(fā)油對DPPH自由基的清除率隨揮發(fā)油濃度的增加而不斷提高（圖2），當(dāng)濃度為20 mg·mL1時(shí)，清除率達(dá)到53%。隨著揮發(fā)油量的繼續(xù)增加，清除率略有上升，最終達(dá)54.86%。相比而言， L抗壞血酸清除DPPH自由基的能力更高，在濃度為20 mg·mL1時(shí)，清除率在85%以上。在0～20 mg·mL1范圍內(nèi)，揮發(fā)油和L抗壞血酸用量都與DPPH清除率成線性關(guān)系，得到兩者清除率（Y）與揮發(fā)油體積（X）的回歸方程分別為Y=2.220X+11.230（R2 = 0.972）， Y=4.365X+3.783（R2=0.969）。對數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸擬合分析后得到紫嬌花揮發(fā)油的IC50為17.46 mg·mL1，L抗壞血酸IC50為10.59 mg·mL1，表明紫嬌花揮發(fā)油清除DPPH自由基能力低于L抗壞血酸。

2.4 總抗氧化能力

紫嬌花揮發(fā)油的總抗氧化能力隨加樣量的增加而增強(qiáng)（圖4），在加樣體積為100 μL時(shí)，紫嬌花揮發(fā)油對應(yīng)的FeSO4濃度為L抗壞血酸在加樣體積下的1.3倍?？梢娮蠇苫〒]發(fā)油的總抗氧化能力（FRAP值）比該濃度下的L抗壞血酸強(qiáng)。

3討論

本研究中，紫嬌花的揮發(fā)油共鑒定到16種成分，以含硫的硫醚類和烴類成分為主，含有少量的酸類、醛類、醇類和萜類等物質(zhì)，該結(jié)果與Soyingbe et al（2013）的結(jié)果相似。但是，Soyingbe et al（2013）研究表明紫嬌花的根莖揮發(fā)物中二甲硫基甲烷的相對含量較高，達(dá)51.04%， Olorunnisola et al（2012）對南非東開普敦紫嬌花根莖揮發(fā)油的研究表明二甲硫基甲烷的相對含量為11.35%，而本研究中二甲硫基甲烷在根和莖中相對含量分別只有0.567%和0.421%，該結(jié)果可能為不同氣候條件或生長階段差異所致。本研究得到紫嬌花揮發(fā)油中含量最高成分為Disulfide， bis（2sulfhydrylethyl），目前關(guān)于該物質(zhì)的研究不多，有關(guān)其應(yīng)用也不明確。此外，揮發(fā)油中還含有二甲硫基甲烷、乙酸芐酯、二甲基三硫醚等成分，在食品工業(yè)中使用較多，可用于香料（張洪亮等，2003）。揮發(fā)油中還含有二甲基二硫等具有抗菌、殺蟲等功效成分。紫嬌花揮發(fā)油中豐富的含硫類成分也使其具有類似于大蒜的氣味（MartinezVelazquez et al，2011）。

清除DPPH自由基的能力和總抗氧化能力都可作為抗氧化活性的評價(jià)指標(biāo)之一（盧賽賽等，2015）。FRAP結(jié)果顯示紫嬌花揮發(fā)油的總抗氧化能力較強(qiáng)，可能是由于紫嬌花揮發(fā)油中存在對Fe2+具有較強(qiáng)螯合能力的成分，減少了Fe2+的氧化。Soyingbe et al（2013）對紫嬌花的研究中發(fā)現(xiàn)其揮發(fā)油對NO自由基的清除效果也非常顯著。而本研究中紫嬌花揮發(fā)油對DPPH自由基的清除作用卻較差，清除能力不如等濃度的L抗壞血酸，且具有飽和型特征，表明紫嬌花揮發(fā)油對自由基的清除具有選擇性。紫嬌花揮發(fā)油清除自由基作用可能與其硫醚類物質(zhì)含量較高有關(guān)，硫醚類物質(zhì)可通過分解過氧化物達(dá)到抗氧化的作用（李炎等，1994）。近年來，硫醚類物質(zhì)憑借其高效低毒的特性已在西方發(fā)達(dá)國家的食品行業(yè)中得到了廣泛應(yīng)用。紫嬌花中硫醚類成分較高，在天然抗氧化劑方面具較大的開發(fā)價(jià)值。

4結(jié)論

紫嬌花揮發(fā)油具有相對含量差異大、組成成分簡單和硫醚類成分含量高等特點(diǎn)，其中含量最高的成分為Disulfide， bis（2sulfhydrylethyl），萜類、酸類和醇類等成分較少，其中許多成分可用抗菌藥物、香精香料和天然抗氧化劑的制作。紫嬌花揮發(fā)油總抗氧化能力較高，但對DPPH自由基清除作用不如等濃度L抗壞血酸強(qiáng)，清除DPPH自由基的IC50為17.46 mg·mL1。紫嬌花揮發(fā)油對不同自由基的清除作用具有選擇性。

參考文獻(xiàn)：

BULL C， KEYSER Z， KLAASEN J， et al， 2005. Screening of Tulbaghia violacea and Tulbaghia simmleri plant extracts as antifungal agents against the fumonisin producing strain， Fusarium verticillioides MRCS26 [J]. S Afr J Sci， 101（7）： 314.

CHIARA B， ANNELOES M， MOREL N， et al， 2010. Vasorelaxant activity of essential oils from Croton zambesicus and some of their constituents [J]. Plant Med， 76（14）： 1506-1511.

HE YQ， ZHU ZY， ZHANG FT， 2010. Buds culture of Tulbaghia violacea in vitro and system establishment of plant regeneration [J]. Northern Hortic， （16）： 151-154. [何月秋，祝志勇，章豐濤，2010. 紫嬌花花蕾離體培養(yǎng)及再生體系的建立 [J]. 北方園藝，（16）： 151-154. ]

HUTCHINGS A， SCOTT AH， LEWIS G， et al， 1996. Zulu medicinal plants. An inventory [M]. Scottsville： University of Natal Press.

KADRI A， INES BC， ZIED Z， et al， 2011. Chemical constituents and antioxidant activity of the essential oil from aerial parts of Artemisia herba Alba grown in Tunisian semiarid region [J]. Afr J Biotechnol， 10（15）： 2923-2929.

KAZEMI M， MOHAMMAD D， ABOLFAZI D， et al， 2011. Composition， antimicrobial and antioxidant activities of the essential oil of Artemisia Kermanensis Podl.， an endemic species from Iran [J]. J Med Plant Res， 5（18）： 4481-4486.

LI Y， JIN ZL， 1994. Study on the antioxidant effect and safety of sulfur ether [J]. Chin Oils Fats， 19（2）： 28-31. [李炎，金正林， 1994. 硫醚類物質(zhì)對油脂的抗氧化作用和安全性研究 [J]. 中國油脂， 19（2）： 28-31. ]

LIN L， JIANG HZ， LUO LQ， et al， 2008. GCMS analysis of the volatile oil from Bulbus allii Macrostemonis extracted by supercritical carbon dioxide [J]. Chin J Analy Lab， 27（1）： 115-117. [林琳，蔣合眾，羅麗勤，等，2008. 薤白揮發(fā)油成分的超臨界CO2萃取及GCMS分析 [J]. 分析試驗(yàn)室， 27（1）： 115-117. ]

LU SS， XU F， WANG HF， et al， 2015. Extraction and antioxidant activities of total flavonoids from Myrica rubra leaves [J]. J Fruit Sci， 32（3）： 460-468. [盧賽賽，許鳳，王鴻飛，等，2015. 楊梅葉中總黃酮提取及其抗氧化能力研究 [J].果樹學(xué)報(bào)，32（3）： 460-468. ]

LYANTAGAYE SL， 2013.MethylaDglucopyranoside from Tulbaghia violacea extract induces apoptosis in vitro in cancer cells [J]. Bangl J Pharmacol， 8： 93-101.

MARTINEZVELAZQUEZ M， ROSARIOCRUZ R， CASTILLOHERRERA G， et al， 2011. Acaricidal effect of essential oils from Lippia graveolens （Lamiales：Verbenaceae）， Rosmarinus officinalis （Lamiales： Lamiaceae）， and Allium sativum （Liliales： Liliaceae） against Rhipicephalus （Boophilus） microplus （Acari： Ixodidae） [J]. J Med Entomol，48（4）： 822-827.

NCUBE B， FINNIE JF， VAN STADEN J， 2012. In vitro antimicrobial synergism within plant extract combinations from three South African medicinal bulbs [J]. J Ethnopharmacol， 139（1）： 81-89.

OLORUNNISOLA OS， BRADLEY G， AFOLAYAN AJ， 2011. Antioxidant properties and cytotoxicity evaluation of methanolic extract of dried and fresh rhizomes of Tulbaghia violacea [J]. Afr J Pharm Pharmacol， 5（22）： 2490-2497.

OLORUNNISOLA OS， BRADLEY G， ANTHONY J， et al， 2012. Protective effect of Tulbaghia violacea Harv. on aortic pathology，tissue antioxidant enzymes and liver damage in dietinduced atherosclerotic rats [J]. Int J Mol Sci， 13： 12747-12760.

SIMELANE MBC， LAWAL OA， DJAROVA TG， et al， 2010. In vitro antioxidant and cytotoxic activity of Gunnera perpensa L. （Gunneraceae） from South Africa [J]. J Med Plants Res， 4（21） ： 2181-2188.

SOYINGBE OS， OYEDEJI AO， BASSON AK， et al， 2013. Chemical composition， antimicrobial and antioxidant properties of the essential oils of Tulbaghia violacea Harv L.F. [J]. Afr J Microbiol Res， 7（18）： 1787-1793.

RAJI IA， MUGABO P， OBIKEZE K， 2010. Effect of Tulbaghia violacea on the blood pressure and heart rate in male spontaneously hypertensive Wistar rats [J]. J Ethnopharmacol， 140 （1）： 98-106.

VALESILVA LA， GONCALVES MJ， CAVALEIRO C， et al， 2010. Antifungal and activity of the essential oil of Thymus xviciosoi against Candida， Cryptococcus， Aspergillus and Dermatophyte species [J]. Plant Med， 76（9）： 882-888.

VAV HUYSSTEEN M， MILNE PJ， CAMPBELL EE， et al， 2011. Antidiabetic and cytotoxicity screening of five medicinal plants used by traditional African health practitioners in the Nelson Mandela Metropole， South Africa [J]. Afr J Trad Compl Altern Med， 8（2）： 150-158.

VAN WYK BE， GERICKE N， 2000. Peoples plants： a guide to useful plants of Southern Africa [M]. Pretoria： Brizza Publications： 351.

VAN WYK BE， WINK M， 2004. Medicinal plants of the world [M]. South Africa： Briza Publications.

ZHANG HL， WANG MY， 2003. Synthesis and rcfincmcnt of bcnzyl acctatc as pcrfumcs [J]. J Wuxi Voc lnst Comm Technol， 3（4）：11-13. [張洪亮，王茂元，2003. 香料乙酸芐酯的合成和精制 [J]. 無錫商業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)， 3（4）： 11-13. ]

ZHAO JW，LI JW， ZHANG X， 2010. Antioxidant activity study of phenolic compounds from pingguoli pear peels [J]. Food Sci， 31（17）： 170-172. [趙金偉，李范洙，張先，2003. 蘋果梨酚類物質(zhì)抗氧化活性研究 [J]. 食品科學(xué)， 31（17）： 170-172. ]

ZHENG FQ， SUN BG， LIU YP， et al， 2009. Analysis of volatlies in salted flowers of wild Chinese Chive by simultaneous distillation and extraction with Gas ChromatographyMass Spectrometry [J]. Food Sci， 30（22）： 247-249. [鄭福平，孫寶國，劉玉平，等，2009. 同時(shí)蒸餾萃取氣質(zhì)聯(lián)機(jī)分析腌漬野韭菜花香成分 [J].食品科學(xué)， 30（22）： 247-249. ]

ZHOU HY， 2014. Extraction of volatile oil from Barbadoslily amaryllis root and leaves and composition comparison [J]. J Hubei Univ Nat， 32（3）： 285-288. [周紅艷， 2014. 朱頂紅根和葉部揮發(fā)油提取與成分對比分析 [J]. 湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)， 32（3）： 285-288. ]

HSIEH CL， TSENG MH， PAN RN， et al， 2011. Labdanecaryophyllic acid， a novel cytotoxic C35 terpenoid from Calocedrus macrolepis var. formosana [J]. Tetrahedron Lett， 52 （4）： 515-517.

MOSMANN T， 1983. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival： Application to proliferation and cytotoxicity assays [J]. J Imm Methods， 65 （1）： 55-63.

POPOVA MP， CHINOU IB， MAREKOV IN， et al， 2009. Terpenes with antimicrobial activity from Cretan propolis [J]. Phytochemistry， 70 （10）： 1262-1271.

REED LJ， MUENCH H， 1938. A simple method of estimating fifty percent endpoints [J]. Am J Hyg， 27 （3）： 493-497.

REN XY， YE Y， 2006. Labdane diterpenes from the seeds of Platycladus orientalis [J]. J Asian Nat Prod Res， 8 （8）： 677-682.

SU WC， FANG JM， CHENG YS， 1994. Labdanes from Cryptomeria japonica [J]. Phytochemistry， 37 （4）： 1109-1114.

WANG L， WANG SY， WU XD， et al， 2013. Study on chemical compositions of Calocedrus macrolepis [J]. J Kumming Med Univ， 34 （7）： 8-11. [王蕾， 王雙燕， 吳興德， 等， 2013. 翠柏的化學(xué)成分研究 [J]. 昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 34 （7）： 8-11.]

WU XD， HE J， LI XY， et al， 2013. Diterpenoids from the twigs and leaves of Fokienia hodginsii [J]. J Nat Prod， 76（6）： 1032-1038.

WU XD， WANG SY， WANG L， et al， 2013. Labdane diterpenoids and lignans from Calocedrus macrolepis [J]. Fitoterapia， 85（1）： 154-160.

YANG XL， LIU D， BIAN K， et al， 2013. Study on in vitro antiinflammatory activity of total flavonoids from Glycyrrhizae radix et Rhizoma and its ingredients [J]. Chin J Chin Mat Med， 38（1）： 99-104. [楊曉露， 劉朵， 卞卡， 等， 2013. 甘草總黃酮及其成分體外抗炎活性及機(jī)制研究 [J]. 中國中藥雜志， 38（1）： 99-104.]