和厚樸酚mPEG—PLA聚合物納米膠束的研究

鐘慧　吳敏敏　胡沫靈　李丹丹　呂立華

以單甲氧基聚乙二醇（mPEG）一外消旋聚乳酸（PLA）為載體制備包栽和厚樸酚的納米膠束新劑型，觀察膠束的形貌，測(cè)定膠束的平均粒徑、載藥量、藥物包封率及進(jìn)行體外釋藥實(shí)驗(yàn)。研究表明，所制備的和厚樸酚膠束呈規(guī)則球狀，膠束平均粒徑達(dá)納米級(jí)，膠束的體外釋藥具有緩釋特性。

和厚樸酚（Honokiol，HNK）是從我國(guó)傳統(tǒng)中藥厚樸（Magnolia officinalis Rehd.et Wil動(dòng)中提取出來(lái)帶有烯丙基的連苯二酚類化合物，具有抗菌，抗氧化，抗炎，抗心律失常，抗癲病，抑制肌肉收縮等作用。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分化、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和抗腫瘤血管形成等藥理作用。HNK在抗腫瘤方面的療效和機(jī)制成為大家研究的熱點(diǎn)。HNK對(duì)誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和腫瘤血管形成等作用較強(qiáng)。然而，由于該藥難溶于水，生物利用度低，進(jìn)而限制了其在臨床上的使用。因此，為了增強(qiáng)藥物的水溶性，提高其生物利用度，研究和厚樸酚的給藥系統(tǒng)具有重要意義。

本文研究的抗腫瘤藥物和厚樸酚納米新劑型，屬于緩釋給藥系統(tǒng)的一種新劑型。利用聚合物膠束可以將藥物包裹在直徑為納米級(jí)的微粒中，這種微型結(jié)構(gòu)類似細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)入人體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬而激活機(jī)體的自身免疫系統(tǒng)，并改變被包封藥物在體內(nèi)的分布，從而達(dá)到被動(dòng)靶向作用。使藥物主要在腫瘤組織中釋放，減少藥物在達(dá)到有效部位前被破壞，延長(zhǎng)藥物的半衰期從而達(dá)到延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間以及降低毒副作用，進(jìn)而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量的目的。本文通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的探究，以期制得抗腫瘤藥物和厚樸酚納米新劑型藥物，進(jìn)而為探索治療某些惡性腫瘤的新方案奠定基礎(chǔ)。

材料與方法

儀器

FA1204B電子天平（上海精密儀器儀表有限公司）；UV-2450紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津）；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；透析袋（分子量8000-14000，北京索萊寶科技有限公司）；激光粒度儀（英國(guó)馬爾文zs90）；200kV高分辨透射電子顯微鏡（JEM-2100日本光學(xué)電子）；SYC-15恒溫水浴槽（南京桑力電子設(shè)備廠）。

試劑

單甲氧基聚乙二醇一外消旋聚乳酸共聚物（相對(duì)分子質(zhì)量比為：5000：10000，以下簡(jiǎn)稱：m PEG5000-PLA10000，濟(jì)南岱罡生物工程有限公司）；和厚樸酚（對(duì)照品98%，中國(guó)生物制品有限公司）；透析袋（8000～14000，北京索萊寶科技有限公司）；丙酮；95%乙醇；乙二胺四乙酸二鈉；碳酸氫鈉；氯化鈉；氯化鉀；磷酸氫二鈉；磷酸二氫鉀；氫氧化鈉（以上未標(biāo)注試劑均為分析純）。

方法

和厚樸酚的光譜掃描和標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密稱取和厚樸酚對(duì)照品配成對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，用作為空白對(duì)照。經(jīng)紫外分光光度計(jì)初測(cè)和精測(cè)結(jié)果顯示和厚樸酚在276處的吸光度為。精密量取一定體積的上述和厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)液，在276處調(diào)零，分別測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，溶液中和厚樸酚的濃度c為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1，得回歸方程Y=0.0229X+0.0545，R=0.996，表明和厚樸酚在0-82.6μg/m L與吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

膠束制備實(shí)驗(yàn)。選取m PEG5000-PLA10000的兩嵌段共聚物為載體，在室溫下用丙酮為溶劑分別采用溶劑蒸發(fā)法制備空白膠束和和厚樸酚載藥膠束。

空白膠束的制備：用有機(jī)溶劑溶解精密稱取的m PEG-PLA，以每分鐘兩滴的速度加入用磁力攪拌器不斷攪拌的20ml雙蒸水中，在室溫下抽真空冷凝蒸發(fā)約1h，除去有機(jī)溶劑得到聚合物藥物膠束溶液。

和厚樸酚膠束的形態(tài)分布觀察用雙氧鈉負(fù)染法制樣，對(duì)膠束進(jìn)行了顯微形態(tài)觀察。取1滴膠束混懸液滴于蠟片上，將噴碳銅網(wǎng)放于試液上（膜面向上），30s后取出銅網(wǎng)，用濾紙小片從銅網(wǎng)邊緣吸出多余液體。然后按照上述同樣的方法，將銅網(wǎng)放在染液滴雙氧鈉上約1rain，同樣用濾紙小片從銅網(wǎng)邊緣吸干多余染液，將此銅網(wǎng)放入電鏡即可觀察。

和厚樸酚膠束的平均粒徑采用激光粒度儀測(cè)量納米膠束的平均粒徑，首先將和厚樸酚膠束用蒸餾水稀釋成膠束溶液，倒入樣品室，根據(jù)測(cè)試情況控制調(diào)節(jié)超聲時(shí)間、速度及離心泵的循環(huán)速度，進(jìn)行測(cè)量。

圈2和厚樸戩聚合物納米膠束的粒徑

結(jié)果

膠束的形態(tài)與結(jié)構(gòu)所得膠束形態(tài)，如圖2，膠束呈規(guī)則球形，具核殼結(jié)構(gòu)，殼層由mPG-PLA兩親性嵌段構(gòu)成，親油性PLA鏈段向內(nèi)包裹和厚樸酚形成膠束的核，親水性m PG鏈段向水相伸展形成膠束殼層，從而使載藥膠束很好地分散于水相。

實(shí)驗(yàn)條件對(duì)和厚樸酚膠束的影響用粒徑分析儀檢測(cè)和厚樸酚膠束的粒度，其平均粒徑主要分布于76.2-162.8 nm之間，粒徑大小符合要求，適合進(jìn)一步研究。

討論

實(shí)驗(yàn)表明和厚樸酚在0-83.6μg/mL濃度間與吸光度呈現(xiàn)線性關(guān)系。采用以丙酮為有機(jī)溶劑，m PEG5000-PLA10000為載體制備出的和厚樸酚納米膠束的形態(tài)呈規(guī)則球形，平均粒徑在76.2-162.8 nm之間。在模擬體內(nèi)經(jīng)過(guò)一定時(shí)間之后釋放率相對(duì)傳統(tǒng)劑型更加理想，這克服了傳統(tǒng)和厚樸酚藥物無(wú)法在血管內(nèi)滯留并達(dá)到有效藥物濃度、無(wú)法到達(dá)特定的治療目標(biāo)等缺點(diǎn)。具有一定的應(yīng)用前景。