探討Stathmin對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移的作用研究

張子旸，廖 欣，王啟峰

（1.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 牡丹江 157011；2.黑龍江省牡丹江市第二人民醫(yī)院，黑龍江 牡丹江 157013）

卵巢癌為女性常見(jiàn)的一種生殖系統(tǒng)惡性腫瘤疾病，病死率位居?jì)D科腫瘤之首。由于卵巢組織解剖結(jié)構(gòu)、內(nèi)分泌功能復(fù)雜，患者發(fā)病早期的臨床癥狀并不明顯，因此在早期診斷和鑒別上具有較大難度[1]。為提高卵巢癌患者的早期確診率，國(guó)內(nèi)研究學(xué)者一直在尋找能夠輔卵巢癌早期診斷的生化標(biāo)志物。Stathmin是一種高度保守的微管解聚蛋白。近年來(lái)已有研究發(fā)現(xiàn)該蛋白在多種癌細(xì)胞中呈高表達(dá)。本研究主要探討Stathmin在卵巢癌細(xì)胞增殖、粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用，現(xiàn)進(jìn)行以下報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

人卵巢癌細(xì)胞：從新鮮的卵巢癌病理標(biāo)本中采集。

主要儀器和試劑：酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司）、Transwell小室（購(gòu)自美國(guó)Millipore公司）、DMEM培養(yǎng)液（購(gòu)自Gibco公司）、胰蛋白酶（購(gòu)自Gibco公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及Stathmin檢測(cè)

將人卵巢癌細(xì)胞株放置于含有10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，使用0.25%的胰蛋白酶進(jìn)行消化，按實(shí)驗(yàn)研究所需細(xì)胞密度進(jìn)行接種。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)癌細(xì)胞中Stathmin的表達(dá)，以單個(gè)視野下10%細(xì)胞Stathmin陽(yáng)性為分界值，判定Stathmin表達(dá)高于10%為高表達(dá)組，≤10%為低表達(dá)組。

1.2.2 增殖能力檢測(cè)

采用MTT法檢測(cè)癌細(xì)胞的增殖能力，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)周期的細(xì)胞，接種于96孔板中，每個(gè)孔的細(xì)胞濃度為5×103/個(gè)，培養(yǎng)24h后，在每個(gè)孔中加入150μl DMSO，低速震蕩10min，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm波長(zhǎng)處，測(cè)量各個(gè)孔的吸光值，重復(fù)測(cè)量3次后，計(jì)算細(xì)胞增值率。

1.2.3 粘附能力檢測(cè)

采用MTT法檢測(cè)癌細(xì)胞的粘附能力，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)周期的細(xì)胞，接種于96孔板中，常規(guī)培養(yǎng)24h后，使用PBS小心清洗，將未粘附的細(xì)胞去除，在每孔中加入100μl 10%小牛血清，振蕩10min，在酶聯(lián)儀波長(zhǎng)490nm處測(cè)出各吸光度值，計(jì)算細(xì)胞黏附率。

1.2.4 侵襲能力檢測(cè)

采用Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力，將細(xì)胞接種于直徑6cm的小皿中，培養(yǎng)24h后，離心，取上清液，計(jì)算5個(gè)視野的穿膜細(xì)胞平均數(shù)，計(jì)算細(xì)胞侵襲率。

1.2.5 轉(zhuǎn)移能力檢測(cè)

采用細(xì)胞劃痕修復(fù)試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞，接種于24孔板中，每孔細(xì)胞濃度為1×106/個(gè)，培養(yǎng)24h后，用100μl微量移液槍頭在24孔板內(nèi)直線劃痕，然后更換培養(yǎng)液，去除脫落細(xì)胞，在鏡下觀察，根據(jù)愈合程度評(píng)價(jià)細(xì)胞的遷移能力。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組細(xì)胞的增殖能力、黏附能力、轉(zhuǎn)移能力和侵襲能力。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

為采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，進(jìn)行t 檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

高表達(dá)組細(xì)胞培養(yǎng)后24h的增殖率、黏附率、轉(zhuǎn)移率、侵襲率較低表達(dá)組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組細(xì)胞培養(yǎng)后24h的增殖率、黏附率、轉(zhuǎn)移率、侵襲率比較（ ±s）

表1 兩組細(xì)胞培養(yǎng)后24h的增殖率、黏附率、轉(zhuǎn)移率、侵襲率比較（ ±s）

組別 增殖率（%） 黏附率（%） 轉(zhuǎn)移率（%） 侵襲率（%）高表達(dá)組 14.15±2.40 0.26±0.08 5.96±1.05 1.29±0.20低表達(dá)組 10.90±2.34 0.11±0.03 4.54±0.98 1.58±0.18 t 4.336 7.851 4.421 4.820 P 0.000 0.000 0.000 0.000

3 討 論

近年來(lái)不斷有研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)，Stathmin在惡性腫瘤疾病乳腺癌、前列腺癌、肺癌細(xì)胞中有較高表達(dá)，但尚無(wú)較多關(guān)于卵巢癌細(xì)胞中Stathmin表達(dá)特征及臨床意義的研究[2]。本研究檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，卵巢癌細(xì)胞中也有Stathmin表達(dá)，為明確Stathmin對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、黏附、轉(zhuǎn)移、侵襲能力的影響，本研究根據(jù)Stathmin表達(dá)水平的高低對(duì)培養(yǎng)的人卵巢癌細(xì)胞進(jìn)行分組，比較兩組細(xì)胞培養(yǎng)24h后的增殖率、黏附率、轉(zhuǎn)移率、侵襲率，結(jié)果顯示高表達(dá)組細(xì)胞上述指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果均高于低表達(dá)組，表明Stathmin的高表達(dá)能夠提高卵巢癌細(xì)胞的增殖、黏附、轉(zhuǎn)移、侵襲能力。深入分析Stathmin高表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、黏附、轉(zhuǎn)移、侵襲能力的影響機(jī)制可能為為：Stathmin的作用靶點(diǎn)為微管蛋白，其磷酸化水平與微管的平衡狀態(tài)及細(xì)胞周期轉(zhuǎn)換均存在密切關(guān)系，當(dāng)正常細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂期時(shí)，Stathmin的磷酸化水平開(kāi)始增強(qiáng)，活性逐漸降低，繼而會(huì)促進(jìn)細(xì)胞退出有絲分裂期，阻礙正常細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移[3]。

綜上所述，本研究得出Stathmin高表達(dá)能夠增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞增殖、黏附、轉(zhuǎn)移、侵襲能力，促進(jìn)患者疾病發(fā)展。同時(shí)也提示可將該指標(biāo)作為卵巢癌預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)。但由于現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外醫(yī)療領(lǐng)域關(guān)于該方面的課題研究較少，因此本次研究所得結(jié)果仍需日后開(kāi)展更多實(shí)踐研究進(jìn)行驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉包欣子,王瑞平,鄒 璽,等.常春藤皂苷元對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo增殖、粘附、侵襲和遷移能力的影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,29(1):44-47.

[2] 韓海英,張培彤,王耀焓,等.川芎嗪聯(lián)合丹參酮ⅡA對(duì)人肺巨細(xì)胞癌PG-BE1、PG-LH7細(xì)胞增殖、黏附及侵襲的影響[J].中國(guó)腫瘤,2016,25(9):728-733.

[3] 戴海萍,朱國(guó)華,吳麗麗,等.LPXN過(guò)表達(dá)對(duì)THP-1細(xì)胞增殖、粘附和侵襲的影響及其機(jī)制研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2017,25(3):673-677.