HPLC法測定玉葡萄根中兒茶素的含量

逯珍花

【摘要】目的：建立高效液相色譜法定量測定玉葡萄根中兒茶素。方法：玉葡萄根甲醇提取液，采用Agilent ZORBAX Extend-C18柱（46mm×250mm，5μm），流動相為乙腈-01%磷酸水溶液（10：90）；體積流量：10mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm。結(jié)果：兒茶素在 01998～19980μg（r=09997）范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，平均回收率為9932%，RSD為083%。結(jié)論：本方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，可以較好的測定兒茶素。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；玉葡萄根；兒茶素

【中圖分類號】R2841【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）07-0026-03

Determination Catechin of Root of Ampelopsis Delavayana by HPLC

LU Zhenhua

Tianshui Combine Traditional Chinese and Western Medicine Hospital，Tianshui 741020，China

Abstract：Objective To establish a method for determining catechin of root of Ampelopsis delavayana by HPLC.Methods Theanalysis of A.delavayana methanolic extract was carried out on Agilent ZORBAX Extend-C18 column（46mm×250mm，5μm）with acetonitrile-01% phosphoric acid aqueous （10：90）as mobile phase，flow rate wsa 10mL/min，column temperature was maintained at 30℃，and detection wavelength was set at 280 nm.Results catechin was 01998～19980μg（r=09997），respectively，The average recoveries were 9932%（RSD 083%）.Conclusion The method is simple，accurate and candeterminecatechin.

Keywords：HPLC；Root of Ampelopsis Delavayana；Catechin

中藥材“玉葡萄根”為葡萄科蛇葡萄屬多年生攀援藤本植物三裂蛇葡萄 Ampelopsis delavayana （Franch） Planch的根，別名肥豬藤、鳥血藤、三裂蛇葡萄、萬初牛、赤木通、野葡萄根、金剛散、綠葡萄、玉葡萄、耳墜果、野葡萄、五爪金等。其味澀、微苦，溫，歸肝、腎、膀胱、大腸經(jīng)。臨床用于跌打損傷、骨折、燒傷、燙傷、腸炎腹瀉、尿澀尿痛、小便淅瀝[1]，在骨折方面效果很好，能顯著減輕患者的炎癥和疼痛，并對骨折的愈合有促進作用[2]。玉葡萄根廣范分布于云南省各地[3]，近年來，對于該屬的藥用植物研究較多。在化學(xué)成分研究方面，其化合物類型有黃酮類、低聚茋類、酚酸類、甾醇類、萜類、揮發(fā)油等，主要為黃酮類、低聚茋類化合物、酚酸類化合物[4-5]。但對于玉葡萄根的化學(xué)成分和含量測定研究很少。根據(jù)筆者對玉葡萄根化學(xué)成分的研究結(jié)果，擬以從中分離得到的含量較高的兒茶素作為對照品，建立高效液相色譜含量測定方法，作為玉葡萄根質(zhì)量控制的含量檢測指標(biāo)。

1儀器與材料

11儀器LC-2010AHT高效液相色譜儀（四元泵、脫氣單元、UV檢測器、柱箱/帶制冷、自動進樣器、系統(tǒng)控制器、CLASS-VP， 日本島津）；色譜柱：Agilent ZORBAX Extend-C18柱（46mm×250 mm，5μm），AUW1200型分析天平（日本島津）。

12試藥兒茶素（批號：110877-201102，中國藥品生物制品檢定所 ）。乙腈為色譜純，水為超純水（自制），其他試劑均為分析純。

玉葡萄根（批號：20110602，新平縣大開門 ；批號：20110605，石屏縣龍朋鎮(zhèn)；批號：20110620，楚雄州祿豐縣；批號：20110621，大理市巍山巍寶山；批號：20110625，昆明市廠口鄉(xiāng)；批號：20110810，麗江市永勝縣；批號：20110825，彌渡縣密祉鄉(xiāng)； 批號：20110910，大理市巍山大倉； 批號：20110915，祿勸撒營盤鄉(xiāng)；批號：20110928，尋甸縣狗街）粉末（過50目篩），十批藥材均為自采。分別經(jīng)楊樹德教授、趙仁主任藥師、譚文紅副主任藥師鑒定為葡萄科蛇葡萄屬植物三裂蛇葡萄Ampelopsis delavayana （Franch） Planch的根（玉葡萄根）。

2方法與結(jié)果

21色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX Extend-C18柱（46mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈（A）-01%磷酸水溶液（B）（10∶90），等度洗脫；體積流量：10mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm；進樣量：5μL。

22對照品溶液的制備精密稱定兒茶素對照品002498g，加入甲醇使溶解，定容至25mL容量瓶中。制成含兒茶素01998mg/mL的溶液，作為對照品溶液，備用。

23供試品溶液的制備取樣品粉末（過50目篩）2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30min，放至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，吸取上清液，用微孔濾膜（045μm）濾過，作為供試品溶液。

在“21”項色譜條件下，分別精密吸取“22”項下對照品溶液和“23”項下供試品溶液各5μL，注入HPLC色譜儀進行測定。結(jié)果，兒茶素與相鄰組分基線完全分離，峰形良好，保留時間為81min.

24線性關(guān)系考察分別精密吸取“22”項下對照品溶液1、2、4、6、8、10μL，按“21”項色譜條件進行測定，記錄峰面積積分值，以兒茶素進樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進行回歸分析，計算出回歸方程及檢測范圍。結(jié)果，兒茶素的回歸方程為Y=778958X+39755，r=09997。表明兒茶素在01998～19980μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

25精密度試驗精密吸取“22”項下對照品溶液5μL，連續(xù)進樣6次測定，結(jié)果，兒茶素的RSD=056%，表明儀器精密度良好。

26重復(fù)性試驗取同一批次藥材（批號：20110910）6份，按“23”項下方法平行制備供試品溶液進行測定。結(jié)果，兒茶素的RSD=274 %，說明該方法重復(fù)性良好。

27穩(wěn)定性試驗精密稱取藥材（批號：20110910）20g，按23項下方法制備供試品溶液。對放置不同時間（0、2、4、8、12h）的供試品溶液分別進行測定。結(jié)果，兒茶素的RSD=055%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

28加樣回收率試驗取已知含量的同一批藥材（批號：20110910）6份，每份約1g，精密稱定，分別精密加入相同量的兒茶素對照品，按“23”項下方法制備供試品溶液，并測定其含有量，結(jié)果見表1。由表可知，該方法加樣回收率良好。

3討論

10批不同產(chǎn)地玉葡萄根中兒茶素含量的測定，平均為034%。從樣品采集時間分析，集中在6～9月，不會對兒茶素含量產(chǎn)生明顯影響。從樣品來源地理分布分析，玉葡萄根藥材中的兒茶素含量，依次升高，順序為：大理市巍山巍寶山、楚雄州祿豐縣、石屏縣龍朋鎮(zhèn)、麗江市永勝縣、新平縣大開門和尋甸縣狗街、大理市巍山大倉、彌渡縣密祉鄉(xiāng)、昆明市廠口鄉(xiāng)和祿勸撒營盤鄉(xiāng)。大理市巍山巍寶山產(chǎn)含量最低，昆明市廠口鄉(xiāng)和祿勸撒營盤鄉(xiāng)產(chǎn)玉葡萄根中含量較高。從上述分析結(jié)果得出初步結(jié)論，不同產(chǎn)地對玉葡萄根藥材和飲片中兒茶素含量的影響較大。以測定所得中值，平均為030%，按70%計算，將玉葡萄根藥材和飲片含量限度暫定為：本品按干燥品計算，含兒茶素（C15H14O6）不得少于021%。本試驗采用HPLC法測定玉葡萄根中兒茶素的含量，為今后更深入的研究玉葡萄根提供參考。

參考文獻

[1]云南省食品藥品監(jiān)督管理局. 云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（第二冊 彝族藥[BF]）[[BFQ]S].昆明：云南科技出版社，2005： 45-46.

[2]劉曉波，劉曉正，晏彩芬，等.玉葡萄根耐缺氧作用的研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志， 2007， 28 （11）： 39-40.

[3]陳燕，梁敬鈺. 蛇葡萄屬藥用植物的研究進展[J].海峽藥學(xué)，2009， 21 （3）：5-7.

[4]He GX，Pei G，Zhou TD，et al，Determination of total flavonoids and dihydromyricetin in Ampelopsis grossedentala （Hand-Mazz） W. T. Wang[J]. China journal of Chinese materia medica，2000， 25 （7）： 423-425.

[5]Du Q，Chen P， Jerz G，et al.Preparative separation of flavonoid glycosides in leaves extract of Ampelopsis grossedentata using high-speed counter-current chromatography[J]. J Chromatogr A，2004， 40 （1）：147-149.