細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2A/2B基因和妊娠糖尿病的關(guān)系

李麗賢 許曼

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)指妊娠期孕婦首次發(fā)現(xiàn)或發(fā)生的糖代謝異常，經(jīng)口服糖耐量試驗檢查確認，已被WHO列為獨立的糖尿病的類型之一[1]。隨著人們生活水平的提高，以及孕期的運動量減少，調(diào)查顯示，GDM的發(fā)生率呈現(xiàn)逐年增加的趨勢，嚴重危害母嬰的健康[2]。關(guān)于GDM的病因目前尚未完全闡明，可能與遺傳因素、炎癥因子以及胰島素抵抗等有關(guān)[3]。

研究證實，2型糖尿病具有遺傳異質(zhì)性，且發(fā)現(xiàn)多個發(fā)病的相關(guān)基因，文獻報道，這些發(fā)病基因的多態(tài)性與GDM有著顯著的相關(guān)性[4]。其中細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2A/2B基因(cyclin dependent kinaseinhibitor，CDKN2A/2B)是兩個臨近的細胞周期蛋白依賴性激酶抑制基因，CDKN2A/2B過度表達可引起胰腺β細胞復(fù)制的調(diào)節(jié)劑CDK4的減少，繼而引起胰腺發(fā)育不全和糖尿病的發(fā)生[5]。本文就CDKN2A/2B和GDM的相關(guān)性做進一步的探討，為GDM的治療提供理論依據(jù)。

資料與方法

一、臨床資料

選取本院2014年12月—2015年12月收治的GDM患者56例(GDM組)進行研究，所有孕婦均滿足以下任意一種情況：(1)糖化血紅蛋白≥6.5%；(2)空腹血糖≥7.0 mmol/L；(3)口服葡萄糖耐量試驗血糖≥11.1mmol/L；(4)典型高血糖或高血糖危象。同時選取正常糖耐量(血糖<11.1mmol/L)孕婦108例(正常組)以及2型糖尿病患者98例(T2DM組， T2DM組患者符合2型糖尿病診斷標準[6])。三組患者的年齡、平均孕周比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，資料具有可比性。

表1 三組患者基本資料比較

二、方法

1.基因檢測：所有受試者均空腹8 h以上，于清晨進行統(tǒng)一采集外周靜脈血4 ml，按照Trion試劑盒(型號：X-100，規(guī)格：100ml，生產(chǎn)廠家：北京索萊寶科技有限公司)的說明書以及外周血白細胞DNA提取標準操作規(guī)程進行DNA的提取，采用PCR-RFLP方法對各組受試者外周血CDKN2A/2B基因分布頻率進行觀察。本組實驗所有試劑均由本院研究所統(tǒng)一提供，測定和檢測均由同一人進行操作。

2.統(tǒng)計學(xué)處理：應(yīng)用SPSS17.0 軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料采用均數(shù)±標準差表示，計數(shù)資料采用χ2檢驗，組間進行t檢驗。采用Person檢驗進行相關(guān)性分析，并設(shè)定顯著性水平為P<0.05。

結(jié) 果

一、 三組受試者CDKN2A/2B的TT、TC、CC三種基因型分布頻率比較

三組受試者中CDKN2A/2B基因rsl0811661位點均存在于TT、TC、CC三種基因型。TT基因分布頻率，GDM和T2DM組顯著高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；而GDM組和T2DM組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。CC分布頻率，正常組顯著高于GDM組和T2DM組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；GDM和T2DM組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。三組TC分布頻率相似，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

表2三組受試者CDKN2A/2B的TT、TC、CC三種基因型分布頻率比較[例(%)]

組別例數(shù)TTTCCC正常組10815(139)47(435)46(426)GDM組5618(321)?24(429)14(25．0)?T2DM組9832(327)?42(429)24(248)?

注：與正常組相比，*P<0.05

二、 三組受試者rsl0811661危險等位基因T的分布頻率比較

正常組等位基因T的分布頻率顯著低于GDM組和T2DM組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但GDM組與T2DM組間的基因型和等位基因頻率分布相近，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。

表3三組受試者rsl0811661危險等位基因T的分布頻率比較[例(%)]

組別例數(shù)等位基因T分布頻率正常組10837(343)GDM組5633(589)?T2DM組9859(602)?

注：與正常組相比，*P<0.05

三、CDKN2A/2B基因和GDM相關(guān)性分析

相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，rsl0811661危險等位基因T與GDM具有顯著的相關(guān)性(r=4.227，P<0.05)。

討 論

目前，對于GDM的發(fā)病易感基因的研究有著顯著的突破，研究發(fā)現(xiàn)，易感基因?qū)τ贕DM的早期診斷和干預(yù)有著極其重要的作用，不但減輕母嬰結(jié)局的不良影響，也降低了婦女妊娠后2型糖尿病的發(fā)生風(fēng)險。

近年來，隨著科學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)CDKN基因已成為當(dāng)今腫瘤的研究熱點，細胞周期是細胞生命活動的重要部分，其相關(guān)激酶及抑制酶在細胞周期的調(diào)控中起著關(guān)鍵性的作用[7]。相關(guān)研究證實[4-7]，GDM患者中存在多個發(fā)病的相關(guān)基因，，這些發(fā)病基因的多態(tài)性與GDM有著顯著的相關(guān)性。其中CDKN2A/2B是兩個臨近的細胞周期蛋白依賴性激酶抑制基因，當(dāng)CDKN2A/2B過度表達時，其胰腺β細胞復(fù)制的調(diào)節(jié)劑CDK4顯著減少，從而誘發(fā)妊娠期糖尿病[8]。

本文通過對CDKN2A/2B基因在GDM、T2DM以及正常孕婦中的表達情況進行分析比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CDKN2A/2B基因rsl0811661位點均存在于TT、TC、CC三種基因型上，GDM和T2DM組的TT基因分布頻率顯著高于正常孕婦組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；但GDM和T2DM組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。正常組等位基因T的分布頻率(34.3%)顯著低于GDM組(58.9%)和T2DM組(60.2%)，GDM和T2DM組分別與正常組比較，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義；但GDM組與T2DM組間的基因型和等位基因頻率分布相近，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。這說明CDKN2A/2B基因rsl0811661位點存在基因多態(tài)性，其T等位基因可能為GDM的風(fēng)險等位基因[9]。為進一步探討CDKN2A/2B基因與GDM的相關(guān)性，本文對其基因表達和GDM的相關(guān)性采用Person進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)rsl0811661危險等位基因T與GDM具有顯著的相關(guān)性。這說明CDKN2A/2B基因可能是GDM的易感基因之一，或者為GDM和T2DM共同的易感基因[10]。

1 Diagnostic criteria and classification of hyperglycaemia first detected in pregnancy.Geneva,Switzerland:World Health Organization,2013.

2 申微,郭欣,區(qū)小牧.新診斷標準妊娠期糖尿病妊娠結(jié)局觀察.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2012,6:3090-3092.

3 International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups，Consensus Panel，Metzger BE，et al.International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups recommendations on the diagnosis and classification of hyperglycemia inpregnancy.Diabetes Care,2010,33:676-682.

4 Cho YM，Kim TH，Lim S，et al.Type 2 diabetes-associated genetic variantsdiscovered in the recent genome-wide association studies are related to gestationaldiabetes mellitus in the Korean population.Diabetologia,2009,52:253-261.

5 陳友,江芳華,徐叢榮,等.新診斷標準下妊娠糖尿病篩查分析.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2013,34:3083-3084.

6 Takeuchi F，Serizawa M，Yamamoto K，et al.Confirmation of multiple risk Lociand genetic impacts by a genome-wide association study of type 2 diabetes in the Japanese population.Diabetes,2009,58:1690-1699.

7 侯旭奔,方浩,杜金童,等.細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的臨床研究進展.中國新藥雜志,2011,20:1280-1286.

8 Xu M,Bi Y,Xu Y,et al.Combined effects of 19 common variations on type 2diabetes in Chinese:results from two community-based studies.PLoS One,2010,5:el4022.

9 Shin HD,Park BL,Shin HJ.Association of KCNQ1 polymorphisms with thegestational diabetes mellitus in Korean women.J Clin Endocrinol Metab,2010,95:445-449.

10 Moritani M,Yamasaki S,Kagami M.Hypoplasia of endocrine and exocrinepancreas in homozygous transgenic TGF-betal.Mol Cell Endocrinol,2015,229:175-184.