RP—HPLC法測(cè)定復(fù)方威麥靈膠囊中巖白菜素的含量

朱正華++?；ㄆG++羅敏

【摘要】目的：建立反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測(cè)定復(fù)方威麥靈膠囊中巖白菜素含量的方法。方法：采用ODS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×46mm，5um）；以乙腈-水（15∶85）為流動(dòng)相，流速為10mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm。結(jié)果：巖白菜素濃度在209～2094μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=09998，平均回收率為9880%（RSD為065%）。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于復(fù)方威麥靈膠囊中巖白菜素的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】復(fù)方威麥靈膠囊；巖白菜素；反相高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R914【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）04-0027-03

Determination of Bergenin in Compound Wei Mailing Capsules by RP-HPLCZHU ZhenghuaBAO HuayanLUO Min

Yunnan qujing city food and drug inspection test center，Qujing 655000，ChinaAbstract：Objective To establish high performance liquid chromatography（HPLC） determination of bergenin in compound Wei Mailing capsulesMethod The determination was performed on ODS HYPERSIL C18（250mm×46mm，5μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（15∶85，V/V）at the flow rate of 10 ml/min The column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was set at 275nmResults The linear range of bergenin were 209～2094 μg（r=09998）with an average recovery of 9880%（RSD=065%）.Conclusions The method is simple， the result is accurate and reliableIt can be used for the determination of bergenin in compound Wei Mailing capsules

Keywords：Compound Wei Mailing Capsules； Bergenin；RP-HPLC

復(fù)方威麥靈膠囊是曲靖市第一人民醫(yī)院研制的院內(nèi)制劑。由金蕎麥、巖白菜素、絞股藍(lán)組成，具有祛邪扶正、清熱解毒、活血化瘀、消瘀散結(jié)、鎮(zhèn)咳祛痰的功效，臨床用于咳嗽、慢性支氣管炎、肺膿瘍，肺癌等癥，配合放化療有增效減毒作用。制劑中巖白菜素具有鎮(zhèn)咳祛痰功效，臨床用于慢性支氣管炎。復(fù)方威麥靈膠囊現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中以化學(xué)鑒別及浸出物來控制藥品質(zhì)量，未建立制劑中巖白菜素的含量測(cè)定方法。本研究參照文獻(xiàn)[3-5]，以巖白菜素為定量控制指標(biāo)，采用反向高效液相色譜法對(duì)巖白菜素進(jìn)行含量測(cè)定，為有效控制復(fù)方威麥靈膠囊質(zhì)量提供了準(zhǔn)確可靠且簡(jiǎn)便易行的方法。

1儀器與材料

11儀器Agilent 1260型高效液相色譜儀（包括G1311C系列四元泵，G1314F VMD檢測(cè)器，G1316A柱溫箱，G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器）；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；一體式超純水儀（PURELAB FLex 3，英國(guó)ELGA公司）

12材料巖白菜素（批號(hào)：111532-201203，含量以1000%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇為分析純，乙腈為色譜純，水為二次純化水。復(fù)方威麥靈膠囊（批號(hào)：150909、151216、160421，曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室）。

2方法與結(jié)果

21色譜條件ODS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×46mm，5um）；以乙腈（A）-水（B）（15∶85）為流動(dòng)相；流速為10mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm；進(jìn)樣量10μL。

22 溶液制備

221供試品溶液制備取本品內(nèi)容物，混勻，取約05g，精密稱定，置100mL量瓶中，加入甲醇適量，超聲（頻率：45KHz；功率：300W）40min，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

222對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取巖白菜素對(duì)照品1047mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得巖白菜素2094μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

223陰性樣品溶液的制備按復(fù)方威麥靈膠囊處方比例，分別稱取除巖白菜素以外的其他藥材，依復(fù)方威麥靈膠囊工藝制備不含巖白菜素的陰性樣品，并按“221”項(xiàng)下制備陰性樣品溶液。

23線性關(guān)系的考察分別精密吸取“222”項(xiàng)下巖白菜素對(duì)照品儲(chǔ)備溶液10、25、50、75、10mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得含巖白菜素分別為2090、5235、10470、15705、20940 μg/mL 的系列對(duì)照品溶液。在“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），計(jì)算線性回歸方程，得巖白菜素的回歸方程Y=97331X+480052（r=09998）。結(jié)果表明：巖白菜素濃度在209～2094μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

24精密度試驗(yàn)精密吸取同一巖白菜素對(duì)照品溶液（含巖白菜素15705 μg/mL）“21”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，峰面積值的RSD為032%。

25重復(fù)性試驗(yàn)取同1批復(fù)方威麥靈膠囊（批號(hào)150909）6份，按“221”項(xiàng)下的方法處理，考察方法的重復(fù)性。供試品中巖白菜素含量的RSD為12%。

26穩(wěn)定性試驗(yàn)取同1份供試品溶液（批號(hào)150909），分別于0、2、4、8、12、24h按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果巖白菜素峰面積值的RSD為12%。表明供試品溶液在室溫下放置24h基本穩(wěn)定。

27回收率試驗(yàn)分別取已知含量的同一批復(fù)方威麥靈膠囊（批號(hào)150909）約025g，精密稱定，共6份，分別精密加入對(duì)照品溶液（濃度為7011 mg/mL）1mL，按“221”項(xiàng)下的方法處理，制備供試品溶液，分別測(cè)定，計(jì)算回收率。平均回收率為9880%，RSD為065%。見表1。

28專屬性試驗(yàn)將陰性樣品溶液按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果色譜圖中在巖白菜素相應(yīng)出峰位置未出現(xiàn)干擾峰。

表1回收率測(cè)定結(jié)果（n=6）

序號(hào)取樣量/g樣品中巖白

菜素量/mg加入巖白

菜素量/mg測(cè)得巖白菜

素總量/mg回收率/%平均回

收率/%RSD/%10250972188701114218199832025037201570111408089812302507721370111413339871402505720727011141673992750250372015701114095498336025087215970111412279851988065

29樣品含量測(cè)定取不同批號(hào)的供試品3批按“221”項(xiàng)下的方法處理，制備供試品溶液，按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值，以外標(biāo)法計(jì)算巖白菜素含量。見表2。

表2樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）批號(hào)巖白菜素含量/mg/g123平均值RSD/

%150909287612853228529285070931503092689326912702527664108160103273212756227726285360713討論

31流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)先后試用文獻(xiàn)中[3-4]甲醇-水（25∶75）不同比例作為流動(dòng)相以及文獻(xiàn)中[5]中甲醇-1%醋酸溶液（11∶89）不同比例作為流動(dòng)相測(cè)定，對(duì)照品及樣品中巖白菜素的峰形均不理想。結(jié)果本文試用了文獻(xiàn)[6]的乙腈-水（10∶90）的不同比例作為流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-水（15∶85）為流動(dòng)相能得到對(duì)稱性較好的巖白菜素峰，并且樣品中巖白菜素與其它雜質(zhì)能很好地分離，故選用乙腈-水（15∶85）為流動(dòng)相。

32提取方法的選擇①提取方法的確定：試驗(yàn)中試用了文獻(xiàn)[6]中樣品處理方法，結(jié)果超聲提取效果較好，且加標(biāo)回收率較高，故選用超聲提取。②超聲時(shí)間的確定：精密稱取樣品（批號(hào)20150909）5份，每份約05g，置100mL量瓶中，加入甲醇適量，分別超聲（頻率：45KHz；功率：300W）處理10、20、30、40、50 min后測(cè)定巖白菜素含量，結(jié)果超聲30 min后，巖白菜素含量基本不再改變，證明樣品超聲處理30min后，能將樣品中的巖白菜素提取完全，所以超聲（頻率：45KHz；功率：300W）時(shí)間確定為40 min。

綜上，該方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于復(fù)方巖白菜膠囊中巖白菜素的含量測(cè)定。參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2016-12-09編輯：梁志慶）