青鵬膏劑穴位貼敷對大鼠肥大細(xì)胞數(shù)量和脫顆粒率的影響*

屈敬陽，劉丁丁，安 娜，許 倩，陳 龍，楊志新△

（1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000；2.華北理工大學(xué)中醫(yī)學(xué)院）

青鵬膏劑穴位貼敷對大鼠肥大細(xì)胞數(shù)量和脫顆粒率的影響*

屈敬陽1，劉丁丁2，安 娜1，許 倩1，陳 龍1，楊志新1△

（1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000；2.華北理工大學(xué)中醫(yī)學(xué)院）

目的:觀察青鵬膏劑大椎穴貼敷對大鼠穴區(qū)組織肥大細(xì)胞（MC）數(shù)量和脫顆粒率的影響。方法：雄性Wistar大鼠30只隨機(jī)分為青鵬膏劑穴位貼敷組、電針組和空白對照組，每組10只。青鵬膏劑組大鼠大椎穴穴區(qū)局部剃毛后涂抹青鵬膏劑（約25mg，2次/天，每次20min），電針組大鼠大椎穴給予電針刺激。采用甲苯胺藍(lán)染色觀察MC的形態(tài)、數(shù)量和脫顆粒率。結(jié)果：青鵬膏劑組和電針組大鼠穴區(qū)組織內(nèi)MC細(xì)胞數(shù)量增多、體積增大，細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞輪廓不規(guī)則，MC脫顆粒現(xiàn)象明顯，且MC多沿神經(jīng)或血管分布。青鵬膏劑組和電針組大鼠穴區(qū)組織MC數(shù)量比較差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05），但均明顯高于空白對照組（P＜0.05）。三組大鼠穴區(qū)組織脫顆粒的MC個(gè)數(shù)和MC脫顆粒率由高到低依次為青鵬膏劑組、電針組、對照組，兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：青鵬膏劑穴位貼敷可激活MC，出現(xiàn)數(shù)量增多及募集和脫顆粒現(xiàn)象。

青鵬膏劑；穴位貼敷；大椎；肥大細(xì)胞；脫顆粒

青鵬膏劑[1]為藏傳經(jīng)典外用方劑，具有清熱解毒、活血化瘀、祛風(fēng)除濕、消腫止痛的功效，可用于治療痛風(fēng)、風(fēng)濕、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、熱性“岡巴”、“黃水”等病變引起的關(guān)節(jié)腫痛、扭挫傷腫痛、皮膚瘙癢、濕疹等。以往對青鵬膏劑的研究多側(cè)重于臨床應(yīng)用[2-3]。本研究選取大椎穴進(jìn)行穴區(qū)局部青鵬膏劑貼敷，觀察大鼠局部組織內(nèi)肥大細(xì)胞（MC）數(shù)量的變化和脫顆粒情況，探索青鵬膏劑穴位貼敷的藥理作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑 電針治療儀G6805-Ⅱ型，青島鑫升實(shí)業(yè)有限公司；硫代乙酰膽堿，日本TCI公司；恒冷箱切片機(jī)，英國Thermo Fisher Scientific公司；Multiskan MK3酶聯(lián)

儀（芬蘭Thermo公司）；甲苯胺藍(lán)（Tolurdine Blue O)，美國Amresco公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物分組與處理 SPF級Wistar雄性大鼠30只，

北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，合格證號：scxk(京) 2012-0001。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后隨機(jī)分為青鵬膏劑穴位貼敷組、電針組和空白對照組，每組10只。大鼠固定后，根據(jù)郭義主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》大鼠常用針灸穴位，選取大椎穴為中心、直徑為1.5cm的區(qū)域，穴區(qū)局部剃毛，青鵬膏劑組大鼠每次于穴區(qū)局部均勻涂抹青鵬膏劑（約25mg[4]），2次/天，每次20min。電針組在大椎穴給予電針刺激，用毫針針刺，得氣后針柄接電針治療儀G6805-Ⅱ型，刺激參數(shù)為2/15Hz、1mA，2次/天，每次20min。對照組大鼠相同時(shí)間和方法固定，但不給予涂藥和針刺刺激。3組大鼠均于第7天干預(yù)后2小時(shí)取材。

1.3 組織切片染色方法 以大鼠大椎穴為中心，穴區(qū)局部剃毛。3.5%水合氯醛（1ml/100g）腹腔注射麻醉大鼠，快速剪取大椎穴區(qū)皮膚組織塊（包括皮膚、皮下組織和少量肌肉，約1cm×1cm×0.4cm），-80℃冰箱保存。組織塊恒冷箱切片機(jī)切片，厚度15μm，乙酰膽堿酯酶染色后甲苯胺藍(lán)復(fù)染[5]，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。光學(xué)顯微鏡下，每只大鼠選取4張切片，每張切片觀察3個(gè)視野（×100），分別記錄每個(gè)視野內(nèi)的MC個(gè)數(shù)和脫顆粒的MC個(gè)數(shù)，并計(jì)算MC脫顆粒率。脫顆粒率=脫顆粒MC數(shù)/MC總

數(shù)×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，組間比較采用單因素方差分析。若方差齊，兩兩比較采用LSD法；若方差不齊，兩兩比較采用Tamhane法。

2 結(jié)果

2.1 染色結(jié)果 各組穴區(qū)組織真皮、皮下組織和肌肉組織中都分布著大小、數(shù)量不等的MC。對照組大鼠穴區(qū)組織內(nèi)MC細(xì)胞膜完整，細(xì)胞形狀規(guī)則，多呈圓形、卵圓形，胞質(zhì)內(nèi)充滿異染性顆粒，細(xì)胞周圍少見散在藍(lán)色顆粒，脫顆?，F(xiàn)象不明顯。青鵬膏劑組和電針組大鼠穴區(qū)組織內(nèi)MC數(shù)量增多、體積增大，且多沿神經(jīng)或血管周圍分布，MC細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞輪廓不規(guī)則，細(xì)胞周圍分布大量藍(lán)紫色顆粒，脫顆?，F(xiàn)象明顯（見附圖）。

附圖 染色結(jié)果

2.2 MC數(shù)、MC脫顆粒數(shù)和脫顆粒率 青鵬膏劑組和電針組大鼠穴區(qū)組織MC數(shù)量比較差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05），但均明顯高于空白對照組（P＜0.05）。三組大鼠穴區(qū)組織脫顆粒的MC數(shù)量和MC脫顆粒率由高到低依次為青鵬膏劑組、電針組、對照組，兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見附表：

附表 各組大鼠穴區(qū)組織MC數(shù)、脫顆粒MC數(shù)和MC脫顆粒率（±s，n=10）

附表 各組大鼠穴區(qū)組織MC數(shù)、脫顆粒MC數(shù)和MC脫顆粒率（±s，n=10）

與青鵬膏劑組比較：aP＜0.05；與電針組比較：bP＜0.05

組別 MC數(shù)（個(gè)） MC脫顆粒數(shù)（個(gè)） 脫顆粒率（%）青鵬膏劑組 37.80±5.18 25.00±3.53 64.60±3.41電針組 37.13±2.53 21.00±1.85a 56.88±5.92a空白對照組 26.60±2.07ab 8.40±0.89ab 31.40±1.52ab

3 討論

穴位貼敷療法是以中醫(yī)經(jīng)絡(luò)學(xué)說和中藥學(xué)為理論依據(jù)，屬于針灸療法中的“天灸”類，又稱敷灸法或藥物灸法，是中醫(yī)的治療手段之一。穴位貼敷是通過藥物對穴區(qū)皮膚直接或間接作用而達(dá)到治療目的的一種給藥方法，可以繞過肝臟的首過效應(yīng)及胃腸道消化酶的破壞，并降低藥物毒性和副作用，操作簡單，療效明確[6]。

研究表明[7-8]，MC聚集和脫顆粒反應(yīng)是其參與機(jī)體生理病理反應(yīng)的關(guān)鍵步驟。本研究發(fā)現(xiàn)，青鵬膏劑穴位貼敷組穴區(qū)皮膚組織MC數(shù)量明顯增多，脫顆粒率顯著高于電針組和對照組，說明針灸對穴區(qū)局部組織內(nèi)MC的影響不如青鵬膏劑穴位貼敷，與以往研究報(bào)道一致[4]。本研究提示，青鵬膏劑穴位貼敷可激活穴區(qū)組織內(nèi)的MC，使MC出現(xiàn)數(shù)量增多以及脫顆粒明顯增多等變化，且MC多沿神經(jīng)或血管聚集，說明MC數(shù)量和脫顆粒情況的變化是青鵬膏劑穴位貼敷顯效的有關(guān)結(jié)果之一。有研究發(fā)現(xiàn)[9]，MC是針灸效應(yīng)信號傳導(dǎo)放大的關(guān)鍵因素之一，其形態(tài)結(jié)構(gòu)和所釋放的多種活性物質(zhì)的變化，如組織胺、緩激肽、前列腺素、P物

質(zhì)等，與人體的經(jīng)絡(luò)現(xiàn)象有關(guān)，但本研究尚未觀察MC釋放

的多種活性物質(zhì)的含量變化，為深入探討青鵬膏劑穴位貼

敷的藥理作用機(jī)制，有待進(jìn)一步的研究。

[1]鐘世紅，古銳，王文.奇正青鵬膏治療骨關(guān)節(jié)疼痛方解及有效成分介紹[J].西南軍醫(yī)，2007，9(1)：88-90.

[2]賴少波，劉晉閩.損傷洗劑熱敷配合青鵬膏治療氣滯血瘀型頸椎病臨床觀察[J].黑龍江中醫(yī)藥，2014（，4）：17-18.

[3]唐蘇為,謝韶瓊,宋勛,等.青鵬膏劑封包治療慢性濕疹療效觀察[J].世界臨床藥物,2016,37(1)：38-41.

[4]羅明富，李翠紅，張棟，等.青鵬軟膏貼敷裸鼠穴區(qū)對皮膚內(nèi)血管和肥大細(xì)胞的影響[J].中國中藥雜志，2008，33(7)：816-818.

[5]羅明富，宋曉晶.報(bào)告一種同時(shí)顯示肥大細(xì)胞、血管、神經(jīng)等組織成分的新染色方法[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2012，21(5)：499-500.

[6]劉西建，韓濤.中藥穴位貼敷研究現(xiàn)狀及思路[J].中醫(yī)藥信息，2014，31(5)：130-132.

[7]羅明富，何俊娜，郭瑩，等.電針和懸灸對大椎穴區(qū)MCs脫顆粒不同影響的研究[J].針刺研究，2007，32(5)：327-329.

[8]張迪，丁光宏，沈雪勇，等.肥大細(xì)胞功能對針刺大鼠“足三里”鎮(zhèn)痛效應(yīng)的影響[J].針刺研究，2007，32(3)：147-152.

[9]潘萍，郭義.肥大細(xì)胞是針刺效應(yīng)信號放大的關(guān)鍵因素之一[J].遼寧中醫(yī)雜志，2009，36(12)：2066-2068.

EFFECTS OF QINGPENG UNGUENTUM ACUPOINT STICKER ON NUMBER AND DEGRANULATION RATE OF RATS’ MASTOCYTE

QU Jing-yang, LIU Ding-ding, AN Na, et al
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To observe the effects of Qingpeng Unguentum Dazhui point sticker on number and degranulation rate of mastocyte in rats.Methods:30 male Wistar rats were randomly divided into blank control group, electroacupuncture group and Qingpeng Unguentum group with 10 rats in each group. The Dazhui point of rats in Qingpeng Unguentum group were stuck with 25mg Qingpeng Unguentum for 2 times a day; The Dazhui point of rats in electroacupuncture group were stimulated with electroacupuncture. Toluidine blue staining was used to observe the morphology, number and degranulation of mastocyte.Results:In Dazhui point area, the number and volume of mastocytes of rats in electroacupuncture group and Qingpeng Unguentum group increased; The cell membrane ruptured and mastocytes showed obviously degranulation; Moreover, the mastocytes distributed along nerves or blood vessels. The number of mastocytes in Dazhui point area of rats in electroacupuncture group and Qingpeng Unguentum group were obviously more than control group (P＜0.05). The quantity and ratio of degranulated mastocytes from high to low were Qingpeng Unguentum group, electroacupuncture group and control group, there had statistically signif i cant differences between every 2 groups (P＜0.05).Conclusions:Qingpeng Unguentum acupoint sticker can activate mastocyte, which show number increasing and degranulation.

Qingpeng Unguentum; Acupoint sticker; Dazhui point; Mastocytes; Degranulation

R285.5

A

1004-6879（2017）02-0093-03

2016-07-22）