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    不同頻率電針“內(nèi)關(guān)”對心肌缺血大鼠相關(guān)經(jīng)穴和非相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流量的影響*

    2013-08-29 09:44:00胡瑯琳嵇波丁娜李曉泓張露芬李志剛許詠思張鶴宋艷
    微循環(huán)學(xué)雜志 2013年3期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)關(guān)穴區(qū)經(jīng)穴

    胡瑯琳 嵇波 丁娜 李曉泓 張露芬 李志剛許詠思 張鶴 宋艷

    心肌缺血是指心臟的血液灌注量減少,導(dǎo)致心臟供氧減少,心肌能量代謝障礙,不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)。冠狀動脈狹窄是引起心肌缺血最主要的原因。因此,如何更早和最大程度減少心肌損傷以及盡快恢復(fù)心功能,一直是臨床醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn)。近年來,“內(nèi)關(guān)”穴在保護(hù)心肌缺血損傷方面受到關(guān)注,針刺“內(nèi)關(guān)”可對抗心肌缺血大鼠下丘腦室旁核(PVN)去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)含量的繼續(xù)降低,明顯緩解小動脈痙攣,平衡冠狀動脈舒縮水平,改善缺血心肌血供[1]。皮膚血流由微動脈、微靜脈流經(jīng)體表形成,其灌注量變化與心肌功能狀態(tài)密切相關(guān),血容量下降可能引起皮膚血流量減少[2,3]。針刺可使正常人經(jīng)脈區(qū)域微循環(huán)灌注量顯著增加[4]。但迄今未見在心肌缺血狀態(tài)下針刺有關(guān)穴位后觀察經(jīng)穴皮膚血流量變化的相關(guān)報(bào)道,所以本文采用不同頻率電針刺激心肌缺血大鼠雙側(cè)“內(nèi)關(guān)”穴,并觀察左側(cè)相關(guān)經(jīng)穴“內(nèi)關(guān)”、“郄門”和右側(cè)非相關(guān)經(jīng)穴“足三里”穴區(qū)皮膚血流量變化,為針灸調(diào)節(jié)心肌缺血提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 動物

    雄性Wistar大鼠30只,空腹體重210~230g,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供,許可證號:SCXK(京)2006-0009。術(shù)前將動物飼養(yǎng)于室溫(24±1)℃、相對濕度(55±5)%環(huán)境中,12h明暗交替,適應(yīng)性喂養(yǎng)72h。

    1.2 主要試劑和儀器

    20 %烏拉坦(天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn),批號06051121);BL420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(TM003-0024,成都泰盟科技有限公司,用于心電圖檢測);激光多普勒血流灌注成像儀(PIM Perfusion IMager,PeriCam PSI,瑞典Perimed AB);二導(dǎo)HAN’s 穴位刺激儀(LH202H,北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)有限公司);0.35mm×13mm 華佗牌針灸針(蘇州醫(yī)療用品有限公司)。

    1.3 心肌缺血模型大鼠制備和分組

    (1)制模前大鼠處理:實(shí)驗(yàn)前兩天用脫毛粘紙將心包經(jīng)“內(nèi)關(guān)”、“郄門”和胃經(jīng)“足三里”穴區(qū)部位的鼠毛脫掉,并用清水洗凈殘余脫毛膏,再將大鼠放回動物房正常飼養(yǎng)。(2)制模方法:按徐淑云等[5]的方法并加以改良。20%烏拉坦4ml/Kg腹腔注射麻醉后將大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺上,左側(cè)胸部備皮,沿正中線左側(cè)約1cm 處剪開約2cm 長的縱向切口,鈍性分離胸淺肌和胸深肌,暴露肋骨,用止血棉完全止血,右手持止血鉗于第4、5肋間隙將肋間肌肉分離開,打開胸腔,撕開心包,用左手食指、拇指和中指將心臟由開口處輕壓胸廓快速擠出心臟,暴露動脈圓錐與左心耳根部間的左冠狀靜脈,其下方即是左冠狀動脈左前降支,用持針器持小圓彎針在左心耳下約2mm 處,即左冠狀靜脈上1/3處穿0號線,進(jìn)針深度穿過心肌1~1.5mm 左右,將左冠狀靜脈與左冠狀動脈一起結(jié)扎,松緊適度,使血供受阻,造成心肌缺血。觀察絲線扎緊部位上下大約2mm 范圍的心肌呈白色,立即將心臟放回胸腔,并擠壓胸廓將空氣排出,用止血鉗夾閉皮膚切口。(3)成模判斷:①冠脈向外膨脹發(fā)紺為結(jié)扎成功;②冠脈結(jié)扎后J點(diǎn)立即抬高,其幅度高達(dá)0.2mV[6]。本實(shí)驗(yàn)成模大鼠18只,平分為模型組、高頻電針組和低頻電針組(n均=6)。(4)假手術(shù)組(n=6)處理:與上相同,但只穿線不結(jié)扎。(5)正常對照組(n=6):麻醉后,置于相同環(huán)境中,不作任何處理。

    1.4 “內(nèi)關(guān)”穴定位和電針方法

    取高頻和低頻電針組麻醉大鼠,采用擬人比照法,參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[7],選擇前肢內(nèi)側(cè)、離腕關(guān)節(jié)約3mm 的尺橈骨縫間,進(jìn)針深度3mm 左右。低頻和高頻電針組分別選用2Hz和100Hz,電流強(qiáng)度2~4mA,以前肢出現(xiàn)輕微顫動為度。負(fù)極接“內(nèi)關(guān)”,正極接同側(cè)“足三里”旁開2mm 非穴處,均取雙側(cè)“內(nèi)關(guān)”進(jìn)行針刺,電針時(shí)間20min。正常組、假手術(shù)組和模型組不予電針刺激。

    1.5 穴區(qū)血流量檢測方法

    (1)各組麻醉大鼠取仰臥位,充分暴露左側(cè)前肢內(nèi)側(cè)(“內(nèi)關(guān)”和“郄門”)和右側(cè)后肢外側(cè)(“足三里”),激光多普勒血流儀掃描頭定于各組大鼠以上穴區(qū)正上方10~25cm 處。盡量保持大鼠相對安靜,若大鼠麻醉狀態(tài)不穩(wěn)而抽動,則在數(shù)據(jù)處理時(shí)避開該“運(yùn)動偽跡”部分,選擇感興趣時(shí)間段(TOI)記錄結(jié)果;(2)模型組和假手術(shù)組記錄術(shù)后10min各穴區(qū)的血流灌注圖像,術(shù)前記錄正常組各穴區(qū)血流灌注圖像;低頻和高頻電針組分別記錄電針后即刻、10min、30min的血流灌注圖像,做好相應(yīng)標(biāo)記。(3)數(shù)據(jù)處理:在裝有PIMSoft軟件的電腦上,打開各組各穴區(qū)血流圖像,定義感興趣區(qū)域(ROI),分別選定左前肢“內(nèi)關(guān)”、“郄門”(前肢內(nèi)側(cè)、離腕關(guān)節(jié)約7mm 左右的尺橈骨縫間)和右后肢外側(cè)“足三里”(膝關(guān)節(jié)后外側(cè),腓骨小頭下約5mm 處)為ROI1、ROI2、ROI3,選擇測量穴區(qū)面積0.90~1.30mm2內(nèi)平均血流灌注量(PU),進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2 結(jié)果

    2.1 各組“內(nèi)關(guān)”穴區(qū)皮膚血流量變化

    與正常組比較,假手術(shù)組“內(nèi)關(guān)”穴區(qū)皮膚血流量無顯著變化(P>0.05);與假手術(shù)組比較,模型組“內(nèi)關(guān)”穴區(qū)皮膚血流量顯著增加(P<0.01);與模型組比較,低頻電針組和高頻電針組電針后不同時(shí)間的“內(nèi)關(guān)”穴區(qū)皮膚血流量均顯著下降(P<0.05),低頻電針組下降更明顯(P<0.01)。見表1。

    2.2 各組“郄門”穴區(qū)皮膚血流量變化

    各組間及電針后不同時(shí)間“郄門”穴區(qū)皮膚血流量均無顯著差異(F=1.117,P>0.05),見表1。

    2.3 各組“足三里”穴區(qū)皮膚血流量變化

    與正常組比較,假手術(shù)組“足三里”穴區(qū)皮膚血流量降低(P<0.05);與假手術(shù)組比較,模型組“足三里”穴區(qū)皮膚血流量顯著降低(P<0.01);與模型組比較,高頻電針組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的“足三里”穴區(qū)皮膚血流量呈現(xiàn)下降趨勢,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),低頻電針組電針后10min“足三里”穴區(qū)皮膚血流量明顯高于模型組和電針組其它時(shí)間點(diǎn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2.4 各組“內(nèi)關(guān)”、“郄門”、“足三里”穴區(qū)皮膚血流量變化的比較

    正常組、假手術(shù)組和低頻電針組電針后即刻的“郄門”穴區(qū)皮膚血流量較“內(nèi)關(guān)”穴區(qū)明顯增加(P<0.05或P<0.01)。正常組、假手術(shù)組以及低頻電針組電針后即刻、10min、30min的“足三里”穴區(qū)皮膚血流量亦較“內(nèi)關(guān)”穴區(qū)明顯增加(P<0.05或P<0.01);模型組“足三里”穴區(qū)皮膚血流量較“內(nèi)關(guān)”穴區(qū)明顯降低(P<0.05)。見表1。

    表1 各組大鼠相關(guān)經(jīng)穴和非相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流量變化(±s,PU,n均=6)

    表1 各組大鼠相關(guān)經(jīng)穴和非相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流量變化(±s,PU,n均=6)

    注:與正常組比較,1)P<0.05;與假手術(shù)組比較,2)P<0.01;與模型組比較,3)P<0.05,4)P<0.01;與“內(nèi)關(guān)”穴比較,5)P<0.05,6)P<0.01;與電針組其它時(shí)間點(diǎn)比較,7)P<0.05

    3 討論

    人體和動物組織形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)穴皮膚組織中容量血管較非穴位處密集,生理狀態(tài)下,經(jīng)穴處血流量顯著高于經(jīng)穴旁開非穴區(qū)[8]。皮膚血流量變化由交感神經(jīng)調(diào)控,尤以交感縮血管神經(jīng)支配最豐富[9~11]。

    皮膚血管舒縮反應(yīng)由交感神經(jīng)的兩種分支來支配,一種是交感神經(jīng)去甲腎上腺素能血管收縮系統(tǒng),興奮后釋放NE、神經(jīng)肽Y 等遞質(zhì)來減少皮膚血流量;另一種是非去甲腎上腺素活化的血管舒張系統(tǒng),釋放NO、P 物質(zhì)等遞質(zhì)共同作用增加皮膚血流量[12]。因此,任何影響皮膚交感神經(jīng)活動性的因素都可引起皮膚血流量變化。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,心肌缺血大鼠,左側(cè)相關(guān)經(jīng)穴“內(nèi)關(guān)”穴區(qū)皮膚血流量明顯增加,而“郄門”穴區(qū)皮膚血流量無顯著變化,右側(cè)非相關(guān)經(jīng)穴“足三里”穴區(qū)皮膚血流量則顯著降低。這些變化可能與皮膚局部疼痛時(shí)間的長短有關(guān)[13~15]。當(dāng)心肌缺血缺氧時(shí),酸性代謝產(chǎn)物刺激心臟交感神經(jīng)末梢引起的心絞痛可放射到頸、肩、兩臂內(nèi)側(cè)及手指,直至下肢,引起相應(yīng)部位疼痛[16]。而交感神經(jīng)活動性在疼痛先期增強(qiáng),后期降低,所以在心肌缺血模型穩(wěn)定時(shí),皮膚血管相對擴(kuò)張,出現(xiàn)左前肢內(nèi)側(cè)穴區(qū)皮膚血流量增加。由于“郄門”為手厥陰心包經(jīng)郄穴,是該經(jīng)臟腑氣血深聚的部位,氣血變化最先反應(yīng)在經(jīng)脈深層(肌肉層),故在本文有限檢測時(shí)間內(nèi)其穴區(qū)皮膚血流量未出現(xiàn)明顯變化。因?yàn)樾慕g痛未牽涉至右后肢外側(cè)區(qū)域,且“足三里”穴區(qū)皮膚與心臟的交感神經(jīng)脊髓中樞支配不在同一節(jié)段,在心肌缺血時(shí),交感神經(jīng)活動性變化與心肌缺血時(shí)間長短關(guān)系不大,而手術(shù)刺激引起的交感神經(jīng)活動性較正常狀態(tài)增強(qiáng),因此“足三里”穴區(qū)的皮膚血流量明顯下降。

    本實(shí)驗(yàn)分別采用低頻和高頻電針刺激雙側(cè)“內(nèi)關(guān)”穴20min后,低頻電針組和高頻電針組“內(nèi)關(guān)”穴區(qū)皮膚血流量均較模型組下降,“足三里”穴區(qū)皮膚血流量均較模型組增加,但以低頻電針組變化更明顯,提示低頻電針保護(hù)缺血心肌的作用較好。這與古賀義久低頻電刺激受試者局部及遠(yuǎn)端,其增加大椎穴皮膚血流量較高頻電刺激效果更好的結(jié)果[17]相符。對比電針后不同時(shí)間的相關(guān)經(jīng)穴與非相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流量變化發(fā)現(xiàn),電針后30min 較10min對皮膚血流量的改善作用更大,與劉芳等[18]針刺健康人十二經(jīng)脈的原穴或合穴10min后,經(jīng)穴皮膚血流量增加呈現(xiàn)時(shí)間累積效應(yīng)的結(jié)果相一致。

    因此,在臨床上進(jìn)行針灸干預(yù)心肌缺血損傷時(shí),可選擇低頻電針“內(nèi)關(guān)”穴,可能對保護(hù)缺血心肌有積極作用。

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