基于廣泛靶向代謝組學(xué)的淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮成分差異分析

方賢勝，吳 濤，肖良俊*

（云南省林業(yè)和草原科學(xué)院，云南 昆明 650201）

核桃（Juglansspp.）是世界四大干果之一[1]，核桃仁是核桃食用部位，其富含蛋白質(zhì)、脂肪、磷脂、維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分[2]。核桃又是我國藥典收載的中藥，是典型的藥食同源食品[1]。其藥用功效多與富含的多酚和黃酮成分有關(guān)，這些物質(zhì)具有抗氧化、提高免疫力等多方面的功效，是近年研發(fā)的熱點(diǎn)[3]。核桃仁由胚（種仁或核仁）和內(nèi)種皮（仁膜）組成，核桃內(nèi)種皮為包裹在核仁表面的一層薄膜[4-5]，一般呈淺黃色，也有特異品種、資源呈紫色[6]或鮮紅色[7]。許多研究表明核桃仁多酚和黃酮主要集中在內(nèi)種皮上[8-9]，抗氧化及抑酶活性顯著，適宜進(jìn)行抗衰老等保健產(chǎn)品的開發(fā)[3]。本實(shí)驗(yàn)組在開展云南省核桃種質(zhì)資源調(diào)查過程中，發(fā)現(xiàn)28 份內(nèi)種皮紫色的核桃，口感較好，食味香純，已對其氨基酸[10-11]、脂肪酸[12]和礦質(zhì)元素[13]進(jìn)行比較分析。水果的果皮顏色和果肉顏色是消費(fèi)者偏好和適銷性的重要決定因素，不僅因?yàn)橐曈X效應(yīng)，還因?yàn)樽仙蚣t色外表更能讓人主觀上覺得其含有特別的或更多的有益健康成分。比如，核桃內(nèi)種皮是核桃酚類物質(zhì)的重要來源，內(nèi)種皮酚類物質(zhì)含量是核仁的8 倍[14]，其咖啡酸和香豆酸含量約是核仁的15 倍和752 倍[8]。由于許多有益的酸、單寧和類黃酮存在于果皮或種皮中，紫皮核桃是否含有淺黃色核桃中沒有的營養(yǎng)成分或營養(yǎng)成分更高，尚缺乏相關(guān)信息。

代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分[15-16]。代謝組學(xué)技術(shù)通過高通量化學(xué)分析技術(shù)對生物樣品中的小分子代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析，在營養(yǎng)科學(xué)[17]、疾病診斷[18]、毒理學(xué)[19]、植物代謝和響應(yīng)機(jī)理[20]等方面廣泛應(yīng)用。Wang Dandan等[21]基于廣泛靶向代謝組學(xué)技術(shù)對黑芝麻中的營養(yǎng)成分及其在中藥中發(fā)揮作用的相關(guān)代謝物進(jìn)行了鑒定。Ho等[22]用代謝組學(xué)技術(shù)從黑核桃（J.nigra）中鑒定了6 個(gè)具有抑菌活性的化合物。運(yùn)用代謝組學(xué)方法分析不同顏色的核桃內(nèi)種皮中的代謝成分及其差異尚鮮見報(bào)道。本研究以普通淺黃色和特異紫色2 種顏色的核桃內(nèi)種皮為研究材料，利用廣泛向代謝組學(xué)方法，應(yīng)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，檢測2 種材料的代謝物種類，并對其差異性進(jìn)行比較分析，從差異代謝物的角度著手，揭示其多酚、黃酮物質(zhì)組成及內(nèi)種皮顏色差異，旨在為核桃內(nèi)種皮中化學(xué)物質(zhì)表征和功能成分研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

以云南省香格里拉市三壩鄉(xiāng)哈巴村25 a生的紫皮核桃（J.sigillatacv.‘Ziyi’）和漾濞泡核桃（J.sigillatacv.‘Yangpao’）的果實(shí)為供試材料，所取試材的生境和栽培管理措施一致。核桃果實(shí)成熟時(shí)從植株的東、西、南、北4 個(gè)方向各采集50 個(gè)核桃青果帶回實(shí)驗(yàn)室。去除核桃青皮和種殼，剝?nèi)⌒迈r核桃仁的內(nèi)種皮。漾濞泡核桃的內(nèi)種皮為淺黃色，紫皮核桃的內(nèi)種皮為紫色，其表型顏色見圖1。2 種顏色的內(nèi)種皮材料各用5 mL凍存管取3 個(gè)重復(fù)，然后迅速置于液氮中，隨后轉(zhuǎn)移至－80 ℃超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 漾濞泡核桃（A）和紫皮核桃（B）內(nèi)種皮顏色Fig.1 Endocarps of J.sigillata cv.‘Yangpao’ (A) and J.sigillata cv.‘Ziyi’ (B)

甲醇、乙腈、乙醇、標(biāo)準(zhǔn)品（均為色譜純） 德國Merck公司。

1.2 儀器與設(shè)備

MM400研磨儀 德國Retsch公司；7754070冷凍干燥機(jī) 美國Labconco公司；5430R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 德國Eppendorf公司；Shim-pack UFLC CBM30A超高效液相色譜儀 日本島津公司；QTRAP 6500系統(tǒng)串聯(lián)質(zhì)譜儀 美國賽默飛世爾公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理

對超低溫冷凍保存的2 組供試樣品進(jìn)行真空冷凍干燥，用研磨儀研磨（30 Hz、1.5 min）至粉末狀；準(zhǔn)確稱取100 mg粉末，用1 mL 70%甲醇溶液提??；提取液于4 ℃冰箱過夜，期間渦旋3 次，提高提取率；12 000 r/min離心，吸取上清液，0.22 μm微孔濾膜過濾樣品，并保存于進(jìn)樣瓶中，用于超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

1.3.2 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析

色譜條件：色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相：A相為超純水（加0.04%乙酸），B相為乙腈（加0.04%乙酸）；梯度洗脫：0～11 min，95%～5% A、5%～95% B；11～12 min，5% A、95% B；12～15 min，5%～95% A、95%～5% B；15～18 min，95% A、5% B；流速0.4 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量2 μL。

流出物交替連接到電噴霧離子源-三重四極桿條件：電噴霧離子源溫度500 ℃，質(zhì)譜電壓5 500 V，氣體I和氣體II壓力分別設(shè)置為55 psi和60 psi，氣簾氣壓力25 psi，碰撞誘導(dǎo)電離參數(shù)設(shè)置為高。碰撞氣體（氮?dú)猓毫? psi進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測（multiple reaction monitor，MRM）實(shí)驗(yàn)，獲得三重四極桿掃描結(jié)果，在三重四極桿中，每個(gè)離子對MRM是根據(jù)優(yōu)化的去簇電壓和碰撞能進(jìn)行掃描檢測。

1.3.3 質(zhì)控樣本

質(zhì)控樣本由2 組不同顏色核桃內(nèi)種皮提取物等量混合制備而成，3 個(gè)重復(fù)，與分析樣本采用相同的方法處理和檢測，在儀器檢測的過程中，每10 個(gè)檢測分析樣本中插入1 個(gè)質(zhì)控樣本，以考察整個(gè)分析過程的重復(fù)性。

1.4 數(shù)據(jù)分析

基于邁維（武漢）生物技術(shù)有限公司自建MVDB V2.0數(shù)據(jù)庫及代謝物信息公共數(shù)據(jù)庫根據(jù)二級(jí)譜信息進(jìn)行物質(zhì)定性，代謝物定量是利用三重四極質(zhì)譜MRM分析完成。獲得不同樣本的代謝物質(zhì)譜并對物質(zhì)質(zhì)譜峰進(jìn)行峰面積積分，進(jìn)行同一代謝物在不同樣本中的質(zhì)譜出峰進(jìn)行積分校正[23]，利用軟件Analyst 1.6.3處理質(zhì)譜數(shù)據(jù)。采用多元統(tǒng)計(jì)分析，對兩組樣本進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA）、聚類分析，根據(jù)偏最小二乘判別分析（partial least squares-discriminant analysis，PLS-DA）、正交偏最小二乘判別分析（orthogonal PLS-DA，OPLS-DA）法預(yù)測模型穩(wěn)定可靠性。利用多維統(tǒng)計(jì)變量重要性投影（variable importance in project， VIP）值、單維統(tǒng)計(jì)P值及差異倍數(shù)篩選差異代謝物。通過R（v3.3.2）中pheatmap程序?qū)Y選出的淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮差異代謝成分進(jìn)行聚類分析并繪制熱圖。對各組樣本差異代謝物進(jìn)行層次聚類選，同時(shí)將得到的相應(yīng)差異代謝物提交到KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站，進(jìn)行相關(guān)通路分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 代謝組成分總體分析

基于邁維（武漢）自建代謝物數(shù)據(jù)庫及相關(guān)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，對MRM代謝物檢測多峰圖，通過三重四極桿篩選出每個(gè)物質(zhì)的特征離子，在檢測器中獲得特征離子的信號(hào)強(qiáng)度，用MultiaQuant軟件打開樣本下機(jī)質(zhì)譜文件，對主要代謝物進(jìn)行定性和定量分析。在淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮中，鑒定出23 類680 種代謝物（表1），其中淺黃色核桃內(nèi)種皮的代謝組成分有23 類670 種，特有的化學(xué)物質(zhì)有7 類12 種；紫色核桃內(nèi)種皮的代謝組成分有23 類668 種，特有的化學(xué)物質(zhì)有6 類10 種。

表1 淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮中的代謝物數(shù)量統(tǒng)計(jì)Table 1Statistics of metabolites in yellowish and purple walnut endocarps

2.2 淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮代謝組學(xué)差異分析

2.2.1 PCA結(jié)果

通過對樣本進(jìn)行PCA，判別淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮各組樣本之間的分組之間和組內(nèi)樣本之間的變異度大小。結(jié)果得到5 個(gè)主成分，其中PC1的貢獻(xiàn)率為63.15%，PC2的貢獻(xiàn)率為10.84%，且兩組樣本在二維圖上表現(xiàn)出明顯的分離趨勢（圖2），組內(nèi)之間淺黃色內(nèi)種皮的分離大于紫色內(nèi)種皮，在PCA結(jié)果上能夠從總體上反映出兩組樣品之間的代謝物差異。

圖2 兩組樣品及質(zhì)控的PCA結(jié)果Fig.2 PCA plot for discrimination of two groups of samples and quality control

2.2.2 OPLS-DA結(jié)果

PCA法雖然能夠有效地提取主要信息，但是對于相關(guān)性較小的變量不敏感，而PLS-DA可以使組間區(qū)分最大化，有利于尋找差異代謝物。OPLS-DA結(jié)合了正交信號(hào)矯正和PLS-DA方法，通過去除不相關(guān)的差異篩選差異變量。根據(jù)OPLS-DA模型（圖3a）對680 種代謝組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，淺黃色核桃內(nèi)種皮樣品分布在置信區(qū)間的左側(cè)，紫色核桃內(nèi)種皮樣品分布在置信區(qū)間的右側(cè)，2 個(gè)樣品的區(qū)分效果豐常明顯。OPLS-DA得到PC1的貢獻(xiàn)率為62.1%、PC2的貢獻(xiàn)率為9.74%，=0.719，=0.999、Q2=0.975，其中Q2＞0.9為出色的模型，相比于PCA模型效果更好。對OPLS-DA進(jìn)行排列驗(yàn)證（n=200，即進(jìn)行200 次排列實(shí)驗(yàn)）。在模型驗(yàn)證中（圖3b），橫線對應(yīng)為原始模型的和Q2，紅點(diǎn)和藍(lán)點(diǎn)分別代表Y置換后模型的和Q’2。和Q’2均小于原始模型的和Q2，即相應(yīng)點(diǎn)都不超過相應(yīng)的線，則說明模型有意義，可根據(jù)VIP值分析篩選其差異代謝物。

圖3 OPLS-DA得分圖（a）和驗(yàn)證圖（b）Fig.3 OPLS-DA score plot (a) and verification (b) of OPLS-DA model

2.2.3 差異代謝物鑒定

基于OPLS-DA結(jié)果，從獲得的多變量分析OPLS-DA模型的VIP值，以其表示對應(yīng)代謝物的組間差異在模型中各組樣本分類判別中的影響強(qiáng)度，一般認(rèn)為VIP≥1的代謝物則為差異顯著。初步篩選出兩類樣品間差異的代謝物，選取VIP≥1的代謝物。淺黃色與紫色核桃內(nèi)種皮進(jìn)行篩選共得到的差異代謝物21 類244 種（表1）。整體上淺黃色與紫色核桃內(nèi)種皮差異代謝成分（244 種）占共有代謝成分（658 種）的37.08%，說明不同顏色的核桃內(nèi)種皮代謝物質(zhì)差異顯著。其中差異較大的是有機(jī)酸及衍生物、黃酮、苯丙素、氨基酸及衍生物、黃酮醇5 種類別，分別占比為19.26%、13.11%、9.42%、8.20%和7.38%。

2.3 差異性代謝產(chǎn)物分析

2.3.1 差異代謝物熱圖分析

為方便觀察代謝物變化規(guī)律，對差異顯著的代謝物進(jìn)行歸一化處理，并繪制聚類熱圖，結(jié)果如圖4所示。該圖簡單、直觀地反映出代謝物的變化情況。在244 種差異代謝成分中，紫色核桃內(nèi)種皮相對淺黃色核桃內(nèi)種皮有93 種成分上調(diào)，即相對含量增加，增加的代謝成分占244 種差異代謝成分的38.11%，151 種成分下調(diào)，即相對含量降低，降低的代謝成分占244 種差異代謝成分的61.89%。

圖4 差異代謝物熱圖Fig.4 Heat map for differential metabolites

2.3.2 主要差異代謝成分分析

比較淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮樣品中代謝成分定量信息發(fā)生的差異倍數(shù)變化，將差異倍數(shù)進(jìn)行處理（log2FC），變化排在前的20 個(gè)差異表達(dá)代謝成分如圖5所示。與淺黃色核桃內(nèi)種皮相比，紫色核桃內(nèi)種皮5 種有機(jī)酸及衍生物（3-O-阿魏?？鼘幩?、奎寧酸O-二葡萄糖醛酸、隱綠原酸、新綠原酸、1-咖啡?？鼘幩幔?，1 種苯丙素（6-羥基-4-甲基香豆素），1 種維生素及衍生物（抗壞血酸），1 種黃酮（木犀草素C-阿魏?；禾擒眨? 種生物堿（N-甲基色胺），1 種氨基酸及衍生物（Nα-乙酰-L-精氨酸）的相對含量顯著增加；2 種原花青素（原花青素B2、原花青素B3），1 種黃酮（氧甲基柚皮素C-戊糖苷），1 種黃酮醇（紫杉葉素），1 種黃酮類（水仙苷），1 種多酚（兒茶素），1 種生物堿（5-甲氧基-N,N-二甲基色胺），1 種有機(jī)酸及衍生物（龍膽酸），1 種醇類（去氫催吐蘿芙木醇），1 種苯丙素（芥子酰羥基香豆素）的相對含量顯著降低。紫杉葉素（二氫槲皮素）屬于黃酮醇，在淺黃色核桃內(nèi)種皮中的含量是紫色的137.83 倍。資料顯示，其對癌癥和皮膚衰老具有治療前景，可以清除髓過氧化物酶衍生的活性氮，減輕（谷胱甘肽合成的不可逆抑制劑）丁硫氨酸亞砜胺對人皮膚組織的損傷，下調(diào)UVB處理皮膚細(xì)胞中的膠原酶I[24]。

圖5 2 個(gè)樣品中含量差異最大的20 種代謝物Fig.5 Twenty most significantly differential metabolites between two samples

2.3.3 差異代謝物通路分析

通過KEGG數(shù)據(jù)庫對差異代謝物質(zhì)進(jìn)行通路富集分析結(jié)果（圖6）顯示，鑒定出的244 種顯著差異代謝物，主要分布在20 條代謝途徑中，差異代謝物數(shù)量富集最多的前5 條通路：1）次生代謝產(chǎn)物的生物合成通路，主要包括氨基酸及衍生物、核苷酸及衍生物、維生素及衍生物、吲哚及衍生物、有機(jī)酸及衍生物等90 種代謝成分；2）黃酮類生物合成通路，主要包括金圣草黃素5-O-己糖苷等48 種代謝成分；3）黃酮和黃酮生物合成通路，主要包括18 種黃酮醇類、7 種黃酮類、8 種黃烷酮、4 種異黃酮等37 種代謝成分；4）不同環(huán)境中微生物相關(guān)的代謝通路，主要包括30 種代謝成分；5）苯丙烷生物合成通路，主要包括芥子酰羥基香豆素等23 種代謝成分。前5 條通路分別是次生代謝產(chǎn)物生物合成通路、黃酮類生物合成通路、黃酮和黃酮醇生物合成通路、環(huán)境微生物相關(guān)代謝通路和苯丙烷生物合成通路，分別包括代謝物90 種（36.89%）、48 種（19.67%）、37 種（15.16%）、30 種（12.30%）和23 種（9.43%）。

圖6 差異代謝物KEGG富集圖Fig.6 KEGG enrichment map for differential metabolites

3 討 論

本研究采用廣泛靶向代謝組學(xué)技術(shù)，以淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮為材料，對二者的代謝物進(jìn)行對比分析。從2 種類型的核桃內(nèi)種皮中檢測到23 類680 種代謝物，其中差異代謝成分（21 類244 種）占共有代謝成分（23 類658 種）的37.08%。核桃內(nèi)種皮相對于外種皮（核桃殼）來說，物理保護(hù)屏障功能較弱，但無疑其對核桃仁具有很強(qiáng)的化學(xué)保護(hù)和防御功能。防護(hù)功能主要源于含量較高各種植物化學(xué)物質(zhì)，如杏和甜櫻桃積累了大量的生氰糖苷[25]，但多數(shù)物種的種子受到高含量硫代葡萄糖苷、生物堿或酚類化合物的保護(hù)[26]。核桃內(nèi)種皮中高含量酚類化合物的作用是保護(hù)富含脂肪的油性胚乳的種胚，這種保護(hù)并不側(cè)重于防御掠食者，因?yàn)楹颂胰时话趫?jiān)硬的外殼中，外殼上覆蓋著高含量酚類的青皮[27-28]。在這種情況下，酚類化合物的抗氧化性潛在地負(fù)責(zé)保護(hù)核桃仁免受有價(jià)值的脂肪酸的氧化，從而保護(hù)核桃仁的內(nèi)在質(zhì)量。

核桃仁略有的苦澀味與其含有的酚類化合物有關(guān)[29]，且在內(nèi)種皮中的含量遠(yuǎn)高于核仁[14]。雖然酚類化合物沒有已知的營養(yǎng)功能，但由于其良好的抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗炎和抗突變特性，它們對人體健康有重要作用[3]。黃酮類和多酚類物質(zhì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，種類多樣，具有鎮(zhèn)痛、護(hù)肝、抗腦缺血損傷、抗心律失常、抗自由基和抗病毒、抗腫瘤等多種生物學(xué)活性和藥理作用[4]。紫色核桃與淺黃色核桃相比，共有的25 種黃酮差異代謝物中上調(diào)的物質(zhì)（即在紫色核桃中相對含量較高）有10 種，平均差異倍數(shù)4.96 倍，下調(diào)的15 種差異代謝物的平均差異倍數(shù)0.29 倍；多酚類差異代謝物有11 種，其中二沒食子兒茶素為上調(diào)代謝物質(zhì)，差異倍數(shù)為2.36 倍，另10 種為下調(diào)物質(zhì)，平均差異倍數(shù)為0.20 倍。

核桃核仁顏色是影響核桃堅(jiān)果質(zhì)量分級(jí)和銷售價(jià)格的因素。在GB/T 20398—2006《核桃堅(jiān)果質(zhì)量等級(jí)》中，核桃堅(jiān)果分為4 級(jí)，特級(jí)、I級(jí)和II級(jí)的核仁顏色都要求黃白，III級(jí)為黃白或淺琥珀色[30]。在LY/T 3004—2018《核桃標(biāo)準(zhǔn)綜合體》中，核桃堅(jiān)果分為3 個(gè)等級(jí)，特級(jí)和一級(jí)的核仁顏色都要求“黃白或具良種特有顏色”，二級(jí)為“黃白、淺琥珀色或具良種特有顏色”。另一方面，由于（紫）紅色在中國和其他亞洲國家是一個(gè)賣點(diǎn)，因?yàn)樗笳餍腋：秃眠\(yùn)，因而售價(jià)更高。研究表明，菜豆和擬南芥種膜的顏色是由苯丙烷類化合物的氧化決定的[31-32]。所有陸地植物都會(huì)合成苯丙烷，這是一類包括單寧、花青素、黑色素、木質(zhì)素的化合物。這些化合物中有許多是有色的，賦予植物著色和抗氧化保護(hù)作用[33-34]。淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮共測得花青素類物質(zhì)13 種、原花青素類物質(zhì)4 種，通過對花青素類和原花青素類差異代謝物進(jìn)行鑒定，得到花青素類差異代謝物8 種，原花青素類差異代謝物3 種。紫色核桃內(nèi)種皮相對于淺黃色核桃內(nèi)種皮在芍藥花青素O-己糖苷、矢車菊屬3-O-丙二酰己糖苷、矢車菊素3-O-葡萄糖苷、矢車菊素半乳糖苷、芍藥3-O-葡萄糖苷氯化物5 種的含量較高（4.10 倍），矢車菊素3-O-葡萄糖苷、錦葵色素3-O-葡糖苷、矢車菊素3-O-蕓香糖苷3 種含量較低（0.33 倍）。在3 種原花青素類差異代謝物中，紫色核桃內(nèi)種皮相對于淺黃色核桃內(nèi)種皮原花青素A、原花青素B2、原花青素B3的含量均較低（0.14 倍）。總體而言，紫色核桃內(nèi)種皮花青素差異代謝物中含量較高的代謝物的數(shù)量較多且差異倍數(shù)較大，含量較低的代謝物少且差異倍數(shù)較小，內(nèi)種皮中花青素積累的差異可能是影響核仁顏色差異的因素之一。

2 種核桃內(nèi)種皮相較對方而言，各自特有代謝物質(zhì)共22 種，占全部代謝物質(zhì)（680 種）的3.24%。通過文獻(xiàn)檢索和化學(xué)物質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索，22 種特有代謝物質(zhì)中有相關(guān)功能報(bào)道的僅1 種苯丙素（花椒毒醇）和3 種生物堿（植保素、茶堿和咖啡堿）?；ń范敬季哂猩锘钚缘木€性呋喃香豆素，有強(qiáng)烈的藥理學(xué)活性，如抗炎、抗氧化，5-羥色胺拮抗和神經(jīng)保護(hù)作用。植保素是一種簡單的吲哚生物堿，存在于擬南芥和其他十字花科植物中，其次生代謝產(chǎn)物起植物抗毒素的作用，可以阻止細(xì)菌和真菌病原體。茶堿對哮喘和心肺疾病有療效[35-36]?？Х葔A可能是世界上最常攝入的藥理活性物質(zhì)。它存在于咖啡、茶、可可等產(chǎn)品以及藥物中，適度地使用有祛除疲勞、興奮神經(jīng)的作用，臨床上用于治療神經(jīng)衰弱和昏迷復(fù)蘇[37]。本研究對淺黃色和紫色核桃內(nèi)種皮代謝物進(jìn)行比較，所檢測到的物質(zhì)可為核桃內(nèi)種皮的功能研究及下一步開發(fā)利用提供參考。