候選基因關(guān)聯(lián)研究的統(tǒng)計(jì)分析方法*

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室(150081) 肖 純 史曉雯 劉蕓良 張 奇 劉 艷

候選基因關(guān)聯(lián)研究的統(tǒng)計(jì)分析方法*

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室(150081) 肖 純 史曉雯 劉蕓良 張 奇 劉 艷△

隨著新一代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展及全基因組關(guān)聯(lián)研究(genome-wide association study,GWAS)策略的推廣，復(fù)雜性疾病基因關(guān)聯(lián)研究涉及的SNP位點(diǎn)逐漸增加[1]，且資料收集的逐漸完善促使描述疾病結(jié)局相關(guān)的指標(biāo)增多，使樣本信息多元化[2]。

所謂候選基因關(guān)聯(lián)研究是根據(jù)已有的生理、生化背景知識(shí)或現(xiàn)有的研究結(jié)果(例如連鎖分析的結(jié)果或表達(dá)產(chǎn)物的功能)提示某段基因序列的變異可能與表型的變異有關(guān)來(lái)確定待研究的基因，也就是候選基因[3]。假設(shè)所選基因本身就是影響表型變異的主基因，同時(shí)借助基因擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，采用病例對(duì)照設(shè)計(jì)方法來(lái)比較病例組與對(duì)照組候選基因的組間差異，以此來(lái)確定候選基因與表型變異是否存在關(guān)聯(lián)[4]，有利于探索復(fù)雜性疾病的致病基因，樣本易收集且能檢出基因的主效應(yīng)及微效基因的作用[5-6]。目前針對(duì)候選基因關(guān)聯(lián)研究的統(tǒng)計(jì)分析方法主要分為疾病結(jié)局由多個(gè)指標(biāo)共同描述和SNP位點(diǎn)數(shù)目較多這兩種數(shù)據(jù)類型[7]，本文對(duì)這兩種數(shù)據(jù)類型的主要分析方法進(jìn)行回顧，并對(duì)其中較為高效的分析方法進(jìn)行詳細(xì)介紹。

多指標(biāo)數(shù)據(jù)分析方法

針對(duì)多指標(biāo)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析方法主要區(qū)別在于對(duì)各指標(biāo)間相關(guān)性的校正方法不同，實(shí)際數(shù)據(jù)操作中應(yīng)根據(jù)研究目的、專業(yè)背景知識(shí)及數(shù)據(jù)的分布類型來(lái)選擇適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)分析方法。

1.傳統(tǒng)分析方法

傳統(tǒng)分析方法通常是采用回歸模型對(duì)疾病結(jié)局與相關(guān)變量進(jìn)行分析，以研究對(duì)象是否患病作為應(yīng)變量，以位點(diǎn)的基因型和需要調(diào)整的混雜因素作為自變量進(jìn)行分析，并且可以估計(jì)基因之間及基因與環(huán)境之間的交互作用[8-10]。但當(dāng)疾病結(jié)局并非由單一指標(biāo)來(lái)描述時(shí)，模型中的應(yīng)變量就不再是是否患病，而是一些彼此相關(guān)的多個(gè)指標(biāo)，采用回歸模型就需將多指標(biāo)信息縮減為一個(gè)綜合得分，在損失數(shù)據(jù)信息的同時(shí)也降低了檢驗(yàn)功效[11-12]。

2.TATES法

Sluis等人[13]同時(shí)指出當(dāng)校正了各指標(biāo)間的相關(guān)性后，在0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn)下其檢驗(yàn)效能是傳統(tǒng)方法(即回歸模型)的2.5～9.0倍，是多元方差分析的1.5～2.0倍。TATES法可通過(guò)PLINK、Mach2.dat/qtl、SNPtest和Gen/ProbABLE軟件實(shí)現(xiàn)，同時(shí)兼具高效、人群分層校正的優(yōu)勢(shì)。

改良Fisher合并統(tǒng)計(jì)量可以通過(guò)R軟件中fCopulae包實(shí)現(xiàn)，運(yùn)行速度較快。Yang等通過(guò)一組模擬實(shí)驗(yàn)證實(shí)改良Fisher合并統(tǒng)計(jì)量方法對(duì)表型變量具有相關(guān)性的數(shù)據(jù)具有較高的檢驗(yàn)效能，并有效地控制了Ⅰ類錯(cuò)誤。Yang等同時(shí)將該方法應(yīng)用于酒精濫用的遺傳學(xué)研究。

此外，多元方差分析[16-17]通過(guò)基因型內(nèi)與基因型間變異的協(xié)方差矩陣來(lái)計(jì)算表型變量的平均值的大小。將多個(gè)表形向量看作一個(gè)整體，從表形向量的任意線性組合中發(fā)現(xiàn)不同總體的最大組間差異，即基因位點(diǎn)對(duì)多個(gè)表型變量整體的影響。多元方差分析對(duì)于最小等位基因頻率較大且指標(biāo)間呈負(fù)相關(guān)的資料效能較高。另外，主成分分析可用于降低變量維度，同時(shí)可提高檢驗(yàn)效能[18-19]。當(dāng)疾病表型相關(guān)程度較高時(shí)，采用主成分分析得到的第一個(gè)主成分包含最多的表型信息(VarZ1≥VarZ2…≥VarZm)，故在基因關(guān)聯(lián)研究中檢驗(yàn)第一個(gè)主成分與SNP位點(diǎn)間的關(guān)系是將眾多相關(guān)指標(biāo)轉(zhuǎn)化為較少幾個(gè)成分的一種常用且有效的方法。但如何確定合適的主成分個(gè)數(shù)以及對(duì)抽象主成分的實(shí)際意義做出合理解釋則成為該方法的難點(diǎn)[20]。

多位點(diǎn)數(shù)據(jù)分析方法

隨著全基因組關(guān)聯(lián)研究技術(shù)的發(fā)展成熟，一些疾病的基因組關(guān)聯(lián)分析會(huì)產(chǎn)生幾十個(gè)甚至是上百個(gè)的SNP位點(diǎn)，采用傳統(tǒng)方法對(duì)這種多位點(diǎn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時(shí)，會(huì)受到維度的限制(即使三個(gè)基因位點(diǎn)也很難解釋其交互作用)和單基因作用效果較弱的問(wèn)題[21-23]。若每次僅分析一個(gè)或幾個(gè)位點(diǎn)與疾病的關(guān)聯(lián)，因檢驗(yàn)效能較低常獲得陰性結(jié)果，同時(shí)也帶來(lái)了多重檢驗(yàn)的校正問(wèn)題[24]。

1.傳統(tǒng)分析方法

傳統(tǒng)的參數(shù)模型通常采用χ2檢驗(yàn)或回歸模型進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析?；讦?檢驗(yàn)的關(guān)聯(lián)分析方法原理是比較病例組與對(duì)照組某一等位基因頻率是否有差異，若結(jié)果呈陽(yáng)性，可提示該基因與變異相關(guān)，但基于χ2檢驗(yàn)的關(guān)聯(lián)分析并沒(méi)有綜合考慮到家族聚集因素和其他環(huán)境因素的共同作用[25-26]。

當(dāng)前的候選基因研究中通常產(chǎn)生包含幾十甚至上百個(gè)SNP位點(diǎn)的數(shù)據(jù)，采用傳統(tǒng)的回歸模型進(jìn)行分析時(shí)也陷入了困境。第一，眾多的位點(diǎn)信息導(dǎo)致模型中需要估計(jì)的參數(shù)增加，同時(shí)也導(dǎo)致了參數(shù)估計(jì)結(jié)果存在偏倚；第二，復(fù)雜性疾病是受多個(gè)基因的共同影響，每個(gè)基因的效應(yīng)都較弱，采用回歸模型進(jìn)行篩選時(shí)，在分析交互作用之前需要存在一個(gè)主效應(yīng)，復(fù)雜性疾病的各基因并不存在明顯的主效應(yīng)；第三，回歸模型通常是在各種假定的遺傳方式(顯性遺傳、隱形遺傳、加性遺傳等)下對(duì)各基因型進(jìn)行了評(píng)分量化，然而這種量化具有不確定性或推測(cè)的特點(diǎn)[27]。

2.核心關(guān)聯(lián)分析法(kernel association analysis)

3.混合潛變量模型(latent variable modeling)

此外，機(jī)器學(xué)習(xí)方法(如多因子降維、分類回歸樹(shù)、隨機(jī)森林等)也可以解決傳統(tǒng)參數(shù)模型中的維度災(zāi)難問(wèn)題。例如，多因子降維法(MDR)可減小因數(shù)據(jù)劃分的偶然性引起的I類錯(cuò)誤同時(shí)彌補(bǔ)了傳統(tǒng)參數(shù)模型分析高階交互作用時(shí)的缺陷，但是當(dāng)測(cè)試集的病例對(duì)照比與整個(gè)數(shù)據(jù)集相近時(shí)會(huì)增加假陽(yáng)性率[39]；分類回歸樹(shù)(CART)以二叉決策樹(shù)的形式構(gòu)建預(yù)測(cè)準(zhǔn)則，容易理解、解釋和使用，但當(dāng)樣本數(shù)據(jù)有小幅度變動(dòng)時(shí)，構(gòu)建的樹(shù)就有較大變動(dòng)，導(dǎo)致結(jié)果不穩(wěn)定[40]。

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(責(zé)任編輯：郭海強(qiáng))

國(guó)家自然科學(xué)基金(81172741;30972537)

△通信作者：劉艷，E-mail:liuyan@ems.hrbmu.edu.cn