燈盞花素對大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞OGD損傷的保護作用及機制研究

李釗飛，曹小雨，陳瓊芳，王 鋼，楊秀芬

(1.廣西中醫(yī)藥大學藥學院藥理學教研室，廣西 南寧 530001;2.陜西省第二人民醫(yī)院藥劑科，陜西 西安 710005)

燈盞花素對大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞OGD損傷的保護作用及機制研究

李釗飛1，2，曹小雨1，陳瓊芳1，王 鋼1，楊秀芬1

(1.廣西中醫(yī)藥大學藥學院藥理學教研室，廣西 南寧 530001;2.陜西省第二人民醫(yī)院藥劑科，陜西 西安 710005)

The protective effect of breviscapine on BMECs with OGD injury and mechanism study

LI Zhao-fei1,2,CAO Xiao-yu1, CHEN Qiong-fang1, WANG Gang1, YANG Xiu-fen1

(1.DeptofPharmacology,CollegeofPharmacy,GuangxiUniversityofChineseMedicine,Nanning530001,China;2.DeptofPharmacy,ShanxiSecondProvincialPeople’sHospital,Xi’an710005,China)

燈盞花素；大鼠；腦微血管內(nèi)皮細胞；OGD；保護作用；機制

breviscapine; rat; BMECs; OGD; protective effect; mechanism

燈盞花素(breviscapine，Bre)是從短亭飛蓬中提取的黃酮類化合物，具有保護缺血性腦血管疾病、調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能、減輕炎性反應等作用[1]。本實驗通過分離培養(yǎng)大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(BMECs)，建立氧糖剝奪(OGD)BMECs模型，研究Bre對BMECs損傷是否具有保護作用，并探討其可能的機制。相關研究尚未見報道。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD大鼠(7～10日齡，SPF級)，由廣西醫(yī)科大學動物實驗中心提供，合格證號：SCXK(桂)2014-0002。

1.2 試劑 燈盞花素(昆明龍津藥業(yè)股份有限公司)；各試劑盒購自南京建成生物工程研究所或武漢華美生物工程有限公司。

1.3 儀器 CO2恒溫培養(yǎng)箱，酶標儀，缺氧小室。

1.4 方法 大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞的分離鑒定參考文獻[2-3]，OGD模型的構建參考文獻[4]。實驗分為5組，即空白對照組：按照正常BMECs培養(yǎng)方法培養(yǎng)；模型組：缺糖/缺氧損傷；Bre 10、30、90 mg·L-1組。

2 結果

2.1 Bre對OGD損傷BMECs細胞的保護作用 Bre對BMECs細胞存活率在24、48、72 h均無明顯影響。OGD對BMECs細胞活性有明顯的抑制作用，當OGD 損傷6 h后，BMECs抑制率達到50%左右，因此，本實驗采取OGD 6 h為合理的造模時間。與模型組相比， OGD 損傷后給予各濃度的Bre可使BMECs細胞抑制率下降，見Tab 1。表明Bre對BMECs沒有毒性，且可保護OGD對BMECs細胞的損傷。

2.2 Bre對OGD損傷BMECs細胞釋放LDH、炎癥因子和其他物質(zhì)的影響 Bre可以明顯減少LDH和炎癥因子TNF-α、IL-6 和IL-1β的釋放，見Tab 2。表明Bre保護OGD損傷BMECs細胞的機制可能是通過抗炎途徑來實現(xiàn)的。此外，Bre可以增加OGD損傷后BMECs細胞釋放組織纖溶酶原激活物(t-PA)和擴血管物質(zhì)PGI2(高劑量除外)，抑制組織纖溶酶原激活劑抑制物PAI-1和血管收縮物質(zhì)內(nèi)皮素(ET-1)的生成，見Tab 3。

GroupODInhibitoryrate/%Control0．337±0．028##OGD0．193±0．010??43Bre90mg·L-10．275±0．041?##18Bre30mg·L-10．240±0．024??#29Bre10mg·L-10．219±0．021??35

*P<0.05，**P<0.01vscontrol;#P<0.05，##P<0.01vsOGD

3 討論

當細胞損傷后，LDH由細胞內(nèi)溢出，導致LDH釋放增加，是反映細胞損傷的重要指標。Bre可以明顯減少OGD損傷BMECs LDH的釋放，表明Bre可以保護OGD對BMECs的損傷。TNF-α、IL-6、IL-1β可誘導內(nèi)皮細胞表達多種黏附分子及趨化因子，能激活和募集炎癥細胞，加重炎癥反應，是腦卒中中觸發(fā)炎癥反應的重要介質(zhì)[5]。我們發(fā)現(xiàn)，OGD損傷BMECs后TNF-α、IL-1β、IL-6明顯升高，當治療性給予Bre后可有效降低這些炎癥因子的產(chǎn)生。因此，燈盞花素對OGD所致的BMECs細胞損傷有保護作用，其機制可能與抑制炎癥反應有關。Bre可以增加OGD損傷后BMECs細胞釋放t-PA和PGI2(高劑量除外)，抑制PAI-1和ET-1的生成，表明Bre可能具有調(diào)節(jié)纖溶功能和擴血管作用。

Tab 2 Effects of Bre on LDH and inflammatory factors of BMECs with OGD±s,n=5)

*P<0.05，**P<0.01vscontrol;#P<0.05，##P<0.01vsOGD

Groupt?PAPAI?1t?PA/PAI?1ET?1/ng·L-1PGI2/μg·L-1Control0．419±0．019##2．710±0．252##0．155±0．015##4．352±0．062##2．912±0．916##OGD0．165±0．018??3．307±0．142??0．050±0．006??12．066±1．729??2．245±0．144??Bre90mg·L-10．351±0．017??##2．788±0．085##0．126±0．01??##5．793±0．756?##2．056±0．404??Bre30mg·L-10．271±0．009??##2．966±0．204?##0．092±0．009??##7．395±0．259??##4．243±0．161??##Bre10mg·L-10．212±0．02??##3．263±0．108??0．065±0．006??#12．162±1．153??2．456±0．393??

*P<0.05，**P<0.01vscontrol;#P<0.05，##P<0.01vsOGD

[1] 李釗飛, 曹小雨, 陳瓊芳, 楊秀芬. 燈盞花素對H2O2致人臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷的的保護作用[J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2016, 27(7): 1566-9.

[1] Li Z F, Cao X Y, Chen Q F, Yang X F. Protective effect of breviscapine on human umbilical vein endothelial cells injured by H2O2[J].LishizhenMedMaterMedRes, 2016, 27(7): 1566-9.

[2] 查雨鋒, 張 順, 蘇 航,等. 一種高純度和高活力的大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞的提取及原代培養(yǎng)方法[J].中國藥理學通報,2014,30(11):1616-9.

[2] Zha Y F, Zhang S, Su H, et al. A highly purified and active extract and primitive culture method for rat microvascular endothelial cells(BMECs)[J].ChinPharmacolBull,2014,30(11):1616-9.

[3] Liu Y, Xue Q, Tang Q, et al. A simple method for isolating and culturing the rat brain microvascular endothelial cells[J].MicrovascRes,2013,90:199-205.

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[5] Iadecola C,Anrather J. The immunology of stroke: from mechanisms to translation[J].NatMed, 2011, 17(7): 796-808.

時間：2017-1-13 11:38:00

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170113.1138.060.html

2016-11-25，

2016-12-25

國家自然科學基金資助項目(No 81260652，81060353)；廣西“八桂學者”中藥創(chuàng)新理論與藥效研究項目(No J13162)

李釗飛(1991-)，男，碩士，藥師，研究方向: 心腦血管藥理學，E-mail: 395904219@qq.com; 楊秀芬(1969-)，男，博士，教授，碩士生導師，研究方向：心腦血管藥理學，通訊作者，E-mail: xiufenyang@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.02.030

A

1001-1978(2017)02-0295-02

R-332；R284.1；R322.12；R322.81；R743.31；R845.22