籠養(yǎng)黑葉猴寄生蟲的檢查和防治研究

胡巍堃， 汪國海， 李毅峰

(梧州市園林動植物研究所，廣西梧州543000)

籠養(yǎng)黑葉猴寄生蟲的檢查和防治研究

胡巍堃， 汪國海， 李毅峰*

(梧州市園林動植物研究所，廣西梧州543000)

開展珍稀瀕危物種的寄生蟲感染狀況調(diào)查對該物種的保護(hù)與研究十分重要。2015年5—6月對廣西壯族自治區(qū)梧州黑葉猴繁殖中心內(nèi)4個飼養(yǎng)片區(qū)的72只黑葉猴Trachypithecusfrancoisi進(jìn)行寄生蟲調(diào)查，共采集樣本199份(其中皮屑樣本2份，血液樣本70份，糞便樣本127份)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僅22份糞便樣本中含有毛首線蟲Trichurisspp.卵，蟲卵數(shù)100～1 850個/g；成體猴、亞成體猴、雄性個體、雌性個體毛首線蟲的感染率分別為31.25%、29.17%、31.58%和29.41%。獨立樣本t檢驗表明，感染率在成體與亞成體之間(t=1.834，df=2，P>0.05)、雄性與雌性之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.089，df=2，P>0.05)。采用阿苯達(dá)唑伊維菌素預(yù)混劑0.1 g·kg-1驅(qū)蟲5 d后，驅(qū)蟲效果達(dá)到94%，說明其驅(qū)蟲效果較好。

黑葉猴；寄生蟲；調(diào)查；防治

寄生蟲是一種大部分時間生活在宿主體表或體內(nèi)，并對宿主的生長、發(fā)育和繁殖等造成嚴(yán)重傷害，甚至威脅到宿主生命的一類生物(汪明，2007)。相關(guān)研究表明每年有5%～18%的動物因感染寄生蟲而死亡(菅復(fù)春等，2008)，因此開展動物的寄生蟲感染狀況調(diào)查對動物的生存至關(guān)重要。目前許多學(xué)者對圈養(yǎng)動物的寄生蟲感染病進(jìn)行了大量研究，如劉建麗等(2007)研究發(fā)現(xiàn)黑龍江東北虎林園內(nèi)的東北虎Pantheratigrisaltaica糞便中含有貓弓首蛔蟲Tocoxaracati和獅弓蛔蟲Toxascarisleonina；鄒希明等(2010)研究發(fā)現(xiàn)北方森林動物園內(nèi)的川金絲猴Rhinopithecusroxellana、獼猴Macacamulatta、狐猴L(fēng)emurcatta糞便中均含有毛首線蟲Trichurisspp.卵；于三科等(2011)研究發(fā)現(xiàn)秦嶺羚牛Budorcastaxicolorbedfordi糞便中含有矛形歧腔吸蟲Dicrocoeliumlanceatum和貝氏莫尼茨絳蟲Monieziabenedeni等11種寄生蟲；曾菊英等(2016)研究發(fā)現(xiàn)福州動物園內(nèi)的東方白鸛Ciconiaboyciana消化道中含有球蟲Sphaerozoumfuscum、吸蟲和絳蟲。這些研究結(jié)果表明不同地理種群寄生蟲感染率因品種、生活習(xí)性、飼養(yǎng)方法等不同而存在顯著差異。

黑葉猴Trachypithecusfrancoisi是國家Ⅰ級重點保護(hù)野生動物，已被國際自然保護(hù)聯(lián)盟(IUCN)列為瀕危物種，主要分布于越南北部、貴州省和重慶市南部的喀斯特石山地區(qū)，常以植物的成熟葉、嫩葉、花、果實和種子等為食(Nadleretal.，2003；Lietal.，2007)。近年人類活動的加劇導(dǎo)致野生黑葉猴種群數(shù)量急劇下降。為了保護(hù)該物種，我國加大了人工圈養(yǎng)力度，但因籠養(yǎng)條件下黑葉猴的活動范圍相對減小，同時因其數(shù)量多、密度大，間接增加了寄生蟲的感染幾率和種類，這在相關(guān)研究中得到了印證。如劉洪波等(1988)發(fā)現(xiàn)黔靈動物園內(nèi)的黑葉猴糞便中含有十二指腸鉤口線蟲Ancylostomaduodenale和蛔蟲Ascarislumbricoides；魏蘭英等(1990)發(fā)現(xiàn)武漢動物園內(nèi)的黑葉猴腸道含有哈氏內(nèi)阿米巴Entamoebahartmanni和糞類圓線蟲Strongyloidesstercoralis等8種寄生蟲；王成東等(2001)發(fā)現(xiàn)成都動物園內(nèi)的黑葉猴糞便中含有毛首線蟲卵；趙文娟(2010)發(fā)現(xiàn)太原動物園內(nèi)的黑葉猴糞便中含有蛔蟲；羅琴等(2015)發(fā)現(xiàn)廣州市某野生動物園內(nèi)黑葉猴消化道內(nèi)含有毛首線蟲、蛔蟲、糞類圓線蟲和絳蟲。這些研究結(jié)果表明不同地區(qū)圈養(yǎng)條件下的黑葉猴均受到寄生蟲的危害，因此開展黑葉猴的寄生蟲感染狀況調(diào)查對于該物種的保護(hù)與研究十分重要。本文通過對廣西壯族自治區(qū)梧州黑葉猴繁殖中心的黑葉猴進(jìn)行寄生蟲調(diào)查，旨在進(jìn)一步了解黑葉猴寄生蟲的感染情況，以便提出科學(xué)有效的防治方法，從而為該物種的保護(hù)提供參考資料。

1 采樣與方法

1.1 采樣

2015年5—6月采集梧州黑葉猴繁殖中心4個飼養(yǎng)片區(qū)內(nèi)48只成體(4歲以上)和24只亞成體(1～4歲)的新鮮糞便(為避免污染，接觸地面的部分不采集)，每個樣本不少于15 g，放入已滅菌的瓶子或小塑料袋中，記錄采集時間并編號。抽取后肢靜脈血進(jìn)行附紅細(xì)胞體檢查。因1歲以下的仔猴樣本采集難度較高，故本次不做調(diào)查統(tǒng)計。

1.2 檢查方法

1.2.1 直接觀察法 檢查黑葉猴體表易感部位有無明顯脫毛、丘疹、結(jié)痂等異常情況，如有，即用刀片刮取感染部位深層屑片，切碎研磨后，將粉末放置于載玻片上，加入1～2滴10%的NaOH溶液制成涂片，鏡檢。

1.2.2 糞便檢查 (1) 飽和鹽水漂浮法 稱取糞便樣本5 g放入燒杯，加入少量飽和鹽水將糞便搗成糊狀，然后添加飽和鹽水至50 mL，充分?jǐn)噭颍?0目銅篩過濾，將濾液裝入平穩(wěn)放置的試管內(nèi)靜置0.5 h后，取1～2滴上清液鏡檢。

(2)水洗離心沉淀法 稱取糞便樣本5 g置于燒杯中，加水制成混懸液，用紗布過濾后，將濾液放入離心機(jī)內(nèi)以1 500 r·min-1的速度離心1～2 min后傾去上層液，再加水混勻、離心，如此反復(fù)直至上層液體透明后傾去，吸取沉渣鏡檢。

(3)金胺酚改良抗酸染色法 取米粒大小的糞便放置于載玻片上，滴加1滴蒸餾水均勻涂抹，用酒精燈加熱固定制成涂片，滴入石炭酸復(fù)紅染色液，5～10 min后用水沖洗，滴加10%硫酸溶液，1～10 min后用水沖洗，滴加20 g·L-1孔雀綠液，1 min后用水沖洗，待自然風(fēng)干后鏡檢。

(4)根據(jù)流行病學(xué)和生活史特點，同時采用水洗法、漂浮法對飼養(yǎng)員、果蔬飼料、青飼料進(jìn)行檢測，以確定寄生蟲的來源。

1.2.3 附紅細(xì)胞體檢查 在載玻片上滴入1滴后肢靜脈血制成涂片后用瑞氏染色液常規(guī)染色，待自然風(fēng)干后鏡檢。

1.2.4 蟲卵的鑒定和讀數(shù) 對有寄生蟲的樣本進(jìn)行形態(tài)特征的觀察，參照相關(guān)資料和《動物寄生蟲病彩色圖譜》(李祥瑞，2011)對蟲卵的種類進(jìn)行鑒定，并采用麥克馬斯特氏法(孔繁瑤，1997)讀取蟲卵個數(shù)。

1.2.5 驅(qū)蟲方法 采用阿苯達(dá)唑伊維菌素預(yù)混劑[廣東佛山正典公司生產(chǎn)，250 g，批號：獸藥字(2012)190466205]對黑葉猴進(jìn)行驅(qū)蟲實驗。按照每千克體質(zhì)量0.1 g的比例稱量阿苯達(dá)唑伊維菌素預(yù)混劑，拌水果后連續(xù)投喂感染病例猴5 d，并收集感染個體的糞便檢查蟲卵讀數(shù)，以觀察治療效果。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用獨立樣本t檢驗分析不同年齡、性別組間寄生蟲感染率的差異，差異顯著水平設(shè)定為α=0.05，所有數(shù)據(jù)的分析和檢驗在SPSS 16.0和Excel 2007上進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 寄生蟲檢查結(jié)果

本次調(diào)查共采集樣本199份(其中皮屑樣本2份，血液樣本70份，糞便樣本127份)。在皮屑和血液樣本中未發(fā)現(xiàn)寄生蟲，但在22個糞便樣本中發(fā)現(xiàn)毛首線蟲卵，感染率為11%(表1)。隨機(jī)抽取18份帶有毛首線蟲卵的糞便樣本，并采用麥克馬斯特氏法檢查蟲卵數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)每克糞便中含蟲卵100～1 850個。通過對不同性別和年齡組毛首線蟲卵感染率分析，發(fā)現(xiàn)成體猴、亞成體猴、雄猴和雌猴感染率分別為31.25%、29.17%、31.58%和29.41%，雄性的感染率高于雌性，成體的感染率高于亞成體(表2)。獨立樣本t檢驗結(jié)果表明，成體與亞成體之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.834，df=2，P>0.05)、雄性與雌性之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.089，df=2，P>0.05)。此外在飼養(yǎng)員的糞便、飼料南瓜、紅薯、冬青葉中未發(fā)現(xiàn)毛首線蟲卵。

表1 黑葉猴寄生蟲感染情況

表2 不同性別、年齡組黑葉猴毛首線蟲卵感染率

表3 不同年齡、性別組黑葉猴驅(qū)蟲結(jié)果

2.2 不同年齡、性別組黑葉猴驅(qū)蟲結(jié)果

隨著用藥時間的增加，驅(qū)蟲效率逐步提高，第5天時達(dá)到了94%，說明阿苯達(dá)唑伊維菌素預(yù)混劑對毛首線蟲卵的滅殺效果較好(表3)。

3 討論

毛首線蟲是主要寄生在靈長類動物胃部，影響動物生長發(fā)育，甚至可致動物死亡的一種寄生蟲(Gillespieetal.，2005；Melfi & Poyser，2007)。Karere和Munene(2002)、Alex等(2003)研究發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)和種類的靈長類動物均感染多種線蟲，表明線蟲病是一種全球性寄生蟲病。本次調(diào)查中僅檢查出毛首線蟲卵，這與劉洪波等(1988)、魏蘭英等(1990)、王成東等(2001)、趙文娟(2010)、羅琴等(2015)的研究結(jié)果存在明顯差異，這可能與繁殖中心的地理位置和飼養(yǎng)方法有關(guān)。梧州黑葉猴繁殖中心坐落于遠(yuǎn)離市區(qū)的云龍公園內(nèi)，游客較少，且園內(nèi)僅飼養(yǎng)黑葉猴，減少了黑葉猴與外界病原接觸的機(jī)會，同時中心每天固定對籠舍進(jìn)行清洗，降低了寄生蟲在籠舍內(nèi)傳播的幾率。此外，本次使用鏡檢法進(jìn)行調(diào)查，由于鏡檢法在血涂片制作中對操作人員的技術(shù)水平要求較高，血涂片制作的質(zhì)量會對寄生蟲檢出率產(chǎn)生直接影響(Valkiunasetal.，2008)；該方法靈敏性弱，當(dāng)樣本中寄生蟲密度較低時，鏡檢不易檢視到寄生蟲從而低估寄生蟲的感染率(Valkiunas，2004)，因此后期應(yīng)采用鏡檢法與其他方法(如：分子檢測)相結(jié)合，以減少因人員操作、不同儀器操作等帶來的實驗誤差，提高研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究中采用阿苯達(dá)唑伊維菌素預(yù)混劑對黑葉猴進(jìn)行驅(qū)蟲的療效較好，這與部分研究者的研究結(jié)果相似(菅復(fù)春等，2008；哈斯蘇榮等，2012；李健等，2013；王頌萍，尹洪欣，2014)。但有1例病例猴在投喂5 d后，其糞便中仍能檢出毛首線蟲卵，這一方面可能與本次實驗的次數(shù)及驅(qū)蟲藥劑的單一性有關(guān)，后期應(yīng)加大對驅(qū)蟲實驗的次數(shù)及平行采用多種驅(qū)蟲劑(如：復(fù)方甲苯咪唑和芬苯咪唑等)對患病猴進(jìn)行治療，以便找出最佳治療藥劑；另一方面也可能與藥物使用的方式有關(guān)，王頌萍和尹洪欣(2014)研究發(fā)現(xiàn)，皮下注射阿苯達(dá)唑伊維菌素比口服的療效更顯著，因此后期應(yīng)同時采用口服和皮下注射的方式對黑葉猴進(jìn)行治療。此外，應(yīng)加大對籠舍場地和勞動工具的消毒力度，并及時對患病猴進(jìn)行驅(qū)蟲治療，防止病情擴(kuò)散感染。

致謝：感謝廣州動物園的李少基老師、陳徇姣老師在蟲體識別工作上給與的幫助，謹(jǐn)此致謝。

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Investigation on Parasitic Infection and Prevention ofTrachypithecusfrancoisi

HU Weikun， WANG Guohai， LI Yifeng*

(Research Institute of Garden Plants and Animals in Wuzhou City， Wuzhou， Guangxi Zhuang Autonomous Region 543000， China)

Study the prevalence of parasites is very significant for protection and conservation of endemic species. In this study， the prevalence of parasites from Francois’ langurs (Trachypithecusfrancoisi)， were investigated in 4 districts of Guangxi WuzhouTrachypithecusfrancoisiBreeding Center during May to June 2015. A total of 199 samples (including 2 dander samples， 70 blood samples， and 127 feces samples) were collected from 72 langurs. The results showed that 22 feces samples were infected with 100-1 850Trichuris(Trichurisspp.) eggs per gram. The infection rates of adult， sub-adult， male and female were 31.25%， 29.17%， 31.58% and 29.41%， respectively. Thettest of independent sample showed that the infection rate of adult and sub-adult had no significant difference (t=1.834，df=2，P>0.05)， as well as that between male and female (t=1.089，df=2，P>0.05). The egg reduction rate was 94% when the monkeys were treated with albendazole and ivermectin tablets at a concentration of 0.1 g·kg-1for 5 d. Our findings suggested that the compound albendazole and ivermectin tablets were effective drugs forTrichurisinfection in primates.

Trachypithecusfrancoisi； parasite； investigation； prevention

2016-09-08 接受日期：2016-10-09

廣西梧州市科學(xué)技術(shù)局資助項目(201401032)

10.11984/j.issn.1000-7083.201600242

Q959.8； S855.9

A

1000-7083(2017)01-0061-04

*通信作者Corresponding author, 男, 獸醫(yī)師, E-mail：173716395@qq.com