湖北省首例人感染H5N6禽流感病例實(shí)驗室檢測結(jié)果分析

王喜云，侯 敏，梅玉發(fā)，汪 倩，鄭向梅，易衛(wèi)兵

湖北省首例人感染H5N6禽流感病例實(shí)驗室檢測結(jié)果分析

王喜云，侯 敏，梅玉發(fā)，汪 倩，鄭向梅，易衛(wèi)兵

目的 分析湖北省首例人感染H5N6禽流感病例的實(shí)驗室檢測結(jié)果，為更好地檢測人禽流感疑似病例標(biāo)本提供參考。方法 對患者的不同病程、不同種類的標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗室檢測并進(jìn)行分析。結(jié)果 我省首例人感染H5N6禽流感確診病例只有前期的痰液標(biāo)本檢測到H5N6核酸，其它時間未檢測到。結(jié)論 疑似人感染 H5N6 禽流感病例標(biāo)本采集一定多樣化，而且一定采集到初期的痰液標(biāo)本。

H5N6；實(shí)驗室；標(biāo)本；人禽流感

2016年4月15日晚10點(diǎn)，十堰市西苑醫(yī)院收治一例由神農(nóng)架林區(qū)轉(zhuǎn)來的“不明原因重癥肺炎”患者，經(jīng)國家、省、市疾控中心流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗室檢測，確認(rèn)該病例為我省首例H5N6人禽流感病例。H5N6是流感病毒的一種亞型，來源為禽類。H5N6禽流感病毒是一個低毒性的菌株，它在禽類中不會引起嚴(yán)重的疾病，然而人類感染后，臨床表現(xiàn)嚴(yán)重[1]。H5N6導(dǎo)致人感染和傳播的風(fēng)險較低，目前尚未發(fā)現(xiàn)人傳人的證據(jù)[2-4]。此前國內(nèi)僅發(fā)現(xiàn)6例人感染H5N6禽流感病例，關(guān)于人感染H5N6禽流感病例實(shí)驗室檢測情況報道較少[5]，現(xiàn)將我市首例病例的實(shí)驗室檢測情況與結(jié)果匯報如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源和種類 2016年4月至6月分多次采集患者的鼻拭子、咽拭子、痰液、肺分泌物、肺洗液等標(biāo)本。

1.2 檢測方法

1.2.1 儀器與試劑 Real-time PCR儀(ABI 7300，美國)，病毒RNA提取試劑盒Rneasy Mini Kit(Cat. No：74104，QIAGEN公司)，病毒核酸提取試劑盒(磁珠法;型號:Ex-RNA/DNA，西安天隆科技有限公司)，禽流感病毒RNA檢測試劑盒(PCR熒光法，AB公司)，PCR擴(kuò)增引物探針由國家流感中心提供，H7N9、 H5N1、H10N8，H5N2檢測試劑盒由北京金豪、江蘇碩世、上海之江科技有限公司提供，后期H5N6檢測試劑由湖北省疾控中心提供。

1.2.2 方法及結(jié)果判定 病毒RNA提取按照試劑盒相關(guān)說明書進(jìn)行；Real-time PCR擴(kuò)增反應(yīng)按照試劑盒相關(guān)說明書進(jìn)行.結(jié)果按以下方法判定：陰性對照或標(biāo)本陰性無Ct值或Ct值為0，陽性對照Ct值<30，檢測標(biāo)本Ct值≤35為陽性。

1.3 質(zhì)量控制 標(biāo)本采集者均是檢驗專業(yè)應(yīng)急隊員，經(jīng)過了專業(yè)的培訓(xùn)。實(shí)驗室核酸提取采用兩種方法、兩名實(shí)驗人員操作、體系使用兩個廠家的試劑盒、每次試驗均設(shè)陰陽性對照且重復(fù)1次。

2 結(jié) 果

2.1 實(shí)驗室前期(發(fā)病1周內(nèi))檢測結(jié)果 2016年4月16日凌晨神農(nóng)架疾控中心與十堰市疾控中心采集患者鼻咽拭子以及痰液進(jìn)行核酸檢測，鼻咽拭子陰性，痰液A通陽性、H5陽性。4月16日上午十堰市疾控中心采集患者的肺分泌液、肺洗液、鼻拭子和3份痰液后一分為二，一份開展檢測工作，另一份送至湖北省疾控中心，兩地經(jīng)甲型流感病毒通用，禽流感病毒H5、H7、H9、AN1、AN2、AN9和AN6核酸分型檢測，檢出患者3份痰液樣本為H5陽性(十堰)、H5N6陽性(省疾控)，其余標(biāo)本均為陰性。4月19日，經(jīng)中國疾控中心復(fù)核，結(jié)合病例臨床表現(xiàn)和流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，報告為湖北省首例確診H5N6病例。

表1 病例初期各類標(biāo)本3家實(shí)驗室檢測結(jié)果
Tab.1 Detected results of specimens in three laboratories in the early stage

檢測時間檢測單位標(biāo)本種類檢測項目PCR結(jié)果2016.04.15神農(nóng)架林區(qū)疾病預(yù)防控制中心鼻咽拭液A型通用、H5、AN1陰性痰液陽性2016.04.16十堰市疾病預(yù)防控制中心鼻咽拭液A型、B型通用、H5、AN1、H7、陰性痰液AN9、H9、AN2、H10、AN8H5陽性2016.04.19湖北省疾病預(yù)防控制中心流感肺分泌液A型通用、H5、AN1、AN6陰性參比實(shí)驗室肺洗液陰性鼻拭液陰性痰液H5N6陽性

2.2 實(shí)驗室中期(發(fā)病1周后至出院1周前)檢測結(jié)果 4月21日及27日十堰市疾控中心2次進(jìn)行H5N6核酸檢測均為陰性。

表2 病例中期各類標(biāo)本實(shí)驗室檢測結(jié)果
Tab.2 Detection results of specimens in the different laboratories in the medium stage

檢測時間檢測單位標(biāo)本PCR檢測結(jié)果A型通用H5AN62016.04.21十堰市疾控中心鼻咽拭液陰性陰性陰性2016.04.27十堰市疾控中心鼻咽拭液陰性陰性陰性上呼吸道痰液陰性陰性陰性下呼吸道痰液陰性陰性陰性2016.05.19湖北省疾控中心流感參比實(shí)驗室咽拭子2份陰性陰性陰性上呼吸道拭液陰性陰性陰性下呼吸道拭液陰性陰性陰性下呼吸道分泌液陰性陰性陰性

2.3 實(shí)驗室后期(出院前1周內(nèi))檢測結(jié)果 2016年6月6號及8號再次采集標(biāo)本，經(jīng)十堰市疾控中心和湖北省疾控中心流感參比實(shí)驗室對采集的病人痰液、鼻咽拭液、血清等進(jìn)行H5N6核酸檢測結(jié)果為陰性，達(dá)到出院標(biāo)準(zhǔn)。6月13號，病人康復(fù)出院。

表3 病例晚期各類標(biāo)本實(shí)驗室檢測結(jié)果
Tab.3 Detection results of specimens in the different laboratories in the later stage

檢測時間檢測單位標(biāo)本PCR檢測結(jié)果A型通用H5AN62016.06.06十堰市疾控中心痰液陰性陰性陰性鼻咽拭液陰性陰性陰性2016.06.08湖北省疾控中心流感參比實(shí)驗室鼻拭液陰性陰性陰性痰液陰性陰性陰性血清陰性陰性陰性血凝塊陰性陰性陰性

3 討 論

目前國內(nèi)外有關(guān)人感染 H5N6 禽流感病例的相關(guān)報道和研究較少[4,6-7]，有關(guān)實(shí)驗室檢測報道更少。此病例為湖北省首次發(fā)現(xiàn)報告H5N6 流感病例。本次報告的H5N6病例經(jīng)兩個月治療康復(fù)出院，與文獻(xiàn)[6]報道的病例不同。

本病例初期、中期、后期采集不同種類的標(biāo)本，但只有前期的痰液標(biāo)本檢測到H5N6核酸，其它標(biāo)本均未檢測到，此情況與文獻(xiàn)[2]報道不同，此病例檢測結(jié)果提示，遇到重大不明原因的病例標(biāo)本，要多次多樣采集標(biāo)本，以避免造成結(jié)果的失誤；其次，提醒地市一級疾控機(jī)構(gòu)的實(shí)驗室除儲備常用的檢測試劑外，還應(yīng)儲備一些不常用的試劑，以能夠及時準(zhǔn)確的出具結(jié)果，為疫情的控制提供保障。

本病例研究的不足之處在于前期由于病人病重未能每天采樣，中期由于無痰液標(biāo)本，故而無法確定不帶毒的時間。

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Detection results from first case of human infection with avian influenza (H5N6) in Hubei Province, China

WANG Xi-yun, HOU Ming, MEI Yu-fa, WANG Qian, ZHENG Xiang-mei, YI Wei-bing

(ShiyanCenterforDiseaseControlandPrevention,Shiyan442000,China)

We analyzed the laboratory detection results from the first case of human infected with avian influenza (H5N6) in Hubei Province, in order to provide a better basis for preventing and controlling human avian influenza in the future and a detected strategy for the detection of suspected cases of human avian influenza for the staff in the laboratory . The case data of epidemiological survey and related laboratory detection results of specimens of infection virus from the different time piont and kinds of specimens were analyzed by descriptive epidemiological methods. The H5N6 nucleic acid from the only early sputum specimens were detected, and while the others were not detected.In conclusion the different specimens of the doubtful H5N6 case should be collected, and the early sputum samples are very important and should be collected and detected.

H5N6; laboratory; specimens; human avian influenza

Zheng Xiang-mei，Email: 494698225@qq.com

10.3969/j.issn.1002-2694.2017.01.017

鄭向梅，Email: 494698225@qq.com

十堰市疾病預(yù)防控制中心，十堰 442000

R511.7

C

1002-2694(2017)01-0089-03

2016-07-27 編輯：王曉歡