• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    分子印跡固相萃取技術(shù)對(duì)六堡茶中表兒茶素的分離特性

    2017-02-08 07:42:48劉伯洋李利軍黃文藝孔紅星
    食品科學(xué) 2017年2期
    關(guān)鍵詞:六堡印跡兒茶素

    劉伯洋,李利軍,程 昊,黃文藝,馮 軍,孔紅星,*

    分子印跡固相萃取技術(shù)對(duì)六堡茶中表兒茶素的分離特性

    劉伯洋1,李利軍1,程 昊1,黃文藝1,馮 軍2,孔紅星1,*

    (1.廣西科技大學(xué)生物與化學(xué)工程學(xué)院,廣西糖資源綠色加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西 柳州 545006;2.廣西科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院,廣西 柳州 545005)

    以表兒茶素為模板分子,丙烯酰胺為功能單體,偶氮二異丁腈作為引發(fā)劑,乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑,通過原位聚合法制備分子印跡聚合物。首先考察不同模板分子、功能單體、交聯(lián)劑比例條件下表兒茶素分子印跡聚合物的特異性吸附能力。結(jié)果表明表兒茶素與丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯物質(zhì)的量比為1∶6∶40時(shí),分子印跡聚合物的吸附效果最佳,其模板分子回收率KMIPs為84.62%,特異性識(shí)別因子Q為4.55;然后利用掃描電子顯微鏡和紅外光譜技術(shù)對(duì)制備的印跡聚合材料進(jìn)行表征;最后在毛細(xì)管電泳最優(yōu)條件下對(duì)加載過固相萃取柱的過柱液與洗脫液進(jìn)行檢測(cè),建立分子印跡固相萃取-毛細(xì)管電泳聯(lián)用檢測(cè)表兒茶素的方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,分子印跡聚合物成功聚合,形貌良好且具有專一吸附特性。該方法適用于六堡茶中表兒茶素的檢測(cè)。

    分子印跡;表兒茶素;固相萃取;毛細(xì)管電泳

    六堡茶是中國千年名茶,屬黑茶類,因原產(chǎn)于廣西壯族自治區(qū)梧州市蒼梧縣六堡鄉(xiāng)而得名。表兒茶素是六堡茶葉中主要活性成分之一,約占兒茶素含量的40%~50%。研究表明,表兒茶素具有防治心血管疾病[1]、預(yù)防癌癥、抗氧化[2-3]等生物活性作用。尋找合適方法分離與測(cè)定六堡茶中表兒茶素,已經(jīng)成為廣西本地茶資源推廣的重要考量依據(jù)。目前檢測(cè)表兒茶素的方法主要有高效液相色譜法[4-5]、毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis,CE)法[6]等,但這些方法普遍存在預(yù)處理步驟復(fù)雜、檢測(cè)出樣品峰受雜質(zhì)峰干擾嚴(yán)重或無法檢測(cè)出峰等缺點(diǎn)。

    分子印跡固相萃?。╩olecularly imprinted solidphase extraction,MISPE)技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新型SPE技術(shù)。通過化學(xué)方法合成分子印跡聚合物(molecularly imprinted polymers,MIPs),利用印跡分子對(duì)實(shí)際樣品中某一特定分子具有特異性識(shí)別機(jī)理的特性,對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行選擇性分離。在MISPE過程中,模板分子會(huì)與MIPs中特定大小與形狀的空穴相結(jié)合,從而將目標(biāo)分子保留在SPE柱內(nèi),然后將其洗脫下來,此時(shí)洗脫液中僅含有模板分子,從而達(dá)到對(duì)目標(biāo)分子純化的效果。與傳統(tǒng)SPE法相比,MIPs對(duì)模板分子擁有較好的吸附性與選擇性,可以在復(fù)雜體系中選擇性吸附目標(biāo)分子并將其更穩(wěn)定的保存至柱內(nèi),只有使用較強(qiáng)洗脫效果的洗脫溶液才能將目標(biāo)分子從MIPs上洗脫下來。這種選擇性吸附特性在天然活性物質(zhì)分離領(lǐng)域內(nèi)顯示出良好的應(yīng)用前景[7-13]。本實(shí)驗(yàn)采用原位聚合法制備表兒茶素MIPs,建立一種新的MISPE-CE聯(lián)用檢測(cè)方法以降低雜質(zhì)峰干擾,從而更好的對(duì)六堡茶中表兒茶素進(jìn)行分離與測(cè)定。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    六堡茶 市購;表兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)品、乙二醇二甲基丙烯酸酯(ethylene glycol dimethacrylate,EGDMA)(用前重結(jié)晶除阻聚劑)、偶氮二異丁腈(azobisisobutyronitrile,AIBN) 上海阿拉丁試劑有限公司;丙烯酰胺(azobisisobutyronitrile,AM),甲醇、乙醇、冰乙酸、正丙醇、1,4-丁二醇(均為分析純) 西隴化工股份有限公司;十六烷基三甲基溴化銨(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;水為實(shí)驗(yàn)室自制去離子雙蒸水。

    1.2 儀器與設(shè)備

    ACS2000型高效CE儀(正、負(fù)電源,電壓0~30 kV可調(diào),未涂層熔融石英毛細(xì)管(50 cm×75 μm,有效長(zhǎng)度36 cm)) 北京彩陸科學(xué)儀器有限公司;UV-2102PC型紫外-可見分光光度計(jì) 尤尼柯(上海)儀器有限公司;AR124CN電子天平 上海奧豪斯有限公司;RE-5203旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;DL-60D超聲波清洗器 上海之信儀器有限公司;傅里葉變換紅外分光光度計(jì) 上海珀金埃爾默儀器有限公司;HV 04-55場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡 德國蔡司公司;ZFD-A5040A全自動(dòng)新型鼓風(fēng)干燥箱 上海智城分析儀器制造有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 表兒茶素MIPs的制備

    采用原位聚合法合成表兒茶素MIPs:以表兒茶素為模板分子,AM為功能單體,EGDMA為交聯(lián)劑,AIBN為引發(fā)劑,正丙醇與1,4-丁二醇混合溶液為致孔劑,分別按不同比例制備MIPs,如表1所示。

    表1 制備表兒茶素MIPs的物料組成Table1 Chemicals used for making L-epicatechin MIPPss

    以P3為例,稱取0.007 23 g(0.002 5 mmol)表兒茶素溶于正丙醇與1,4-丁二醇混合溶液中,加入0.010 8 g(0.15 mmol)AM,將混合溶液置于振蕩器中振蕩0.5 h,使AM與表兒茶素在溶劑中充分混合溶解,然后加入189 μL(1 mmol)EGDMA與1 mg(0.6 mmol)AIBN,將混合溶液放入超聲波清洗器中,在30 ℃條件下超聲脫氣20 min,然后用移液槍取80 μL混合溶液至200 μL移液槍槍頭中,充氮除氧10 min,密封槍頭兩端。將處理好的槍頭放入55 ℃恒溫水浴鍋中加熱24 h,加熱結(jié)束后取出槍頭得到圖1A所示的MISPE小柱,槍頭前端白色固體即為MIPs。將注射器與SPE小柱相連接如圖1B所示,用甲醇-冰乙酸(9∶1,V/V)混合溶液沖洗聚合物以去除MIPs中的模板分子,至洗脫液中檢測(cè)不到模板分子時(shí)停止洗脫。再用甲醇溶液對(duì)其進(jìn)行二次洗脫,以除去殘留在萃取柱上的冰乙酸。最后將其放入鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)60 ℃真空干燥24 h,將得到的聚合物槍頭放入干燥器中備用。

    圖1 SPE柱效果圖Fig. 1 Solid phase extraction column

    作為對(duì)照實(shí)驗(yàn),非印跡聚合物(non-molecularly imprinted polymers,NMIP)在無模板分子存在條件下利用相同條件制備。

    1.3.2 MIPs與NMIP模板分子回收率實(shí)驗(yàn)

    采用SPE-CE法評(píng)價(jià)聚合物對(duì)模板分子的回收率。取制備好的P1、P2、P3、P4與NP1、NP2、NP3、NP4(NP為與聚合物P相對(duì)應(yīng)的非印記聚合物)8 根SPE柱,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將相同體積與物質(zhì)的量的表兒茶素溶液加載至各組SPE柱上端,使用甲醇與冰乙酸對(duì)SPE柱進(jìn)行洗脫,最終得到8 組洗脫液。將各組洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至干,然后用甲醇定容至初始體積,最后利用CE技術(shù)檢測(cè)8 組洗脫液中表兒茶素的物質(zhì)的量。根據(jù)實(shí)驗(yàn)前后溶液中表兒茶素物質(zhì)的量的變化可計(jì)算聚合物模板分子回收率與特異性識(shí)別因子(Q)。

    模板分子回收率按公式(1)計(jì)算:

    式中:K為模板分子回收率/%;Cp為經(jīng)過萃取柱后洗脫溶液中所含表兒茶素的物質(zhì)的量/mol;Cc為表兒茶素在溶液中的物質(zhì)的量/mol。

    特異性識(shí)別因子(Q)按公式(2)計(jì)算:

    式中:Q為特異性識(shí)別因子;KMIPs為MIPs對(duì)模板分子的回收率/%;KNMIP為NMIP對(duì)模板分子的回收率/%。

    電泳條件:將相關(guān)文獻(xiàn)[14-16]與實(shí)際效果結(jié)合分析,得到CE檢測(cè)最佳條件。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度25 ℃,重力進(jìn)樣,進(jìn)樣高度15 cm,進(jìn)樣時(shí)間25 s,分離電壓-20 kV,于波長(zhǎng)230 nm處直接檢測(cè)。背景緩沖液為30 mmol/L磷酸鹽的混合體系+0.05 mmol/L CTAB+12.5%乙腈混合溶液,pH值為10.0。

    1.3.3 聚合物結(jié)構(gòu)與形貌表征

    利用傅里葉變換紅外分光光度計(jì)對(duì)表兒茶素MIPs結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。取1 mg待測(cè)物質(zhì)與100 mg KBr混合壓片,在500~4 000 cm-1光譜范圍內(nèi)分別對(duì)MIPs、NMIP與AM 3 種物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)對(duì)槍頭狀的MISPE柱水平切面,經(jīng)噴金處理后進(jìn)行電子顯微鏡掃描,以考察柱內(nèi)聚合物的形貌。

    1.3.4 MIPs選擇性能實(shí)驗(yàn)

    配制甲醇為溶劑,濃度為0.1 mmol/L的表兒茶素和表兒茶素沒食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合溶液,置于5 mL的離心管中,通過超聲除氣裝置將其混勻并脫氣。將混合溶液加載至SPE柱上端,收集過柱液,然后用甲醇淋洗萃取柱并收集淋洗液,再用甲醇-乙酸(9∶1,V/V)混合溶液對(duì)萃取柱進(jìn)行洗脫,收集洗脫液。過柱液、淋洗液與洗脫液分別在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至干,最后用甲醇定容至相同容積,再在電泳最優(yōu)條件下分別對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。

    1.3.5 樣品處理

    將六堡茶干茶葉放入中藥材粉碎機(jī)粉碎至粉末。取出適量茶葉粉末溶于乙醇溶劑,在85 ℃水浴條件下索氏提取4 h,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將提取液倒入蒸發(fā)皿中,放入烘箱烘干備用。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 聚合條件優(yōu)化

    圖2 表兒茶素分子印跡過程示意圖Fig. 2 Schematic illustration of molecularly imprinting of L-epicatechin

    表兒茶素MISPE柱的特異性吸附性能與聚合物的組成、比例等條件密切相關(guān)。對(duì)模板分子而言,選擇合適功能單體是直接影響SPE柱吸附性能的關(guān)鍵。如圖2所示,由于表兒茶素分子中4 個(gè)羥基基團(tuán)都可以形成氫鍵位點(diǎn),而AM中含有的羰基基團(tuán),易與表兒茶素分子中的多個(gè)羥基基團(tuán)以氫鍵相結(jié)合,因此選用表兒茶素作為模板分子,AM作為功能單體,并對(duì)模板分子、功能單體與交聯(lián)劑之間的配比進(jìn)行優(yōu)化與考察,以改善聚合物吸附及選擇性能。有文獻(xiàn)[17-25]報(bào)道,模板分子和功能單體比例一般為1∶4或1∶6,因?yàn)樵诖吮壤龡l件下模板分子和功能單體的結(jié)合量最大。為了考察模板分子、功能單體、交聯(lián)劑間配比對(duì)模板分子回收率的影響,對(duì)制備的8 種聚合物進(jìn)行回收率分析,如表2所示。由于表兒茶素含有多個(gè)羥基,即單個(gè)分子能與功能單體作用的識(shí)別位點(diǎn)較多,所以需要功能單體的量也比較多,但是功能單體量太大則會(huì)增加聚合物非特異性吸附能力,降低SPE柱選擇吸附性能。表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果中,按P3比例制備的MIPs回收率最高,且特異性識(shí)別因子P3的值最大,說明聚合物特異性吸附作用力最強(qiáng),非特異性吸附的影響最小。因此本實(shí)驗(yàn)選用模板分子、功能單體與交聯(lián)劑物質(zhì)的量比例為1∶6∶40作為MIPs制備最優(yōu)條件。

    表2 不同比例對(duì)聚合物模板分子回收率的影響Table2 Effect of template to functional monomer to cross-linking agent ratio on template recovery

    2.2 MIPs形態(tài)結(jié)構(gòu)表征

    圖3 聚合物紅外光譜圖Fig. 3 IR spectra of molecularly imprinted and non-imprinted polymers

    如圖3所示,AM特征峰在3 351.67、1 692.94 cm-1和1 612.68 cm-1處,這3 個(gè)吸收峰分別代表AM中N—H、C=O和C=C基團(tuán)。由圖3a可知,MIPs的C=O基團(tuán)特征峰在1 730.31 cm-1處,說明該聚合物已通過EGDMA與AM成功聚合。NMIP的C=O基團(tuán)特征峰在1 632.93 cm-1處,比MIPs特征峰值低,這是因?yàn)镸IPs中的C=O基團(tuán)受到了模板分子與功能單體之間氫健作用的影響。圖3a中3 451.95 cm-1處寬峰代表功能單體AM中N—H基團(tuán)不對(duì)稱伸縮振動(dòng),而1 454.54 cm-1處的吸收峰則是不對(duì)稱酯中C—O基團(tuán)。這些結(jié)果都可以表明MIPs已經(jīng)成功制備。

    圖4 MIPs掃描電鏡圖Fig. 4 Scanning electron micrographs of the molecularly imprinted polymer

    在最優(yōu)比例條件下所制備聚合物,通過掃描電鏡對(duì)聚合物的形貌進(jìn)行表征,如圖4所示。聚合物呈顆粒狀疊加在一起,且擁有疏松多孔、分散性均一的特點(diǎn),這種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)使MIPs在SPE過程中具有較大比表面積與較低流動(dòng)阻力,這些優(yōu)點(diǎn)有助于增強(qiáng)其在樣品中特異性吸附性能。

    2.3 MIPs選擇性吸附實(shí)驗(yàn)

    為近一步研究MIPs在SPE過程中選擇特性,本實(shí)驗(yàn)選用濃度0.1 mmol/L表兒茶素與表兒茶素沒食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合溶液,其結(jié)構(gòu)式如圖5所示。對(duì)該混合溶液進(jìn)行SPE實(shí)驗(yàn),如圖6所示。

    圖5 表兒茶素(A)與表兒茶素沒食子酸酯(B)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig. 5 Structures of L-epicatechin (A) and epicatechin-gallate (B)

    圖6 MISPE過程中物混合溶液的CCEE圖Fig. 6 Capillary electropherograms of mixed solutions obtained during molecularly imprinted solid phase extraction

    圖6 a表明,在最優(yōu)電泳條件下混合溶液中表兒茶素與表兒茶素沒食子酸酯完全分離,峰形良好;在圖6b中,經(jīng)過MISPE柱后過柱液僅檢測(cè)出小部分表兒茶素沒食子酸酯,這是因?yàn)楸韮翰杷嘏c大部分表兒茶素沒食子酸酯已經(jīng)吸附在MIPs上,沒有隨過柱液流出;SPE柱經(jīng)甲醇淋洗后,淋洗液中僅能檢測(cè)到表兒茶素沒食子酸酯(圖6c);采用更強(qiáng)洗脫能力的甲醇-乙酸(9∶1,V/V)溶液對(duì)SPE柱進(jìn)行洗脫后,表兒茶素成功被洗脫下來如圖6d所示,模板分子在該洗脫溶劑條件下的回收率達(dá)到84.62%。比較混合溶液中2 種物質(zhì)結(jié)構(gòu)式(圖5)不難發(fā)現(xiàn),表兒茶素沒食子酸酯空間體積遠(yuǎn)大于表兒茶素,所以不容易進(jìn)入以表兒茶素為模板分子合成的MIPs孔穴中。而由圖6b可知,部分表兒茶素沒食子酸酯吸附在MIPs上,這是因?yàn)镾PE柱本身具有非特異性吸附作用,但這種弱吸附作用很容易被淋洗下來。因?yàn)楸韮翰杷厥俏皆谔囟ㄐ蚊才c大小的印跡孔穴內(nèi),所以只有采用更強(qiáng)效果洗脫液才能將其洗脫下來。MIPs對(duì)不同分子具有不同的吸附能力,這種吸附特性使得表兒茶素分子在MISPE過程中被特異性吸附在SPE柱上,再經(jīng)洗脫液流出,從而達(dá)到對(duì)復(fù)雜樣品中目標(biāo)分子的純化作用。

    2.4 實(shí)際樣品檢測(cè)

    圖7 六堡茶樣品過柱前后CE圖Fig. 7 CE chromatogram of L-picatechin before and after MISPE

    為了驗(yàn)證表兒茶素MISPE柱在實(shí)際樣品中選擇特性,對(duì)六堡茶樣品進(jìn)行CE檢測(cè)。配制甲醇作溶劑0.1 mmol/L樣品溶液在最優(yōu)電泳條件下檢測(cè),如圖7所示。由于六堡茶成分復(fù)雜,所以在圖7a中表兒茶素色譜峰周圍存在很多雜峰。而在過柱洗脫液中這些雜峰在很大程度上減弱甚至消失(圖7b)。這說明表兒茶素MISPE柱特異性吸附能力較強(qiáng),有效分離出表兒茶素分子,從而較好避免實(shí)際樣品中雜質(zhì)峰的干擾,且具備較高模板分子回收率。

    3 結(jié) 論

    本實(shí)驗(yàn)采用原位聚合法在移液槍頭中制備表兒茶素MIPs。對(duì)不同組成比例MIPs與NMIP的模板分子回收率進(jìn)行了對(duì)比分析。并對(duì)聚合物的結(jié)構(gòu)與形貌進(jìn)行表征,同時(shí)對(duì)多種溶質(zhì)混合物與實(shí)際樣品進(jìn)行SPE實(shí)驗(yàn),所得到的過柱液、淋洗液與洗脫液利用CE技術(shù)進(jìn)行分析檢測(cè)。結(jié)果表明MISPE柱對(duì)表兒茶素具有專一吸附特性。本實(shí)驗(yàn)制備方法操作簡(jiǎn)單,使用原位聚合技術(shù)免去了傳統(tǒng)本體聚合技術(shù)中研磨聚合物與裝填萃取柱步驟,保證了聚合物形貌不被破壞,所制備的SPE柱可以多次重復(fù)使用,同時(shí)也為六堡茶中表兒茶素的檢測(cè)提供了一種新方法。

    [1] 曹瑩, 梁日欣, 楊濱, 等. (-)-兒茶素沒食子酸酯和(+)-表兒茶素對(duì)心肌細(xì)胞保護(hù)作用研究[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2006, 12(10): 36-38. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2006.10.017.

    [2] 黃仁術(shù), 易凡, 何惠利, 等. 金蕎麥(-)-表兒茶素抗氧化活性研究[J].食品科學(xué), 2014, 35(15): 118-121. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201415024.

    [3] YVONNE S, TANKRED S, HELMUT S. Epicatechin protects endothelial cells against oxidized LDL and maintains NO synthase[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2005, 331(4): 1277-1283. DOI:10.1016/j.bbrc.2005.04.035.

    [4] QIAN Yumei, ZHAO Xianqian, ZHAO Lei, et al. Analysis of stereochemistry and biosynthesis of epicatechin in tea plants by chiral phase high performance liquid chromatography[J]. Journal of Chromatography B Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences, 2015, 1006: 1-7. DOI:10.1016/j.jchromb.2015.10.024.

    [5] DIAS F D S, MIGUEL P L, CARMELO G B, et al. Optimization and validation of a method for the direct determination of catechin and epicatechin in red wines by HPLC/fluorescence[J]. Microchemical Journal, 2010, 96(1): 17-20. DOI:10.1016/j.microc.2010.01.004.

    [6] 衷明華, 嚴(yán)贊開, 林燕如. 毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定茶葉中咖啡因、茶氨酸、表兒茶素和表沒食子兒茶素沒食子酸酯[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(24): 286-288. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201224061.

    [7] DU Ting, CHENG Jing, WU Min, et al. An in situ immobilized pipette tip solid phase microextraction method based on molecularly imprinted polymer monolith for the selective determination of difenoconazole in tap water and grape juice[J]. Journal of Chromatography B, 2014, 951: 104-109. DOI:10.1016/j.jchromb.2014.01.030.

    [8] SHAN Huikai, ZHAO Lingguo, CHEN Jian, et al. Preparation, characterization and application of molecularlyimprinted monolithic column for hesperetin[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2015, 111: 241-247. DOI:10.1016/j.jpba.2015.04.006.

    [9] JI Xiang, LI Dan, LI Hua. Preparation and application of a novel molecularly imprinted solid-phase microextraction monolith for selective enrichment of cholecystokinin neuropeptides in human cerebrospinal fluid[J]. Biomedical Chromatography, 2015, 29(8): 1280-1289. DOI:10.1002/bmc.3418.

    [10] 汪雪雁, 檀華蓉, 祁克宗, 等. 分子印跡固相萃取-高效毛細(xì)管電泳法檢測(cè)雞肉中的恩諾沙星殘留[J]. 色譜, 2010, 28(11): 1107-1110. DOI:10.3724/SP.J.1123.2010.01107.

    [11] VICTORIA S, MARIA K, ABUZAR K, et al. Matrix molecularly imprinted mesoporous sol-gel sorbent for efficient solid-phase extraction of chloramphenicol from milk[J]. Analytica Chimica Acta, 2016, 914: 62-74. DOI:10.1016/j.aca.2016.02.003.

    [12] HARUM N, ANDERSON R A, CORMACK P A G. Analysis of ketamine and norketamine in hair samples using molecularly imprinted solid-phase extraction (MISPE) and liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2010, 396(7): 2449-2459. DOI:10.1007/s00216-009-3404-6.

    [13] SHEN Zhonglan, YUAN Dong, SU Qingde, et al. Selective solidphase extraction using molecularly imprinted polymer for analysis of methamidophos in water and soil samples[J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2011, 75(3): 473-479. DOI:10.1271/ bbb.100668.

    [14] 馬曉年, 邵婭婷, 李菲, 等. 毛細(xì)管電泳分離檢測(cè)茶葉中5 種多酚類化合物[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(8): 129-132. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201408025.

    [15] 李利軍, 馮軍, 黃文藝, 等. 高效毛細(xì)管電泳同時(shí)分離測(cè)定梔子苷、芍藥苷及丹皮酚的研究[J]. 分析試驗(yàn)室, 2007, 26(5): 38-41. DOI:10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2007.0131.

    [16] 張凱歌, 胡玉玲, 胡玉斐, 等. 分子印跡微萃取技術(shù)的研究進(jìn)展[J].色譜, 2012, 30(12): 1220-1228. DOI:10.3724 /SP.J.1123.2012.08002.

    [17] 顏流水, 井晶, 黃智敏, 等. 槲皮素分子印跡聚合物的制備及固相萃取性能研究[J]. 分析試驗(yàn)室, 2006, 25(5): 97-100. DOI:10.3969/ j.issn.1000-0720.2006.05.026.

    [18] MOHAMMAD K, FOROUZAN A, HAMID R L Z Z, et al. Determination of sulfonamides in chicken meat by magnetic molecularly imprinted polymer coupled to HPLC-UV[J]. Food Analytical Methods, 2014, 7(1): 73-80. DOI:10.1007/s12161-013-9600-1.

    [19] WHITCOMBE M J, KIRSCH N, NICHOLLS I A. Molecular imprinting science and technology: a survey of the literature for the years 2004-2011[J]. Journal of Molecular Recognition, 2014, 27(6): 297-401. DOI:10.1002/jmr.2347.

    [20] BERNADETTE T S B, KARSTEN H. Molecularly imprinted polymers: synthetic receptors in bioanalysis[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2010, 398(6): 2481-2492. DOI:10.1007/ s00216-010-4158-x.

    [21] JULIA S, SAMUEL S R D, YERRAMILLI A, et al. Molecularly imprinted polymers for detection of explosives: computational study on molecular interactions of 2,6-dinitrotoluene and methacrylic acid complex[J]. Structural Chemistry, 2010, 21(6): 1171-1184. DOI:10.1007/s11224-010-9657-z.

    [22] ZHONG Dandan, LIU Xin, PANG Qianqian, et al. Rapid preparation of molecularly imprinted polymer by frontal polymerization[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2013, 405(10): 3205-3214. DOI:10.1007/s00216-013-6722-7.

    [23] WANG Xuejiao, DONG Shaohua, BAI Quan. Preparation of lysozyme molecularly imprinted polymers and purification of lysozyme from egg white[J]. Biomedical Chromatography, 2014, 28(6): 907-912. DOI:10.1002/bmc.3207.

    [24] BURCU O, SECIL O. Molecularly imprinted polymers for separation of various sugars from human urine[J]. Talanta, 2011, 87: 74-79. DOI:10.1016/j.talanta.2011.09.043.

    [25] CLAUDIO B, PATRIZIA B, CRISTINA G, et al. Molecularly imprinted polymers for corticosteroids: analysis of binding selectivity[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2010, 26(2): 590-595. DOI:10.1016/j.bios.2010.07.023.

    Separation of L-Epicatechin in Liubao Tea by Molecularly Imprinted Solid Phase Extraction

    LIU Boyang1, LI Lijun1, CHENG Hao1, HUANG Wenyi1, FENG Jun2, KONG Hongxing1,*
    (1. Guangxi Key Laboratory of Green Processing of Sugar Resources, College of Biological and Chemical Engineering, Guangxi University of Science and Technology, Liuzhou 545006, China; 2. College of Medical, Guangxi University of Science and Technology, Liuzhou 545005, China)

    Molecularly imprinted polymers (MIPs) were synthesized by in situ polymerization using L-epicatechin as the template molecule, acrylamide (AM) as the functional monomer, azobisisobutyronitrile (AIBN) as the initiator, and ethylene glycol dimethacrylate (EGDMA) as the cross-linking agent. Firstly, the specific adsorption capacity of L-epicatechin MIPs was evaluated as a function of the proportions of template molecule, functional monomer, and cross-linking agent. The results showed that when the molar ratio of L-epicatechin to acrylamide to ethylene glycol dimethacrylate was 1:6:40, MIPs exhibited the best adsorption capacity, with template molecule recovery (KMIPs) of 84.62% and specific recognition factor (Q) of 4.55. Scanning electron microscope (SEM) and Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) were used to characterize the MIPs. Finally, we used capillary electrophoresis to detect the effluent and the eluate under optimum conditions. As a result, a molecularly imprinted solid phase extraction-capillary electrophoresis (MISPE-CE) method for the determination of L-epicatechin was developed. The experimental results showed that molecularly imprinted polymers were successfully synthesized with good morphology and specific adsorption characteristics. This method is feasible for the analysis of L-epicatechin in Liubao tea.

    molecular imprinting; L-epicatechin; solid phase extraction; capillary electrophoresis

    10.7506/spkx1002-6630-201702027

    O658

    A

    1002-6630(2017)02-0164-06

    劉伯洋, 李利軍, 程昊, 等. 分子印跡固相萃取技術(shù)對(duì)六堡茶中表兒茶素的分離特性[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(2): 164-169. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201702027. http://www.spkx.net.cn

    LIU Boyang, LI Lijun, CHENG Hao, et al. Separation of L-epicatechin in Liubao tea by molecularly imprinted solid phase extraction[J]. Food Science, 2017, 38(2): 164-169. (in Chinese with English abstract)

    10.7506/spkx1002-6630-201702027. http://www.spkx.net.cn

    2016-03-30

    廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014GXNSFAA118402);廣西高等學(xué)校高水平創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)及卓越學(xué)者計(jì)劃資助項(xiàng)目

    劉伯洋(1991—),男,碩士研究生,研究方向?yàn)榉肿佑≯E技術(shù)開發(fā)與應(yīng)用。E-mail:www.lby746129579@qq.com

    *通信作者:孔紅星(1967—),男,研究員,碩士,研究方向?yàn)榉治鰷y(cè)試技術(shù)與糖資源綜合利用。E-mail:khx100@sina.com

    猜你喜歡
    六堡印跡兒茶素
    馬 浩
    陶瓷研究(2022年3期)2022-08-19 07:15:18
    走進(jìn)大美滇西·探尋紅色印跡
    參觀六堡開茶節(jié)游記
    西江月(2021年2期)2021-11-12 20:15:42
    超高效液相色譜法測(cè)定茶葉中的兒茶素
    六堡茶機(jī)采茶園建設(shè)與管理關(guān)鍵技術(shù)
    成長(zhǎng)印跡
    與茶相逢在六堡
    西江月(2017年1期)2017-01-17 03:31:34
    印跡
    中國攝影(2014年12期)2015-01-27 13:57:04
    全甲基化沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備
    兒茶素酶促制備茶黃素的研究進(jìn)展
    茶葉通訊(2014年2期)2014-02-27 07:55:38
    精品久久久久久电影网| 精品久久蜜臀av无| 日本wwww免费看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 丰满饥渴人妻一区二区三| 99热国产这里只有精品6| 久久久久久免费高清国产稀缺| 青草久久国产| 老汉色∧v一级毛片| 丝袜人妻中文字幕| 一级黄色大片毛片| 后天国语完整版免费观看| 波多野结衣av一区二区av| 91精品国产国语对白视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久久久精品国产欧美久久久 | 久久久久久久久免费视频了| 午夜久久久在线观看| 满18在线观看网站| 国产av精品麻豆| 久久久久精品人妻al黑| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲,欧美精品.| 亚洲 国产 在线| 纯流量卡能插随身wifi吗| 自线自在国产av| 亚洲久久久国产精品| 人成视频在线观看免费观看| 操出白浆在线播放| 久久 成人 亚洲| 国产精品国产三级国产专区5o| 日本91视频免费播放| 亚洲,欧美精品.| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美一级毛片孕妇| 美女福利国产在线| 老熟女久久久| 91av网站免费观看| 国产97色在线日韩免费| 午夜福利影视在线免费观看| 国产野战对白在线观看| 黄片小视频在线播放| 日韩人妻精品一区2区三区| 在线av久久热| 手机成人av网站| 国产又爽黄色视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 一本一本久久a久久精品综合妖精| 99国产精品一区二区蜜桃av | 久久久久国内视频| 男女国产视频网站| 五月天丁香电影| 国产野战对白在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲成国产人片在线观看| 久久精品国产综合久久久| 三上悠亚av全集在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 国产在线观看jvid| 悠悠久久av| 蜜桃国产av成人99| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 在线天堂中文资源库| 亚洲国产日韩一区二区| 精品乱码久久久久久99久播| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线永久观看黄色视频| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美 日韩 精品 国产| 久久99热这里只频精品6学生| 黑人猛操日本美女一级片| av片东京热男人的天堂| 夜夜夜夜夜久久久久| 中文字幕色久视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产人伦9x9x在线观看| 国产男女内射视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 午夜成年电影在线免费观看| 夫妻午夜视频| 免费av中文字幕在线| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美精品一区二区免费开放| 在线观看免费日韩欧美大片| 免费观看人在逋| 日韩欧美免费精品| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 午夜免费成人在线视频| 午夜激情av网站| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲精品在线美女| 国产精品影院久久| 久热这里只有精品99| 亚洲中文av在线| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 亚洲中文日韩欧美视频| 中文字幕av电影在线播放| av在线播放精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 色播在线永久视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲 欧美一区二区三区| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜福利影视在线免费观看| 精品福利观看| 不卡一级毛片| av在线老鸭窝| 少妇被粗大的猛进出69影院| 日韩三级视频一区二区三区| 俄罗斯特黄特色一大片| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲天堂av无毛| 成人国产av品久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 欧美日韩福利视频一区二区| 一级毛片精品| 999久久久国产精品视频| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 丝袜美足系列| 午夜影院在线不卡| 超色免费av| xxxhd国产人妻xxx| tube8黄色片| 国产福利在线免费观看视频| 2018国产大陆天天弄谢| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 黄片小视频在线播放| 久久性视频一级片| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲专区字幕在线| 秋霞在线观看毛片| 久久久精品区二区三区| 激情视频va一区二区三区| 飞空精品影院首页| 精品人妻在线不人妻| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产一区二区激情短视频 | 99香蕉大伊视频| tocl精华| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 午夜福利视频精品| 国产一级毛片在线| 51午夜福利影视在线观看| 欧美另类一区| 久久久精品区二区三区| 国产在线视频一区二区| 日韩大片免费观看网站| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久久影院123| 纯流量卡能插随身wifi吗| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 一级黄色大片毛片| 99精国产麻豆久久婷婷| 色综合欧美亚洲国产小说| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 一本大道久久a久久精品| 国产精品一区二区精品视频观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 少妇 在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 欧美精品一区二区免费开放| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| tocl精华| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩中文字幕视频在线看片| www.熟女人妻精品国产| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久久久久久精品精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 操出白浆在线播放| 久久九九热精品免费| 亚洲美女黄色视频免费看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 男女高潮啪啪啪动态图| 无限看片的www在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品视频人人做人人爽| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产精品成人在线| 老司机福利观看| 亚洲精品第二区| 美女高潮到喷水免费观看| e午夜精品久久久久久久| a级毛片黄视频| 在线永久观看黄色视频| 久久久久视频综合| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲av欧美aⅴ国产| 正在播放国产对白刺激| 新久久久久国产一级毛片| 男女边摸边吃奶| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 精品福利永久在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 久久久精品免费免费高清| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 欧美激情久久久久久爽电影 | 大陆偷拍与自拍| 大片电影免费在线观看免费| 纯流量卡能插随身wifi吗| 黄频高清免费视频| 国产av国产精品国产| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 午夜福利在线观看吧| 两个人看的免费小视频| 国产日韩欧美在线精品| 操出白浆在线播放| 手机成人av网站| 成年人免费黄色播放视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 狂野欧美激情性bbbbbb| av有码第一页| 欧美久久黑人一区二区| 十八禁高潮呻吟视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 色播在线永久视频| 久久av网站| 少妇人妻久久综合中文| 国产精品久久久久久精品古装| 久久国产精品大桥未久av| 免费av中文字幕在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产在视频线精品| 欧美激情 高清一区二区三区| 少妇人妻久久综合中文| 激情视频va一区二区三区| 视频区欧美日本亚洲| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 男女国产视频网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 中文欧美无线码| 精品少妇内射三级| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 成年女人毛片免费观看观看9 | 久久久久视频综合| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久久久国内视频| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 一级毛片电影观看| 免费黄频网站在线观看国产| 久久久国产成人免费| svipshipincom国产片| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 色老头精品视频在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲九九香蕉| 久久久久久久精品精品| 1024香蕉在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 午夜福利视频精品| 成人国产一区最新在线观看| 精品福利观看| 色播在线永久视频| 亚洲精品一区蜜桃| 美女高潮到喷水免费观看| 久久这里只有精品19| 中文字幕最新亚洲高清| 手机成人av网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久久精品免费免费高清| 亚洲一码二码三码区别大吗| 99热网站在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 一本大道久久a久久精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产精品 国内视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 曰老女人黄片| 亚洲精品国产av蜜桃| 90打野战视频偷拍视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 啦啦啦在线免费观看视频4| 中文字幕制服av| 一二三四社区在线视频社区8| 日本av免费视频播放| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 大香蕉久久成人网| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 啦啦啦啦在线视频资源| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产av一区二区精品久久| 久久免费观看电影| 国产av国产精品国产| 久久狼人影院| 国产97色在线日韩免费| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 欧美成狂野欧美在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲av美国av| 国产精品免费大片| 亚洲伊人色综图| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久久精品区二区三区| 亚洲人成电影观看| 97精品久久久久久久久久精品| 国产有黄有色有爽视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久av网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产日韩欧美在线精品| 国产成人欧美在线观看 | 国产精品熟女久久久久浪| 久久久国产精品麻豆| 国产精品一区二区在线不卡| 国产免费av片在线观看野外av| 操美女的视频在线观看| 超碰97精品在线观看| 午夜福利在线观看吧| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 精品国产国语对白av| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 男女高潮啪啪啪动态图| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 老司机午夜十八禁免费视频| 18禁观看日本| 日韩有码中文字幕| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲一码二码三码区别大吗| 超碰成人久久| 国产成人精品在线电影| 搡老乐熟女国产| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 日本av免费视频播放| 高清在线国产一区| 免费黄频网站在线观看国产| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 18在线观看网站| 老司机在亚洲福利影院| 天天添夜夜摸| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 无遮挡黄片免费观看| 1024视频免费在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 日韩视频在线欧美| 精品久久久久久电影网| 国产成人欧美| 欧美精品一区二区免费开放| 日韩 亚洲 欧美在线| 宅男免费午夜| 中国国产av一级| tube8黄色片| 操美女的视频在线观看| 妹子高潮喷水视频| 90打野战视频偷拍视频| 大码成人一级视频| 999久久久国产精品视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品国产一区二区久久| 18禁观看日本| 桃红色精品国产亚洲av| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲黑人精品在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品亚洲成国产av| 少妇人妻久久综合中文| 国产高清视频在线播放一区 | 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产在线免费精品| 丁香六月欧美| a级片在线免费高清观看视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美+亚洲+日韩+国产| 中国美女看黄片| 日韩 亚洲 欧美在线| videosex国产| 9色porny在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美另类一区| 国产成人系列免费观看| 精品久久蜜臀av无| 久久久久久久国产电影| 制服诱惑二区| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产xxxxx性猛交| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一级片'在线观看视频| 国产精品久久久av美女十八| 日本wwww免费看| 久久久久网色| 国产福利在线免费观看视频| 日韩免费高清中文字幕av| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美中文综合在线视频| 精品乱码久久久久久99久播| 成人国产av品久久久| 9热在线视频观看99| 人成视频在线观看免费观看| 不卡av一区二区三区| 最近中文字幕2019免费版| 国产成人a∨麻豆精品| 在线观看人妻少妇| 少妇人妻久久综合中文| 丁香六月天网| 亚洲伊人久久精品综合| 国产日韩欧美亚洲二区| 精品国产一区二区久久| 亚洲成人免费av在线播放| 黄色片一级片一级黄色片| 蜜桃国产av成人99| 91国产中文字幕| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 大香蕉久久网| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品一区在线观看国产| 咕卡用的链子| 久久久精品免费免费高清| 中文欧美无线码| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲全国av大片| 亚洲精品美女久久av网站| 一进一出抽搐动态| 一本大道久久a久久精品| 欧美在线黄色| 1024视频免费在线观看| 久久久久久久精品精品| 男女午夜视频在线观看| 永久免费av网站大全| 久久热在线av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 午夜福利在线观看吧| 精品国内亚洲2022精品成人 | 精品少妇久久久久久888优播| 精品人妻一区二区三区麻豆| 免费在线观看黄色视频的| 动漫黄色视频在线观看| 男女免费视频国产| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 欧美+亚洲+日韩+国产| 视频区图区小说| 一级黄色大片毛片| 国产免费福利视频在线观看| 成人影院久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人黄色视频免费在线看| 又紧又爽又黄一区二区| 美女大奶头黄色视频| av不卡在线播放| 91av网站免费观看| 丰满少妇做爰视频| 国产精品.久久久| 精品一区二区三区av网在线观看 | 俄罗斯特黄特色一大片| 精品少妇内射三级| 一个人免费在线观看的高清视频 | 嫩草影视91久久| 亚洲天堂av无毛| 亚洲一区中文字幕在线| 男女无遮挡免费网站观看| 精品欧美一区二区三区在线| 久久久久久久精品精品| 成年av动漫网址| 69精品国产乱码久久久| 蜜桃国产av成人99| 国产色视频综合| 久久人人爽人人片av| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 桃花免费在线播放| 老熟女久久久| 女人精品久久久久毛片| 乱人伦中国视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| av天堂在线播放| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 制服诱惑二区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 99热全是精品| 五月开心婷婷网| 午夜激情久久久久久久| 一本久久精品| 亚洲视频免费观看视频| 99精品久久久久人妻精品| 中文字幕av电影在线播放| 青春草亚洲视频在线观看| 丁香六月欧美| 午夜久久久在线观看| 亚洲综合色网址| 成人av一区二区三区在线看 | 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲精品国产一区二区精华液| 在线观看一区二区三区激情| 大码成人一级视频| 国产淫语在线视频| 男人操女人黄网站| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产91精品成人一区二区三区 | 1024香蕉在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲成人国产一区在线观看| 黄片播放在线免费| 91字幕亚洲| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日韩电影二区| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日韩欧美免费精品| 国产成人精品久久二区二区91| 曰老女人黄片| a级毛片黄视频| 免费观看a级毛片全部| 老司机靠b影院| 日韩有码中文字幕| 亚洲精品一区蜜桃| 国产区一区二久久| 老熟女久久久| 制服诱惑二区| 美女午夜性视频免费| 一个人免费在线观看的高清视频 | 久久热在线av| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 成年动漫av网址| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲精品在线美女| 99香蕉大伊视频| 黑人猛操日本美女一级片| 成人影院久久| 少妇精品久久久久久久| 亚洲黑人精品在线| 久久精品成人免费网站| 亚洲成人免费电影在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 咕卡用的链子| 亚洲欧美精品自产自拍| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| kizo精华| 午夜91福利影院| 一本久久精品| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品亚洲av一区麻豆| 多毛熟女@视频| 亚洲久久久国产精品| 丰满少妇做爰视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 老司机深夜福利视频在线观看 | 成年女人毛片免费观看观看9 | 精品少妇内射三级| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 久9热在线精品视频| 国产91精品成人一区二区三区 | 精品第一国产精品| 国产有黄有色有爽视频| 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产一区二区三区综合在线观看| a级毛片黄视频| 精品亚洲成国产av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 99精品欧美一区二区三区四区| 搡老熟女国产l中国老女人| 日本a在线网址| 久久久久国产精品人妻一区二区| www.999成人在线观看| 午夜激情久久久久久久| av天堂久久9| 日本91视频免费播放| 多毛熟女@视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产av国产精品国产| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 丰满饥渴人妻一区二区三| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日本欧美视频一区| 久久久精品94久久精品| 青春草视频在线免费观看| 久久热在线av| 又紧又爽又黄一区二区| 免费观看人在逋| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 美女视频免费永久观看网站| 国产成人影院久久av| 夜夜夜夜夜久久久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产欧美亚洲国产| 久久精品成人免费网站| 91老司机精品| 欧美日韩精品网址| 日韩大码丰满熟妇| 97精品久久久久久久久久精品| 美国免费a级毛片| 飞空精品影院首页| 操美女的视频在线观看| 亚洲精品国产av成人精品|