帕洛諾司瓊貼劑的含量測(cè)定方法

惠 美，權(quán) 鵬，方 亮

（沈陽藥科大學(xué) 藥學(xué)院, 遼寧 沈陽 110016）

帕洛諾司瓊貼劑的含量測(cè)定方法

惠 美，權(quán) 鵬，方 亮*

（沈陽藥科大學(xué) 藥學(xué)院, 遼寧 沈陽 110016）

目的建立帕洛諾司瓊貼劑的含量測(cè)定方法。方法采用甲醇萃取出帕洛諾司瓊貼劑中的藥物，并利用HPLC法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)對(duì)方法的專屬性、精密度及回收率進(jìn)行考察。結(jié)果帕洛諾司瓊貼劑的含量為(1.040 3×10-3± 4. 653 0×10-5) g·cm-2；方法的專屬性良好；帕洛諾司瓊的質(zhì)量濃度在 0.16～ 40.95 mg·L-1內(nèi)和帕洛諾司瓊與內(nèi)標(biāo)尼泊金丙酯的吸收峰面積之比呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為A藥/A內(nèi)標(biāo)= 4.41×10-2ρ + 1.99×10-2(r = 1)；日內(nèi)和日間精密度均小于2%，達(dá)到分析要求；3種質(zhì)量濃度的樣品回收率均在98%～102%內(nèi)。結(jié)論帕洛諾司瓊貼劑的含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便、可靠，可以為后續(xù)的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

藥劑學(xué)；貼劑；高效液相色譜法；帕洛諾司瓊；含量測(cè)定

帕洛諾司瓊為第二代5-HT3受體拮抗劑，化學(xué)名為(3aS)-2-[(3S)-1-氮雜雙環(huán)[2，2，2]辛烷基-2，3，3a，4，5，6-六氫-1-氧代-1H-苯并[de]異喹啉，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1，主要用于化療后惡心嘔吐的防治[1-4]。

帕洛諾司瓊貼劑是將帕洛諾司瓊分散于壓敏膠中并貼敷于人體完整皮膚上，控制藥物釋放進(jìn)入全身系統(tǒng)的劑型[5]。制劑中藥物的含量直接影響其用藥安全性和有效性，因此對(duì)于任何一種制劑，含量測(cè)定都是必須的一項(xiàng)質(zhì)量要求，貼劑也不例外。除此之外，了解帕洛諾司瓊貼劑中的藥物含量，有助于計(jì)算帕洛諾司瓊貼劑的生物利用度及其均勻度。而均勻度是體外經(jīng)皮透過實(shí)驗(yàn)和釋放實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，因此有效的建立帕洛諾司瓊貼劑的含量測(cè)定方法顯得尤為重要。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中并未見對(duì)帕洛諾司瓊貼劑含量測(cè)定方法的研究。本文作者利用甲醇來萃取帕洛諾司瓊貼劑中的藥物，并利用HPLC法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)對(duì)方法的專屬性、精密度及回收率進(jìn)行考察。

Fig. 1 Chemical structure of palonosetron圖1 帕洛諾司瓊的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1 儀器與材料

AL-104電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），高效液相色譜系統(tǒng)包括L-7100泵、L-7420可變波長(zhǎng)紫外吸收檢測(cè)器、L-2200 自動(dòng)進(jìn)樣器（日本日立公司）， HT-230A柱溫箱（天津恒奧科技發(fā)展有限公司），SZ-96自動(dòng)純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）。

帕洛諾司瓊（純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞99.9%，天津富宇精細(xì)化工有限公司），冰醋酸、三乙胺（天津博迪化工有限公司），甲醇（色譜純，江蘇漢邦實(shí)業(yè)有限公司），尼泊金丙酯（天津遠(yuǎn)航化學(xué)品有限公司），帕洛諾司瓊貼劑（自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C1 8柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-體積分?jǐn)?shù)0.5%乙酸的重蒸水溶液(體積比65∶35)，三乙胺調(diào)pH值至6.7；內(nèi)標(biāo)溶液：10 mg·L-1尼泊金丙酯的甲醇溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)：242 nm；柱溫：40 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 專屬性考察

制備不含主藥的空白貼劑（規(guī)格同含藥貼），按“2.6”條貼劑含量測(cè)定方法進(jìn)行操作，得到色譜圖2A；色譜圖2B為貼劑含量測(cè)定的實(shí)測(cè)圖。由色譜圖可知，在該色譜條件下貼劑中的其他成分對(duì)藥物的測(cè)定無干擾。

Fig. 2 Chromatogram of drug content determination for the blank patch (A) and the palonosetron patch (B)圖2 空白貼劑(A)和帕洛諾司瓊貼劑（B）的含量測(cè)定色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

內(nèi)標(biāo)尼泊金丙酯溶液的制備：精密稱取尼泊金丙酯50.0 mg置于50 mL量瓶中，加入適量流動(dòng)相溶解后再用流動(dòng)相定容至刻度，配成質(zhì)量濃度為1 g·L-1的尼泊金丙酯母液。精密量取母液0.5 mL置于50 mL量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，即得10 mg·L-1的內(nèi)標(biāo)溶液。

帕洛諾司瓊系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱取鹽酸帕洛諾司瓊2.30 mg（約相當(dāng)于帕洛諾司瓊游離堿2.05 mg），置于50 mL量瓶中，加入適量甲醇溶解后再用甲醇定容至刻度，配成質(zhì)量濃度為40.95 mg·L-1的帕洛諾司瓊母液。分別精密量取上述帕洛諾司瓊母液0.1、0.3和1 mL置于25 mL量瓶中和1、3和5 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。即得質(zhì)量濃度分別為0.16、0.49、1.64、4.10、12.29、20.48和40.95 mg·L-1的帕洛諾司瓊系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

分別取上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各200 μL，加入等體積的內(nèi)標(biāo)溶液，混勻后精密量取20 μL注入液相色譜儀，在“2.1”條色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，得藥物與內(nèi)標(biāo)的峰面積，計(jì)算其比值(A藥/A內(nèi)標(biāo))并以帕洛諾司瓊的質(zhì)量濃度(ρ)對(duì)該比值進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A藥/A內(nèi)標(biāo)= 4.41×10-2ρ+ 1.99×10-2（r = 1）。

結(jié)果表明，帕洛諾司瓊的質(zhì)量濃度在0.16～ 40.95 mg·L-1內(nèi)與峰面積比呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度考察

配制質(zhì)量濃度分別為0.16、12.29和40.95 mg·L-1的帕洛諾司瓊?cè)芤?，加入等體積的內(nèi)標(biāo)溶液，混勻后在同一天內(nèi)分別連續(xù)進(jìn)樣3次，得藥物與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比，計(jì)算該比值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，得方法的日內(nèi)精密度。連續(xù)測(cè)定3 d，同法計(jì)算，得到方法的日間精密度，結(jié)果見表1。日內(nèi)精密度RSD 和日間精密度 RSD均小于2%，均達(dá)到分析要求。

Table 1 Intra-day and inter-day precision determination of the method表1 分析方法的日內(nèi)和日間精密度

2.5 貼劑含量測(cè)定的回收率考察

精密稱取帕洛諾司瓊游離堿80、100和120 mg，分別置于50 mL量瓶中，一式3份。同時(shí)將9片直徑為 2.4 cm的圓形空白貼劑，揭去防層，分別置于上述量瓶中，加甲醇定容搖勻。樣品于1.6×104r·min-1低溫離心5 min后，取上清液200 μL，加入等體積的內(nèi)標(biāo)溶液，混勻，取樣品20 μL在“2.1”條色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表 2。

Table 2 Recovery of palonosetron patch content determination表2 帕洛諾司瓊貼劑含量測(cè)定方法的回收率

2.6 貼劑含量測(cè)定方法

隨機(jī)選取自制的帕洛諾司瓊貼劑5片（規(guī)格為直徑2.4 cm，面積4.52 cm2的圓形貼劑），撕去防層，分別放到50 mL錐形瓶中，加入甲醇20 mL超聲20 min，然后轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，甲醇定容搖勻。樣品于1.6×104r·min-1低溫離心5 min后，取上清液200 μL，加入等體積的內(nèi)標(biāo)溶液，混勻，取樣品20 μL在“2.1”條色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。3批帕洛諾司瓊貼劑的含量測(cè)定結(jié)果見表3。

Table 3 Results of content determination of palonosetron patch.表3 帕洛諾司瓊貼劑含量測(cè)定結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.6”條方法操作，將制備好的帕洛諾司瓊貼劑供試液樣品于室溫下放置8 h，每隔2 h進(jìn)一次樣，經(jīng)計(jì)算8 h內(nèi)的RSD值為1.6%，表明含量測(cè)定所配樣品溶液在室溫下8 h內(nèi)穩(wěn)定。

3 討論

a. 本文作者采用HPLC法對(duì)帕洛諾司瓊貼劑中的藥物含量進(jìn)行測(cè)定，流動(dòng)相中未加入鹽也得到了很好的分離，配制方法簡(jiǎn)單，同時(shí)又降低了對(duì)儀器的損耗。內(nèi)標(biāo)的選擇使結(jié)果更加精密可靠，如果在藥物標(biāo)準(zhǔn)品可得的情況下，也可以采用外標(biāo)法。

b. 文獻(xiàn)報(bào)道過的貼劑含量測(cè)定方法[6-7]中多采用甲醇對(duì)貼劑中的藥物進(jìn)行萃取，因甲醇極性大且萃取回收率高，另藥物的甲醇溶液對(duì)色譜柱的傷害也低。因此作者同樣采用甲醇對(duì)帕洛諾司瓊貼劑中的藥物進(jìn)行萃取。

c. 專屬性、精密度和回收率的考察結(jié)果表明了該方法的可靠性，可為后續(xù)的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

d. 在對(duì)貼劑的回收率進(jìn)行考察時(shí)，特別需要注意的是藥物與壓敏膠作用強(qiáng)弱的問題。因?yàn)橘N劑中的藥物是均勻分散于壓敏膠中的，而回收率的考察是將藥物與空白的貼劑混合，若藥物與壓敏膠的作用太強(qiáng)可能出現(xiàn)回收率雖然合格，但實(shí)際上進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)僅有部分藥物被提取出來的現(xiàn)象。從實(shí)驗(yàn)的結(jié)果得知，3批貼劑樣品的實(shí)測(cè)含量均在1×10-3g·cm-2左右，與貼劑含量的預(yù)測(cè)值無顯著性差異，說明本研究的回收率考察結(jié)果可靠。

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Determination method of palonosetron in patch

HUI Mei, QUAN Peng, FANG Liang*
(School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)

ObjectiveTo establish a method for the determination of palonosetron in the patch.MethodsPalonosetron in the patch was extracted by methanol. High performance liquid chromatography was used to analyze palonosetron content. At the same time, the specificity, precision and recoveries of the method were also investigated.ResultsPalonosetron content in the patch wasSpecificity of the method was good. Good linear relationship was achieved between the ratio of the peak area (Ad rug/ Ai nternal standard) of palonosetron and internal standard of propylparaben and concentration (C) of palonosetron ranging from 0.16–40.95 mg·L-1. The calibration curve was. The RSDs of intra- and inter- day precisions were both less than 2%, meeting the requirements of analysis. The recoveries of three different concentrations were in the range of 98%–102%.ConclusionsThe method established for palonosetron content determination in the patch is simple and reliable, and can provide experimental basis for further investigation.

pharmaceutics; patch; high performance liquid chromatography; palonosetron; content determination

R94

：A

（2016）04–0120–05

10.14146/j.cnki.cjp.2016.04.002

(本篇責(zé)任編輯：趙桂芝)

2015–05–06

惠美(1989–), 女(漢族), 吉林四平人, 碩士研究生,E-mail645755232@qq.com；*通訊作者：方亮(1964–), 男(朝鮮族), 吉林和龍人, 教授, 博士, 博士生導(dǎo)師, 主要從事藥劑學(xué)研究,Tel. 024–23986330，E-mailfangliang2003@yahoo.cn。