納豆激酶與尿激酶的對(duì)比性研究

李 靜，宋艷志，王夢(mèng)靜，陳杰鵬，段麗麗，鄧意輝*

（1. 沈陽(yáng)藥科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016；2. 廣東雙駿生物科技有限公司，廣東 汕頭 515071）

納豆激酶與尿激酶的對(duì)比性研究

李 靜1，宋艷志1，王夢(mèng)靜1，陳杰鵬2，段麗麗2，鄧意輝1*

（1. 沈陽(yáng)藥科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016；2. 廣東雙駿生物科技有限公司，廣東 汕頭 515071）

目的將納豆激酶（nattokinase，NK）與尿激酶（urokinase，UK）進(jìn)行對(duì)比研究，闡明NK的優(yōu)勢(shì)，旨在推動(dòng)NK制劑的開發(fā)。方法考察NK及UK對(duì)纖維蛋白、新鮮與陳舊性血凝塊以及變性卵清、血清蛋白塊的溶解情況和體外抗凝血效果。結(jié)果NK在纖維蛋白平板上的直接纖溶活性與間接激活活性比為1.36∶1，而UK在纖維蛋白平板上只有間接激活活性；NK對(duì)新鮮血凝塊的溶解速度較UK快，且能對(duì)陳舊性血凝塊有很強(qiáng)的溶解作用；NK能溶解變性卵清和血清蛋白塊，而UK則不能；新鮮血液中加入1×104IU·mL-1的UK溶液后，血液出現(xiàn)了先凝固后溶解的過程，而僅加入1 000 IU·mL-1的NK溶液，血液一直未凝固。結(jié)論與UK相比，NK在溶解新鮮或陳舊性血栓、變性蛋白和抗凝血方面具有優(yōu)勢(shì)。

藥劑學(xué)；抗凝血；納豆激酶；尿激酶；纖維蛋白；血凝塊；變性蛋白

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和老齡化社會(huì)的來(lái)臨，血栓性疾病的發(fā)病率逐年增加。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年有1 500萬(wàn)人死于血栓性疾病，占全球疾病總死亡率的第一位。提高血栓性疾病的預(yù)防和治療水平，降低其發(fā)病率、致殘率、死亡率，減少由此而產(chǎn)生的社會(huì)問題，已成為當(dāng)務(wù)之急[1]。

注射纖維蛋白溶解藥是治療血栓性疾病的主要辦法[2]。目前臨床上應(yīng)用的纖維蛋白溶解藥主要包括尿激酶（urokinase，UK）、鏈激酶、組織型纖溶酶原激活劑、乙?；w溶酶原鏈激酶激活劑復(fù)合物與單鏈尿激酶型纖溶酶原激活劑。這些藥物均為纖溶酶原激活劑，通過激活纖溶酶原生成纖溶酶而降解纖維蛋白。在實(shí)際應(yīng)用中，它們都具有一定的局限性，或是毒性比較強(qiáng)，不良反應(yīng)大；或是在體內(nèi)半衰期短，且不易被吸收，只能靜脈給藥；或是來(lái)源緊缺，成本高，價(jià)格昂貴[3]。

1987年，Sumi等[4]首次報(bào)道納豆中存在一種具有強(qiáng)烈纖溶活性的堿性絲氨酸蛋白酶—納豆激酶（nattokinase，NK，結(jié)構(gòu)見圖1）。NK是一由275個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的單鏈多肽酶，其相對(duì)分子質(zhì)量為2.772 8×104，等電點(diǎn)為8.6 ± 0.3[5]。研究表明，NK的體內(nèi)外溶栓效果顯著[4, 6-7]，同時(shí)還具有抑制血栓形成的作用[8]。與目前常用的溶栓藥物相比，NK具有生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好、口服有效、半衰期長(zhǎng)、特異性強(qiáng)以及溶栓活性高等優(yōu)點(diǎn)，受到國(guó)內(nèi)外研究者們的青睞。本文作者通過將NK與臨床上常用的溶栓藥UK進(jìn)行對(duì)比，闡明NK在溶解新鮮或陳舊性血栓、變性蛋白和抗凝血方面的優(yōu)勢(shì)，旨在推動(dòng)NK制劑的開發(fā)。

Fig. 1 The schematic diagram of structure of NK圖1 NK的結(jié)構(gòu)示意圖

1 儀器與材料

BS124s電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司），DH-2500電熱恒溫培養(yǎng)箱（天津泰斯特儀器有限公司），TM-1動(dòng)態(tài)滅菌器（沈陽(yáng)天美達(dá)科學(xué)儀器有限公司），PB-10 pH計(jì)（德國(guó)賽多利斯公司）。

納豆激酶凍干粉（汕頭雙駿生物科技有限公司），磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O，分析純，西隴化工股份有限公司），磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），氯化鈉注射液（山東華魯制藥有限公司），瓊脂糖（上海東海制藥廠），牛纖維蛋白原（規(guī)格為每支90 mg，中國(guó)藥品生物制品檢定所），凝血酶（規(guī)格為每支500 IU，珠海經(jīng)濟(jì)特區(qū)生物化學(xué)制藥廠），注射用尿激酶（規(guī)格為每支1×105IU，南京南大藥業(yè)有限責(zé)任公司），滅菌注射用水（石家莊四藥有限公司），變性卵清蛋白、變性血清蛋白、兔血凝塊（自制），注射用青霉素鈉（規(guī)格為每支0.96 g，1.6×106IU，東北制藥集團(tuán)沈陽(yáng)第一制藥有限公司），注射用硫酸鏈霉素（規(guī)格為1×106IU·g-1，瑞陽(yáng)制藥有限公司），肝素鈉注射液（heparin sodium injection，6 250 IU·mL-1，上海第一生化藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 NK溶液和UK溶液的配制

等滲磷酸鹽緩沖液（pH值7.4）的配制：精密稱取Na2HPO4·12H2O 0.358 0 g，用滅菌注射用水溶解并稀釋至100 mL，記為A液；精密稱取NaH2PO4·2H2O 0.390 0 g，用滅菌注射用水溶解并稀釋至250 mL，記為B液。將A液25 mL與B液6 mL混合，即得pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液。將上述磷酸鹽緩沖液（pH值7.4）與氯化鈉注射液按體積比1∶20混合，搖勻，過0.22 μm的微孔濾膜，121 ℃熱壓滅菌15 min，即得等滲磷酸鹽緩沖液（pH值7.4）。

不同酶活度NK溶液的配制：精密稱取NK凍干粉0.111 9 g置于5 mL量瓶中，用pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，即得2×104IU·mL-1NK溶液；精密移取2×104IU·mL-1NK溶液0.50、0.35、0.25 mL置于10 mL量瓶中，用pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得1 000、700、500 IU·mL-1NK溶液；精密移取1 000 IU·mL-1NK溶液0.50、0.25 mL置于5 mL量瓶中，用pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得100、50 IU·mL-1NK溶液。

不同酶活度UK溶液的配制：取UK標(biāo)準(zhǔn)品1×105IU，加入精密移取的等滲磷酸鹽緩沖液（pH值7.4）5.00 mL，搖勻，即得2×104IU·mL-1UK溶液；精密移取2×104IU·mL-1UK溶液2.50 mL置于5 mL量瓶中，用pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得1×104IU·mL-1UK溶液；分別精密移取2×104IU·mL-1UK溶液0.50、0.25 mL置于10 mL量瓶中，用pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得1 000、500 IU·mL-1UK溶液；分別精密移取1 000 IU·mL-1UK溶液2.00、1.00、0.50 mL置于10 mL量瓶中，用pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得200、100、50 IU·mL-1UK溶液。

2.2 NK和UK對(duì)纖維蛋白的溶解作用

14.9 g·L-1瓊脂糖溶液的配制：稱取0.88 g瓊脂糖，加pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液59 mL，加熱溶解，即得。

1.5 g·L-1纖維蛋白原溶液的配制：取纖維蛋白原一支（90 mg），加pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液60 mL，搖勻，即得。

10 IU·mL-1凝血酶溶液的配制：取凝血酶500 IU，加入pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液10 mL，制成50 IU·mL-1凝血酶溶液，置于4 ℃保存待用。實(shí)驗(yàn)前，用pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液稀釋至10 IU·mL-1，搖勻，即得。

取48 ℃水浴孵育5 min的纖維蛋白原溶液60 mL，攪拌下快速加入降溫至48 ℃的瓊脂糖溶液59 mL和10 IU·mL-1凝血酶溶液4.5 mL，立即混勻并快速轉(zhuǎn)移至兩塊直徑為10 cm的玻璃平皿中。室溫水平放置1 h后，其中一塊平板經(jīng)85 ℃加熱30 min制成加熱纖維蛋白平板。用直徑為2 mm的打孔器在未加熱和加熱纖維蛋白平板上打孔。

精密移取NK溶液和UK溶液各10 μL，滴入未加熱和加熱纖維蛋白平板的加樣孔中，加蓋置于37 ℃恒溫箱中孵育18 h，結(jié)果見圖2。

孵育結(jié)束后，用游標(biāo)卡尺于平皿背面測(cè)量溶圈垂直兩直徑（a、b），依纖維蛋白平板法以UK為標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)定活力單位計(jì)算NK在未加熱和加熱纖維蛋白平板上的酶活度[9-11]。

Fig. 2 The dissolution of fibrin in unheated fibrin plates (A) and heated fibrin plate (B) treated with NK and UK圖2 NK和UK對(duì)未加熱纖維蛋白平板（A）和加熱纖維蛋白平板（B）中纖維蛋白的溶解情況

由圖2可知，UK在未加熱纖維蛋白平板上形成了溶圈，但在加熱纖維蛋白平板上未形成溶圈，說明UK僅能通過激活纖溶酶原形成纖溶酶而起纖溶作用；而NK則無(wú)論在未加熱纖維蛋白平板上還是在加熱纖維蛋白平板上都形成了溶圈。

由于纖溶酶原與纖維蛋白原之間的高親和力，經(jīng)分離得到的纖維蛋白原試劑中仍有少量的纖溶酶原無(wú)法除去，因此未加熱纖維蛋白平板所測(cè)得的酶活性是纖溶酶活性和纖溶酶原激活活性的總和。纖維蛋白平板經(jīng)85 ℃加熱30 min后，其中的纖溶酶原失活，因此加熱纖維蛋白平板所測(cè)得的酶活性僅為纖溶活性。

經(jīng)計(jì)算，NK在未加熱纖維蛋白平板上的酶活度為682.45 IU·mL-1，而在加熱纖維蛋白平板上的酶活度與289.70 IU·mL-1NK溶液在未加熱纖維蛋白平板上的酶活度相同，因此NK的直接纖溶活性與間接激活活性比為1.36∶1，該結(jié)果說明NK不僅能將纖溶酶原激活為纖溶酶，使后者參與纖溶過程，而且還能直接溶解纖維蛋白，發(fā)揮強(qiáng)大的纖溶作用。

2.3 NK和UK的體外溶栓作用

由于體外血凝塊與體內(nèi)血栓的成分相同，因此作者利用體外血凝塊模擬體內(nèi)血栓。家兔頸總動(dòng)脈采血，裝于醫(yī)用采樣管中，保存條件見表1。體外放置20 h的血凝塊模擬體內(nèi)新鮮血栓；放置5 d （120 h）的血凝塊模擬體內(nèi)陳舊性血栓（形成超過3 d的血栓）[12]。

Table 1 The storage condition of blood表1 血液的保存條件

根據(jù)表1中的保存條件，取出管中的血凝塊并切割成質(zhì)量約為0.1 g的小塊，用氯化鈉注射液將其表面洗凈，濾紙吸干后精密稱質(zhì)量，分別加入到含1 mL不同酶活度NK溶液或UK溶液的西林瓶中，同時(shí)以pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液作為空白對(duì)照，37 ℃恒溫孵育，分別于1、2、4、6、8、10 h時(shí)取出瓶中的血凝塊，用濾紙吸干表面液體，精密稱質(zhì)量，根據(jù)公式1計(jì)算各血凝塊的相對(duì)溶蝕率（relative dissolution percentage，wRDP）：

其中：ms為溶解前的血凝塊質(zhì)量（g）；mn為溶解過程中不同時(shí)間點(diǎn)稱取的血凝塊質(zhì)量（g）。結(jié)果見圖3。

Fig. 3 The dissolution of blood clots treated with NK and UK within 10 h （n=3）圖3 10 h內(nèi)NK和UK對(duì)血凝塊的溶解情況（n=3）

由圖3可知，對(duì)于保存時(shí)間相同的血凝塊，其溶解速率與NK溶液的酶活度呈正相關(guān)；NK對(duì)血凝塊的溶解效果較UK好（50 IU·mL-1NK溶液對(duì)血凝塊的溶解能力強(qiáng)于1 000 IU·mL-1UK溶液）；對(duì)于相同酶活度的NK或UK溶液，保存時(shí)間長(zhǎng)的血凝塊溶解速率均慢于保存時(shí)間短的，但與UK相比，NK對(duì)保存時(shí)間長(zhǎng)的血凝塊仍有很強(qiáng)的溶解能力。以上結(jié)果表明，與UK相比，NK在溶解新鮮或陳舊性血栓方面具有優(yōu)勢(shì)。

2.4 NK和UK對(duì)變性卵清蛋白塊和變性血清蛋白塊的溶解作用

將新鮮雞蛋煮熟使蛋白變性及比格犬血清置于90 ℃恒溫箱中孵育3 h使蛋白變性。將變性卵清蛋白和變性血清蛋白切成約0.2 g的小塊，精密稱質(zhì)量，分別加入到含2 mL不同酶活度的NK溶液或UK溶液的西林瓶中，同時(shí)以pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液作為空白對(duì)照，置于37 ℃恒溫箱中孵育，分別于1、2、4、6、8、10和24 h時(shí)取出瓶中蛋白塊，用濾紙吸干表面液體，精密稱質(zhì)量，根據(jù)公式1計(jì)算各蛋白塊的相對(duì)溶蝕率，結(jié)果見圖4。

Fig. 4 The dissolution of denatured ovalbumin block (A) and serum protein block (B) treated with NK and UK within 24 h（n=3）圖4 24 h內(nèi)NK和UK對(duì)變性卵清蛋白塊（A）和變性血清蛋白塊（B）的溶解情況（n=3）

實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組和UK溶液組中的蛋白塊表面始終緊致、飽滿、光滑，而NK溶液組中的蛋白塊表面由原來(lái)的緊致光滑變得疏松粗糙，輕輕晃動(dòng)時(shí)表面即有細(xì)小顆粒物脫落，體系變渾濁。由圖4可知，UK溶液組和空白對(duì)照組中的卵清蛋白塊和血清蛋白塊的質(zhì)量始終未發(fā)生變化，說明UK不能溶解變性蛋白；24 h時(shí)，1 000、1×104IU·mL-1NK溶液組中的卵清蛋白塊和血清蛋白塊基本完全溶解，100 IU·mL-1NK溶液組中的變性血清蛋白塊基本完全溶解，卵清蛋白塊也有一定程度的溶解，說明NK對(duì)變性蛋白有較強(qiáng)的溶解能力，并且溶解的速率與酶活度呈正相關(guān)。以上結(jié)果表明，與UK相比，NK在溶解變性蛋白方面具有優(yōu)勢(shì)。

2.5 NK和UK的體外抗凝血作用

將pH值7.4的等滲磷酸鹽緩沖液1 mL（空白對(duì)照）、不同酶活度的NK溶液1 mL、不同酶活度的UK溶液1 mL和heparin sodium注射液20 μL分別加入到具塞玻璃試管中。再向每個(gè)試管中加入新鮮家兔血液1 mL，自加入起開始計(jì)時(shí)。輕輕振搖，混勻，室溫下靜置觀察，記錄凝血與復(fù)溶所用時(shí)間，結(jié)果見表2。

Table 2 The evaluation of anticoagulant effect of NK, UK and heparin sodium in vitro (n=3)表2 NK、UK和Heparin sodium的體外抗凝血效果評(píng)價(jià)（n=3）

由表2可知，空白對(duì)照組血液凝固后不再?gòu)?fù)溶；肝素組24 h內(nèi)不凝血，24 h后血液凝固并不再?gòu)?fù)溶；UK溶液組（1 000、1×104IU·mL-1）和低酶活度（小于等于500 IU·mL-1）NK溶液組與血液接觸后先短暫的凝固，再根據(jù)酶活度的遞增而出現(xiàn)時(shí)間上由長(zhǎng)至短的復(fù)溶，高酶活度（1 000 IU·mL-1）NK溶液組一直未發(fā)生血凝現(xiàn)象。以上結(jié)果表明，與UK相比，NK在抗凝血方面具有優(yōu)勢(shì)。

3 討論

3.1 NK在溶解陳舊性血栓方面的優(yōu)勢(shì)

因?yàn)殛惻f性血栓中纖溶酶原會(huì)隨著栓塞形成時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減少，所以此時(shí)通過激活纖溶酶原而溶解血栓的UK、鏈激酶、組織型纖溶酶原激活劑等便很難發(fā)揮作用[12]。若想要清除陳舊性血栓斑塊，就必須先溶解作為血栓網(wǎng)架的纖維蛋白[13]。目前對(duì)于內(nèi)科療效不佳且側(cè)支循環(huán)形成不良者，手術(shù)治療仍是清除陳舊性血栓最有效的方法。但手術(shù)治療成本高，患者順應(yīng)性差，并伴隨術(shù)后恢復(fù)以及手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)等一系列問題存在。

由纖維蛋白（血栓主要成分）溶解和體外溶栓實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，UK僅對(duì)新鮮血栓有效，而NK不僅對(duì)新鮮血栓效果顯著，對(duì)陳舊性血栓同樣具有很強(qiáng)的溶解能力。與UK相比，NK的獨(dú)特之處是其作為一種絲氨酸蛋白酶，對(duì)纖維蛋白尤其是交聯(lián)形式的纖維蛋白本身非常敏感，可直接將其水解成小肽和氨基酸[7, 9, 14-16]，這一作用為其溶解陳舊性血栓奠定了基礎(chǔ)。

3.2 NK對(duì)蛋白的溶解作用

Sumi等[4]的報(bào)道指出，NK最敏感的底物是血漿纖溶酶底物S-2251（H-D-Val-Leu-Lys-pNA），此外對(duì)凝血酶底物S-2238（H-D-Phe-Pip-Arg-pNA）和激肽釋放酶底物S-2302（H-D-Pro-Phe-Arg- pNA）也有一定作用。Fujita等[17]的研究顯示，NK不會(huì)降解血清白蛋白、UK底物S-2444（pyro-Glu-Gly-Arg-pNA）與彈性蛋白酶底物S-2484（pyro-Glu-Pro-Val-pNA）。以上結(jié)果提示，NK對(duì)蛋白的溶解具有一定的底物專一性。

Fujita等[17]的研究表明，NK可以將纖維蛋白水解為可溶性的小分子。Hsu等[18]指出NK具有降解淀粉樣蛋白的作用。Upadhyay等[19]的研究顯示，NK可以促進(jìn)切達(dá)奶酪（cheddar）中的酪蛋白水解。本研究發(fā)現(xiàn)，處于NK溶液中的變性血清蛋白塊和變性卵清蛋白塊逐漸分崩離析、溶解并最終變?yōu)橐簯B(tài)，而對(duì)照組（未加NK）中的蛋白塊始終飽滿光滑。這些結(jié)果均證明NK對(duì)不溶于水的、變性的蛋白有較強(qiáng)的溶解能力。因此，NK在人體中不僅能直接或間接地參與溶栓，還有望用于治療淀粉樣蛋白相關(guān)性疾病以及發(fā)揮清除血液中失活蛋白的作用，從而增強(qiáng)新陳代謝，改善微循環(huán)，使機(jī)體更健康。

3.3 NK的體外抗凝血機(jī)理探討

由本研究抗凝血實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，肝素鈉、UK和NK均具有抗凝作用。但抗凝現(xiàn)象不同，對(duì)于肝素鈉，血液一旦凝固就不會(huì)溶解；對(duì)于UK溶液（1 000、1×104IU·mL-1）和低酶活度（小于等于500 IU·mL-1）NK溶液，血液均有一個(gè)先凝固后溶解的過程，并且溶解后不再凝固；對(duì)于高酶活度（大于等于1 000 IU·mL-1）的NK溶液，血液一直未凝固。這種現(xiàn)象可以從三者與血液的相互作用中找到原因。肝素鈉的抗凝作用主要通過與抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）結(jié)合，形成Heparin sodium-AT-Ⅲ復(fù)合物，使AT-Ⅲ精氨酸反應(yīng)中心發(fā)生構(gòu)象改變，加速其與凝血因子Ⅱa、Ⅹa、Ⅺa、Ⅻa活性中心絲氨酸殘基的結(jié)合，從而抑制凝血酶的活性，產(chǎn)生抗凝血作用。但是，肝素鈉的抗凝血作用只在短時(shí)間內(nèi)有效，放置過久血液又可凝固[20]。對(duì)于實(shí)驗(yàn)中UK和NK的抗凝血特性，其本質(zhì)是兩者均不會(huì)破壞凝血酶的活性，而是將已經(jīng)形成的血凝塊溶解，因此出現(xiàn)了先凝血再溶解的過程。并且由于兩者對(duì)纖維蛋白的破壞，使得溶解后的血液無(wú)法再次凝固。NK溶液的體外抗凝現(xiàn)象會(huì)隨著酶活度的不同而發(fā)生變化。在新鮮血液中加入NK溶液后，血液凝固與復(fù)溶是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的過程，凝固過程來(lái)自于血液中凝血酶的作用，而復(fù)溶過程則是NK的作用。當(dāng)新鮮血液中加入的NK溶液酶活度比較低時(shí)，在起始階段，血液的凝固速率大于溶解速率，表現(xiàn)為血液凝固；在所有纖維蛋白原全部生成纖維蛋白后，凝固速率為零，血凝塊逐漸復(fù)溶?？傮w表現(xiàn)為先凝固后溶解的過程。相反，當(dāng)加入的酶活度比較高時(shí)，相當(dāng)于凝固速率不變，而溶解速率提高，整個(gè)過程中溶解速率始終大于等于凝固速率，凝固的血液瞬間被NK溶解，表觀上體現(xiàn)為血液一直未凝固。以上結(jié)果說明，NK具有抗凝血作用，且其抗凝能力與其酶活度呈正相關(guān)。

3.4 展望

與臨床上常用的溶栓藥物UK相比，NK不僅生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好、口服有效、半衰期長(zhǎng)，而且在溶解新鮮或陳舊性血栓、變性蛋白和抗凝血方面具有優(yōu)勢(shì)，這些獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)無(wú)疑將使NK成為新一代理想的預(yù)防和治療栓塞的生化藥物。目前，NK已被開發(fā)成多種口服功能性食品片劑和膠囊劑。由于口服制劑存在吸收慢且不規(guī)則的問題，難以用于病情危急、昏迷、嘔吐的病人，因此，作者認(rèn)為注射劑將是未來(lái)NK制劑的開發(fā)重點(diǎn)。

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The comparative study of nattokinase and urokinase

LI Jing1, SONG Yanzhi1, WANG Mengjing1, CHEN Jiepeng2, DUAN Lili2, DENG Yihui1*
(1. School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China; 2. Sungen Biotech Co., Ltd., Shantou 515071, China)

ObjectiveIn this article, to compare the nattokinase (NK) and urokinase (UK) and clarify the advantages of NK.MethodsThe dissolution of fibrin, fresh and old blood clots, denatured ovalbumin anddenatured Beagles serum proteins treated with NK and UK was investigated. The anti-clotting effect of UK and NK in vitro was evaluated.ResultsThe direct and indirect fibrinolysis activity ratio of NK in the fibrin plate was 1.36∶1, while the UK had only indirect activation activity on fibrin plate. The dissolution rate of fresh blood clots in NK solution was faster than in UK solution; moreover, NK had strong dissolution for the old clots. NK can dissolve denatured ovalbumin and serum protein blocks, while UK can not. When adding 1×104IU·mL-1UK solution into the fresh blood, the blood coagulated but subsequently the solidification part began to dissolve. By contrast, when mixing the fresh blood with high enzyme activity (1 000 IU·mL-1) NK solution, the blood not coagulated.ConclusionCompared with the UK, NK has advantages in dissolving fresh blood clots, old blood clots, denatured proteins and anti-clotting.

pharmaceutics; anticoagulation; nattokinase; urokinase; fibrin; blood clots; denatured proteins

R 94

A

（2016）04–0125–10

10.14146/j.cnki.cjp.2016.04.003

(本篇責(zé)任編輯：趙桂芝)

2015–05–04

李靜(1988-), 女(漢族)，遼寧葫蘆島人, 碩士研究生,E-mail syykdxlj@163.com;*通訊作者: 鄧意輝(1964-), 男(漢族), 湖南花垣人, 教授, 博士, 博士生導(dǎo)師, 主要從事靶向制劑的研究,Tel. 024-23986316,E-maildds-666-happy@163.com。