PTEN在急性白血病中的表達(dá)意義

摘要：目的 研究急性白血病中PTEN表達(dá)意義，分析PTEN在急性白血病發(fā)病機(jī)制中作用。方法 收集2012年3月～2013年3月我院血液內(nèi)科20例初治急性白血病（除外急性早幼粒細(xì)胞白血?。┎±?4例骨髓正常造血（脾功能亢進(jìn)、缺鐵性貧血）病例。通過免疫組化實(shí)驗(yàn)方法半定量分析兩組病例PTEN表達(dá)水平。結(jié)果 急性白血病組中PTEN表達(dá)水平明顯低于正常組（P<0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論 PTEN異常表達(dá)可能有參與了急性白血病發(fā)生發(fā)展。

關(guān)鍵詞：急性白血??；PTEN；免疫組化

急性白血病是一種造血干細(xì)胞惡性克隆導(dǎo)致正常骨髓造血異常的惡性血液腫瘤[1]。PTEN基因是已知抑癌基因，本文將通過免疫組化半定量分析PTEN在急性白血病中表達(dá)，從而研究PTEN在急性白血病發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究選取2012年2月～2013年2月我院收治的20例初治急性白血?。ǔ饧毙栽缬琢＜?xì)胞白血?。┗颊咦鳛檠芯繉?duì)象，男14例，女6例，年齡25～86歲；包括6例急性髓系白血病M1型、8例急性髓系白血病M2型、4例急性髓系白血病M5型；所有病例均符合 MICM診斷標(biāo)準(zhǔn)。14例正常對(duì)照組包括9例缺鐵性貧血、5例脾功能亢進(jìn)病例。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本 所有標(biāo)本均為骨髓活檢組織石蠟，切成4μm組織切片

1.2.2 免疫組化 二甲苯（I、II）中脫蠟，濃度由高到低的乙醇脫苯，3% H2O2內(nèi)源性過氧化物酶阻斷，枸櫞酸鈉修復(fù)液高壓修復(fù)5 min，一抗PTEN（北京中杉金橋，工作液），4℃冰箱孵育過夜，復(fù)溫45 min后加通用型二抗，室溫孵育15 min，滴加DAB顯色液，顯色10 s，自來水沖洗，滴加蘇木素染色，使用1%鹽酸酒精分化1～3 s，低濃度至高濃度酒精進(jìn)行脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3結(jié)果判定 PTEN蛋白表達(dá)于胞漿。采用半定量法分析免疫組化結(jié)果，每張骨髓病理切片隨機(jī)挑選10個(gè)高倍視野（10×40），每個(gè)視野計(jì)數(shù)超過100個(gè)有核細(xì)胞，陽性細(xì)胞的數(shù)N/100即為陽性細(xì)胞百分比。根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例及顯色強(qiáng)度綜合評(píng)分。A分為陽性細(xì)胞百分比：0～10%顯色為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～100%為3分；B分為陽性細(xì)胞顯色強(qiáng)度：未顯色或藍(lán)色為0分，淺黃色為1分， 棕黃色為2分，棕褐色為3分。A分+B分為標(biāo)本積分，積分≥3分視為高表達(dá)，積分<3分視為低表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 19.0軟件分析所有數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間通過t檢驗(yàn)分析PTEN在急性白血病組、正常表達(dá)差異。

2 結(jié)果

顯微鏡下觀察PTEN表達(dá)陽性細(xì)胞的細(xì)胞胞漿內(nèi)淡黃色至棕褐色顆粒。正常組及急性白血病組PTEN表達(dá)，見表1。計(jì)數(shù)兩組PTEN表達(dá)積分，對(duì)兩組平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)t檢驗(yàn)，見表1。

急性白血病組病例PTEN表達(dá)積分平均值與標(biāo)準(zhǔn)差（0.8300±0.1865）與正常對(duì)照組（2.7670±0.4259）相比明顯較低，P<0.05，兩者在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異。

3 討論

急性白血病是血液內(nèi)科常見惡性腫瘤，是造血干細(xì)胞惡性克隆影響骨髓正常造血，從而引起感染、貧血、出血、外周浸潤等癥狀。急性白血病平均生存期3個(gè)月左右。PTEN（phosphatase and tensin）基因是1997年被發(fā)現(xiàn)，是一個(gè)抑癌基因[1]。磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（PIP3）是PTEN的底物蛋白。PTEN具有蛋白磷酸酶和脂質(zhì)磷酸酯酶雙重活性，PTEN蛋白通過脂質(zhì)磷酸酶活性使 PIP3去磷酸化為磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP2）從而抑制AKT介導(dǎo)磷脂酰肌醇三磷酸激酶（PI3K）信號(hào)通路活化，從而抑制細(xì)胞增殖[2]。有報(bào)道指出白血病中出現(xiàn)PTEN基因突變[3]。在對(duì)PTEN突變的斑馬魚研究發(fā)現(xiàn)，PTEN基因突變使斑馬魚中PTEN蛋白失活，造血干細(xì)胞可增殖但無法分化為成熟血細(xì)胞[4]。人類白血病發(fā)病可能與PTEN有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)通過免疫組化發(fā)現(xiàn)PTEN在急性白血病表達(dá)較正常組低，支持PTEN失活參與急性白血病發(fā)病。PTEN可能可以幫助臨床對(duì)急性白血病的診斷，同時(shí)為找出新的治療提供新思路。

參考文獻(xiàn)：

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[3]Zhang J，Grindley J C，Yin T，Jayasinghe S，et al.PTEN maintains haematopoietic stem cells and acts in lineage choice and leukaemia prevention[J].Nature，2006，441（7092）：518-522.

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編輯/肖慧