結(jié)核分枝桿菌金胺O熒光和萋—尼染色顯微鏡鏡檢結(jié)果比較

萋一尼染色法和金胺O熒光染色法[1]是痰涂片鏡檢常用的二種染色方法。萋一尼染色法結(jié)果較為準確且因為其操作簡單、費用低、速度快，1 h可以報告結(jié)果而一直延用至今，但陽性檢出率較低，無法滿足臨床需求。金胺O熒光染色法需要熒光顯微鏡，但傳統(tǒng)的熒光顯微鏡的檢測成本過高，一直沒有普及，發(fā)光二極管熒光顯微鏡很好解決了這一問題，近幾年逐漸廣泛應用于結(jié)核分枝桿菌的痰涂片鏡檢。為了解二種檢驗方法對痰標本結(jié)核分枝桿菌的檢出情況，我們對就診的可疑肺結(jié)核患者的痰標本進行了二種方法的對比分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1試劑和器材 金胺O熒光染色液和萋-尼染色液均按《結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》[1]進行配制；使用德國蔡司CX-21發(fā)光二極管全冷光源熒光顯微鏡及奧林巴斯CH30生物顯微鏡。

1.2檢測標本 痰標本來自2014年1月～2015年12月丹陽市人民醫(yī)院結(jié)核病門診就診的可疑肺結(jié)核患者，全部為初診患者。本實驗共收集432例患者的痰標本1296份。每位患者收集3份深咯痰標本，分別為清晨痰、夜間痰和即時痰。標本量為3～5 ml，每份痰標本涂抹2張玻片，分別進行萋-尼染色和金胺O熒光染色。

1.3涂片 用竹簽挑取痰標本的膿樣、血樣或干酪樣部分約0.05～0.1 ml于玻片正面的右側(cè)2/3中央處，均勻涂抹成寬1.0 cm，長2.0 cm的橢圓形痰膜，厚薄適中，室溫下自然干燥。按照《結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》[1]進行初染、脫色、復染。

1.4鏡檢及結(jié)果判定 萋-尼染色用普通光學顯微鏡鏡檢，10倍目鏡、100倍油鏡觀察。在淡藍色背景下，結(jié)核分枝桿菌呈紅色，其他細菌和細胞呈藍色。金胺O熒光染色用發(fā)光二極管顯微鏡，10倍目鏡、40倍物鏡觀察痰涂片，在暗視野背景下，結(jié)核分枝桿菌呈現(xiàn)橘黃色熒光，呈桿狀或短棒狀。萋-尼染色鏡檢結(jié)果報告標準為：抗酸桿菌陰性：連續(xù)觀察300個不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；報告抗酸桿菌菌數(shù)：1～8條/300視野；抗酸桿菌陽性（1+）：3～9條/100視野；抗酸桿菌陽性（2+）：1～9條/10視野；抗酸桿菌陽性（3+）：1～9條/視野；抗酸桿菌陽性（4+）：≥10條/每視野。金胺O熒光染色鏡檢結(jié)果報告標準為：金胺O熒光染色抗酸桿菌陰性：0條/50視野；金胺O熒光染色報告抗酸桿菌菌數(shù)：1～9條/50視野；金胺O熒光染色抗酸桿菌陽性（1+）：10～99條/50視野；熒光染色抗酸桿菌陽性（2+）：1～9條/視野；金胺O熒光染色抗酸桿菌陽性（3+）：10～99條/視野；金胺O熒光染色抗酸桿菌陽性（4+）：≥100條/每視野。

1.5統(tǒng)計學方法 采用STATA 10.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

金胺O熒光染色組432例可疑結(jié)核病患者的痰標本中檢出138例陽性，陽性率為31.9%；萋-尼組檢出80例陽性，陽性率為18.5%；χ2=7.21，P<0.01，差異有統(tǒng)計學意義，見表1。在檢測1+或以下菌量的標本時，金胺O熒光染色鏡檢組陽性率為14.3%，萋-尼染色組陽性率為5.9%；χ2=23.5，P<0.01，差異有統(tǒng)計學意義，2+及以上菌量時，金胺O熒光染色鏡檢組陽性率為13.5%，萋-尼染色組陽性率為12.8%；χ2=0.42，P>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，見表2。

3 討論

金胺O熒光染色方法染色鏡檢時抗酸桿菌在暗視野背景下發(fā)出橘黃色熒光，黑色背景與抗酸桿菌對比鮮明，非常明顯容易發(fā)現(xiàn)，金胺O熒光染色染色讀片放大倍數(shù)為400倍（40倍物鏡，10倍目鏡），所觀察的視野面積大，故它的靈敏度比萋-尼染色方法普通顯微鏡鏡檢高[2]。本研究結(jié)果顯示，金胺O熒光染色組檢出陽性率為31.9%，萋-尼組為18.5%，χ2=7.21，P<0.01，兩者的陽性檢出率差異有統(tǒng)計學意義，結(jié)果與陳燕梅等[2-5]報道相符；兩組陽性檢出率差異主要體現(xiàn)在結(jié)果為1+及以下的標本，即含菌量少的痰標本上，金胺O熒光染色組為14.3%，萋-尼組5.9%，χ2=23.5，P<0.01，差異有統(tǒng)計學意義。而2+及以上菌量時的陽性率χ2=0.42，P>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，結(jié)果也與陳燕梅等[2-5]報道相符。表明痰標本含菌量較少時直接涂片金胺O熒光染色法鏡檢較萋-尼法具有更高的靈敏度，這樣可防止漏診的出現(xiàn)，對于那些病變活動性輕、排菌量較少的肺結(jié)核診斷具有重要意義，及時準確發(fā)現(xiàn)這部分具有傳染性的肺結(jié)核患者對于我國的結(jié)核病預防控制、流行病學調(diào)查、治療等有重大意義[3]。

參考文獻：

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[3]陳燕梅，錢明，江勇，等.熒光染色發(fā)光二極管顯微鏡檢測結(jié)核分枝桿菌的效果分析[J].中國防癆雜志，2011，33（9）：585-587.

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[5]戴學海，金法祥，湯佳良，等.金胺O熒光染色法在結(jié)核病細菌學檢驗中的應用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18（5）：851-923.

編輯/翟辰萬