HPLC法測(cè)定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量

摘要：目的 通過(guò)HPLC方法測(cè)定阿昔洛韋在阿昔洛韋眼用凝膠中的含量。方法 在色譜條件：ZorbaxExtendC18不銹鋼柱（250 mm×4 mm，5 μm）為色譜柱，流動(dòng)相：水-甲醇-冰醋酸（90∶10∶0.1），檢測(cè)波長(zhǎng)：252 nm，進(jìn)樣量10 μ，1.0 mL/min流速，柱溫為室溫（25℃）條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 阿昔洛韋在0.12～1.44 ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為：Y=633417X-52341（r=0.9996），平均回收率為100.67%，RSD為1.32%。結(jié)論 采用高效液相色譜方法，可有效評(píng)估阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋的含量，本法結(jié)果準(zhǔn)確、方法簡(jiǎn)單、靈敏度高。

關(guān)鍵詞：HPLC法；阿昔洛韋；眼用凝膠；含量

單純皰疹病毒性角膜炎又稱單皰角膜炎，是由單純皰疹病毒誘發(fā)的角膜感染引起的一類眼科疾病，是目前世界上危害最為嚴(yán)重的眼科疾病之一[1]，阿昔洛韋（aciclovior）因其選擇性高、副作用小、藥物耐受好且為高特異性抗單純皰疹病毒藥物，成為目前單皰角膜炎最佳治療藥物。早期眼部用藥治療多采用眼膏或滴眼劑，因使用方便、患者接受性好等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用，但近期研究發(fā)現(xiàn)，由于滴眼劑在眼內(nèi)停留時(shí)間較多，且容易被體內(nèi)吸收，藥物生物利用率低，重復(fù)多次應(yīng)用又可能引發(fā)較多副作用[2]。凝膠型眼用制劑的出現(xiàn)，有效解決了上述問(wèn)題。阿昔洛韋凝膠劑可有效解決單皰角膜炎治療需反復(fù)用藥、生物利用率低等問(wèn)題。如何快速測(cè)定此類眼用凝膠中主成分含量，有效監(jiān)測(cè)此類藥物質(zhì)量，成為眾多藥學(xué)所關(guān)注的問(wèn)題。

1 材料與方法

1.1儀器與試藥 島津LC-20A型高效液相色譜儀；離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）；甲醇、冰醋酸均由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供，均為色譜醇；阿昔洛韋對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：150913-151102）；阿昔洛韋凝膠（江蘇圣寶羅藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H19991377，批號(hào)為：140911、150212、150622）。

1.2方法

1.2.1方法學(xué)驗(yàn)證

1.2.1.1色譜條件 色譜柱：ZorbaxExtendC18不銹鋼柱（250 mm×4 mm，5 μm），流動(dòng)相：水-甲醇-冰醋酸（90∶10∶0.1），檢測(cè)波長(zhǎng)：252nm，進(jìn)樣量10 μl，1.0 mL/min流速，柱溫為室溫（25℃）。

1.2.1.2溶液的制備

1.2.1.2.1供試品溶液的制備 精密稱取0.3 g阿昔洛韋凝膠，加入流動(dòng)相25 ml稀釋，充分混勻后，于3000 r/min，離心5 min，取上清液，0.2 um微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液做供試液。

1.2.1.2.2對(duì)照溶液的制備 精密量取阿昔洛韋對(duì)照品15 mg，置于100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻即得。

1.2.1.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

1.2.1.3.1空白對(duì)照結(jié)果 試驗(yàn)中的空白溶劑選擇為流動(dòng)相，取流動(dòng)相適量，除不加樣品外其余操作同“1.2.1.2.1”制備空白對(duì)照，取10 ul進(jìn)液相252 nm掃描，未見(jiàn)任何雜質(zhì)峰，對(duì)測(cè)定不會(huì)造成影響，可考慮作為空白溶劑。

1.2.1.3.2精密度試驗(yàn) 精密量取20 μL對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定峰面積，并計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.2%（<2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

1.2.1.3.3重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同批號(hào)阿昔洛韋凝膠6份，根據(jù)供試品“1.2.1.2.1”項(xiàng)操作制備溶液，取10 μL溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，可得到6份供試品溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.9%（<2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，因此具有良好的重復(fù)性。

1.2.1.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液與對(duì)照品溶液，分別在0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h精密量取10 μL注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，對(duì)照品溶液峰面積的RSD為1.16%（<2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；供試品溶液峰面積RSD為1.23%（<2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，提示對(duì)照品及供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.1.3.5回收率考察 分別精密稱取約10 mg同一批次的阿昔洛韋凝膠，保存至3個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，依次加阿昔洛韋對(duì)照品2.23 mg、5.17和10.31 mg，根據(jù)制作“1.2.1.2.1”項(xiàng)步驟，取續(xù)濾液10 ul進(jìn)針，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，分別計(jì)算回收率為101.23%、101.18%和99.79%，平均回收率為100.67%，RSD為1.32%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

1.2.1.4線性關(guān)系考察 精密稱取阿昔洛韋對(duì)照品13.4 mg置于100 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取0.05 ml、0.10 ml、0.20 ml、0.40 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml、6 ml置于10 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并以峰面積對(duì)其濃度進(jìn)行線性回歸，得線性方程為：Y=633417X-52341，（r=0.9996），結(jié)果表明，阿昔洛韋濃度在0.12～1.44 ug/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

1.2.2樣品中阿昔洛韋含量測(cè)定 在同一色譜條件下分別測(cè)定阿昔洛韋對(duì)照品溶液與3批阿昔洛韋凝膠供試品溶液（取供試品0.2 g），采用峰面積歸一化法和自身對(duì)照法（不加校正因子），對(duì)供試品內(nèi)含有的阿昔洛韋含量進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，通過(guò)上述色譜條件測(cè)定阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋含量，與標(biāo)識(shí)量比較結(jié)果顯示，三個(gè)批次的樣本含量分別為101.23%、100.49%、100.37%，RSD<2%，見(jiàn)表1。

3 討論

阿昔洛韋（C8H11N5O3）屬嘌呤類抗病毒藥物[3]，本文首先通過(guò)對(duì)其進(jìn)行全波段掃描，確定252 nm作為其檢測(cè)波長(zhǎng)，因此時(shí)吸收最大；前期試驗(yàn)及文獻(xiàn)調(diào)查顯示，凝膠中存在大分子物質(zhì)，可能導(dǎo)致色譜柱堵塞，進(jìn)而影響測(cè)定，經(jīng)試驗(yàn)分析在酸性流動(dòng)相處理后，對(duì)應(yīng)高聚物配合離心可有效去除，故考慮先對(duì)樣品稀釋后離心，排除干擾；在色譜條件選擇上，本文參考了早期[4]的文獻(xiàn)報(bào)道，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室條件優(yōu)選所得。

經(jīng)方法學(xué)考察可知，本次實(shí)驗(yàn)所選方法準(zhǔn)確性高、精密度好、重現(xiàn)性和相關(guān)性均符合相關(guān)要求，且比較自身對(duì)照法和面積歸一化法，發(fā)現(xiàn)兩組結(jié)果基本一致，提示二者均可用于其含量計(jì)算。

參考文獻(xiàn)：

[1]胡漢昆，吳東方，劉薇芝.高效液相色譜法測(cè)定阿昔洛韋眼凝膠中阿昔洛韋的含量[J].HeraldofMedicine，2010，29（12）：1644-1645.

[2]謝愛(ài)麗，王維.HPLC法測(cè)定阿昔洛韋乳膏（Ⅱ）中阿昔洛韋的含量[J].海峽藥學(xué)，2013，25（4）：41-42.

[3]王書(shū)玉，王磊，竇佳，等.離心分配色譜法測(cè)定阿昔洛韋乳膏中主成分的含量[J].中國(guó)藥房，2015（18）：2567-2569.

[4]劉海宏，李振武，李宏斌，等.高效液相色譜法測(cè)定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2011，20（9）：22-23.

編輯/肖慧