哮喘大鼠呼吸道、腸道微生態(tài)變化研究

摘要：目的 從微生態(tài)角度探討\"肺與大腸相表里\"的機(jī)制。方法 選取SPF級Wistar大鼠30只采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組和哮喘模型組。采用1%卵白蛋白超聲霧化吸入建立哮喘模型。建模成功后取肺泡灌洗液及腸粘液進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)及細(xì)菌種類檢測。結(jié)果 哮喘組和空白對照組比較，肺泡灌洗液中需氧菌顯著多于對照組（P<0.05），厭氧菌顯著少于對照組（P<0.05），真菌顯著多于對照組（P<0.05）。腸粘液菌群結(jié)果可以看出哮喘組的需氧菌顯著多于空白對照組（P<0.05），厭氧菌顯著少于對照組（P<0.05），真菌顯著多于對照組（P<0.05），雙歧桿菌顯著少于對照組（P<0.05），而兩組大腸桿菌之間無顯著差異性（P>0.05）。結(jié)論 支氣管哮喘大鼠呼吸道菌群及腸道菌群均發(fā)生變化，為\"肺與大腸相表里\"提供部分微生態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：哮喘；動(dòng)物模型；腸道；微生態(tài)

支氣管哮喘（簡稱\"哮喘\"）是一種嚴(yán)重威脅人類健康的慢性呼吸系統(tǒng)疾病。發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈增加趨勢，發(fā)展中國家的患病率呈更為顯著的上升趨勢[1]。越來越多的研究結(jié)果顯示，細(xì)菌感染是誘發(fā)哮喘的危險(xiǎn)因素[2，3]，\"肺與大腸相表里\"，最早源于《內(nèi)經(jīng)》\"肺與大腸相合\"的論述。中醫(yī)認(rèn)為，肺與大腸通過經(jīng)脈聯(lián)系，一陰一陽表里相對，臟腑陰陽表里相偶[4]。故本文通過建立哮喘動(dòng)物模型，研究模型大鼠的呼吸道及腸道微生態(tài)變化，觀察微生物種群分布差異及菌群活性在哮喘發(fā)病中的相互關(guān)聯(lián)，現(xiàn)報(bào)道如下：

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取SPF級Wistar大鼠30只 （新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），體重（200±20）g，雌雄各半，分籠并常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2造模方法 30只大鼠雌雄不限，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組，哮喘模型組。模型組每只大鼠均于實(shí)驗(yàn)的第1d、第8d和第14d共3次在腹腔分2點(diǎn)注射含15 mgOVA和10mg Al（OH）3的生理鹽水1ml，于致敏第15d，每日以1%卵白蛋白生理鹽水對動(dòng)物放入自制的密閉有機(jī)玻璃箱中進(jìn)行超聲霧化吸入，連續(xù)激發(fā)3d，正常對照組予生理鹽水代替抗原進(jìn)行致敏和激發(fā)。

1.3肺泡灌洗液實(shí)驗(yàn) 第19d兩組大鼠處死后開胸分離氣管及肺臟，夾閉右主支氣管，以0.9%生理鹽水3 mL灌洗左肺，抽出1.5 mL左右，共灌洗3次，收集支氣管灌洗液4～5 mL左右。將BALF于4℃離心，取上清液待檢測。

1.4腸黏液采集 取靠近回盲部15cm的腸段，平鋪于濾紙上，縱行剖開，用生理鹽水反復(fù)沖洗腸腔表面，用載玻片輕刮黏膜表面黏液置EP管內(nèi)，加入0.5 ml 0.01 mol/LPBS充分混勻，1000 r/min離心15 min，取上清液置4℃冰箱待測。

1.5微生態(tài)檢測 菌落計(jì)數(shù)： 計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落數(shù)并乘以稀釋倍數(shù)，得到菌落形成單位（CFU）數(shù)據(jù)。由于數(shù)據(jù)較大，將此原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成對數(shù)值，完成統(tǒng)計(jì)運(yùn)算。

種類鑒定：根據(jù)細(xì)菌形態(tài)學(xué)、菌落、菌細(xì)胞和菌落形態(tài)、染色性及生化實(shí)驗(yàn)鑒定。

2結(jié)果

2.1小鼠肺部微生態(tài)比較結(jié)果 通過對小鼠支氣管肺泡灌洗液菌群進(jìn)行分析，可以看出哮喘組和空白對照組比較哮喘組的需氧菌顯著多于空白對照組（P=0.000），厭氧菌顯著少于對照組（P=0.003），真菌顯著多于對照組（P=0.000），見表1。

2.2小鼠腸道微生態(tài)比較結(jié)果通過對小鼠腸粘液菌群進(jìn)行分析，可以看出哮喘組和空白對照組比較哮喘組的需氧菌顯著多于空白對照組（P=0.000），厭氧菌顯著少于對照組（P=0.000），真菌顯著多于對照組（P=0.000），哮喘組的雙歧桿菌顯著少于對照組（P=0.003），而兩組大腸桿菌之間無顯著差異性（P=0.268），見表2。

3討論

正常狀況下，機(jī)體與正常菌群之間保持著動(dòng)態(tài)的微生態(tài)平衡，常駐菌與宿主的微環(huán)境形成一個(gè)相互依賴又相互作用的微生態(tài)系統(tǒng)[5]。一旦這種微生態(tài)平衡受到破壞，就有可能導(dǎo)致機(jī)體疾病的發(fā)生。

本次研究結(jié)果顯示，在哮喘狀態(tài)下，大鼠的肺部和腸道菌群變化均存在顯著性差異，整體表現(xiàn)為需氧菌增多，厭氧菌減少，真菌增多的表現(xiàn)形式，而肺部的菌群變化與腸道的菌群變化具有相似性，也體現(xiàn)了中醫(yī)\"肺與大腸相表里\"\"肺病及腸\"的理論觀點(diǎn)。

由此可見，支氣管哮喘患者在發(fā)病中不僅出現(xiàn)了呼吸道均群的失調(diào)，同時(shí)腸道菌群也發(fā)生了紊亂，因此，在支氣管哮喘的治療中同時(shí)重視對腸道菌群平衡的調(diào)整也可能起到治療支氣管哮喘的作用。

參考文獻(xiàn)：

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[2]Pole JD，Mustard CA，To T，et al.Antenatal steroid therapy for fetal lung maturation：is there an association with childhood asthma？[J].J Asthma，2009，46（1）：47-52.

[3]Wu P， Dupont WD， Griffin MR， et al. Evidence of a causal role of winter virus infection during infancy in early childhood asthma[J].Am J Respir Crit Care Med， 2008，178（11）：1123-1129.

[4]龔盟.\"肺與大腸相表里\"理論文獻(xiàn)整理與實(shí)驗(yàn)研究[D]，北京中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[5]陶方明.人體的微生態(tài)平衡[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，03：204-205.

編輯/丁一