兩種不同的檢驗方法檢測乙型肝炎病毒標志物的臨床比較

摘要：目的 對比時間分辨免疫熒光分析法（TRFIA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）檢測乙型肝炎病毒標志物效用。方法 對272例對象進行有關(guān)于HBV血清標志物TRFIA、CLIA檢測。結(jié)果 TRFIA檢驗HBcAb陽性率高于ECLIA，TRFIA檢測HBsAb特異度、檢測HBeAg與HBcAb靈敏度低于ECLIA方法，TRFIA檢測HBeAg特異度、檢測HBcAb特異度高于ECLIA，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 TRFIA、CLIA檢測各有優(yōu)劣。

關(guān)鍵詞：乙型肝炎；病毒標志物；化學(xué)發(fā)光免疫；時間分辨熒光免疫分析

乙型病毒性肝炎（以下簡稱乙肝），是一種嚴重威脅人類生命健康的病毒性傳染病，保守估計全世界約20億人感染過乙型肝炎病毒（HBV），現(xiàn)存慢性HBV感染者約3.5億人。我國乙肝表面抗原攜帶率高達8%～10%[1]。乙肝危害極大，約50%～70%的慢性HBV感染者進展為慢性肝炎，其中多數(shù)又進展為肝硬化、肝癌，年死亡約100萬例[2]。檢測HBV病毒標志物是乙肝防治基礎(chǔ)工作之一，可反映乙肝發(fā)展、轉(zhuǎn)歸以及預(yù)后。HBV標志物檢測主要可分為定性分析與定量分析，定量分析主要包括酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、TRFIA、CLIA等，國內(nèi)常用Elecsys Ⅱ系統(tǒng)、Architect系統(tǒng)，ELISA法應(yīng)用最廣[3]。CLIA、TRFIA靈敏度高，特異性好，可進行定量分析，但目前在臨床上應(yīng)用較少，關(guān)于兩種方法優(yōu)劣尚無明確定量。

1 資料與方法

1.1一般資料 以2014年1月～2015年1月，醫(yī)院開展HBV 血清標志物定量檢測受檢者作為研究對象。納入標準：①知情同意；②嚴格質(zhì)控。共納入對象272例，其中男150例、女122例，年齡1～84歲、平均（41.3±5.2）歲。50例診斷為肝炎，已知FQ-HBV-DNA定量檢測結(jié)果。其余均為日常檢驗樣本。

1.2方法 采用CLIA雙抗夾心法檢測HbsAg、雙抗原夾心法檢測HbsAb、雙抗體夾心法檢測HbeAg、競爭法檢測HbeAb、HbcAb。檢查儀器，檢測HBsAg四項血清標志物配套試劑，讀取試劑盒上條形信息。先檢測2份質(zhì)控品，若檢測值在要求范圍內(nèi)，開始檢測待測樣品，否則需排除失控原因再檢測。

TRFIL雙抗體夾心法檢測HBsAg、雙抗原夾心法檢測HbsAb/雙抗體夾心法檢測HbeAg、競爭法檢測HBeAb與HbcAb。采用銪標志，將稀釋液按1：50配置成為事項HBV血清標注物標記物工作液，同時將相應(yīng)的微孔反應(yīng)板、空白板，按順序放置在時間分娩熒光分析儀固定的反應(yīng)板位置，將配套的校準液、質(zhì)控品等放置于預(yù)設(shè)位置。復(fù)融血清標本，吸取500μl，采用EFFICUTA全自動樣本處理系統(tǒng)加樣，儀器緩慢振動孵育40min，洗板，加入銪標志物工作液，加增強液，儀器自動根據(jù)校準品濃度與熒光值，采用擬合方式計算標準曲線，而后求出待測樣本濃度，進而判斷結(jié)果。

以熒光PCR定量檢測為金標準，抽提HBV-DNA模板，配置PCR反映液，并向每個PCR反應(yīng)管中加入20μl，加入DNA模塊液，進行PCR擴增。

1.3判斷標準 CLIA法：HBsAg、HBeAg≥1.0 COI者為陽性，否則為陰性；HBeAb、HBcAb<1.0COI為陽性，否則為陰性；HBsAb≥10mIU/ml者為陽性，否則為陰性。

TRFIL法：HBsAg≥0.2ng/ml者為陽性，否則為陰性；HBsAb≥10mIU/ml者為陽性，否則為陰性；HBeAg≥0.5PEIU/ml者為陽性，否則為陰性；HBeAb≥0.2PEI U/ml者為陽性，否則為陰性；HBcAb≥0.9PEI U/ml者為陽性，否則為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 WPS收集錄入數(shù)據(jù)資料，以SPSS18.0軟件包統(tǒng)計處理，計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，若服從正態(tài)分布采用t檢驗，否則采用非參數(shù)檢驗，計數(shù)資料以數(shù)（n）或率（%）表示，比較采用χ2檢驗，以P<0.05表示檢驗水平，一致性檢驗采用Kappa分析，Kappa>0.75表示有較好的一致性。

2 結(jié)果

2.1兩種方法檢驗結(jié)果分布 TRFIA檢驗HBcAb陽性率高于ECLIA，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；TRFIA與ECLIA方法檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（見表1）。兩種方法一致性檢驗，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb一致性Kappa值分別為0.932、0.805、0.890、0.844、0.450，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb具有較好的一致性。

2.2檢測HBV血清標志物效用 以PCR檢測結(jié)果為金標準，HBsAb陽性147例、HBeAg陽性31、HBeAb陽性150例、HBcAb陽性195例。TRFIA檢測HBsAb特異度、檢測HBeAg與HBcAb靈敏度低于ECLIA方法，TRFIA檢測HBeAg特異度、檢測HBcAb特異度高于ECLIA，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

目前，臨床普遍采用ELISA檢測HBV血清標志物，近年來TRFIA與ECLIA法迅速發(fā)展，并逐漸得到推廣應(yīng)用，普遍認為兩種方法并無優(yōu)劣之分，都可有效對HBV血清標志物水平，進行定量分析。但從本次研究來看，兩種技術(shù)對不同類型HBV血清標志物敏感性、特異度不盡相同，TRFIA法對HBeAg與HBcAb敏感性、對HBeAb特異度偏低，ECLIA法對HBeAb于HBcAb特異度偏低。TRFIA以銪為示蹤劑，可明顯排除非特異性熒光的干擾，當具有雙功能基團的銪標記抗原或抗體與病毒血清抗體與抗原結(jié)合時，可在特定的激發(fā)光下發(fā)出特定波長的熒光。CLIA技術(shù)是目前最先進的化學(xué)發(fā)光免疫測定系統(tǒng)之一，從方法學(xué)角度來看，但該法檢測效用易受血清稀釋比例、操作步驟影響。ECLIA、TRFIA檢測不同HBV血清標志物效用差異具體原因尚不清楚，可能與技術(shù)實現(xiàn)特定、步驟差異、材料質(zhì)量等因素有關(guān)，實驗室應(yīng)據(jù)、檢測水平，制定合適的血清標志物篩查診斷HBV感染流程步驟。

綜上所述，TRFIA、CLIA檢測各有優(yōu)劣，對HBsAb敏感度較高。

參考文獻：

[1]中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）[J].中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2011，12（1）：1-15.

[2]林宇，李頌華，王如偉.日本對慢性乙型肝炎和肝硬化的治療研究概述[J].中國藥學(xué)雜志，2012，47（18）：1444-1449.

[3]馬曉燕，韓濤，裴彥禎，等.乙肝肝硬化患者血清乙肝病毒表面抗原定量水平的研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2011，21（34）：4375-4277.

編輯/金昊天