胎兒骨骼染色透明標(biāo)本的設(shè)計(jì)與制作

摘要：目的 通過透明標(biāo)本的制作，對胎兒體內(nèi)整體骨骼結(jié)構(gòu)的位置關(guān)系及形態(tài)進(jìn)行觀察和分析。方法 應(yīng)用氫氧化鉀溶液先對預(yù)先處理好的胎兒標(biāo)本進(jìn)行透明處理，再應(yīng)用茜素紅對胎兒硬骨及骨鈣化點(diǎn)進(jìn)行染色，最后通過各級甘油的應(yīng)用來脫去肌肉浮色，使組織透明。結(jié)果 經(jīng)過一系列的處理后，胎兒機(jī)體軟組織呈現(xiàn)無色透明特點(diǎn)，其中硬骨及骨鈣化點(diǎn)均被成功的染成紅色，而且骨骼界限也尤為清晰。結(jié)論 胎兒骨骼染色透明標(biāo)本的設(shè)計(jì)與制作，是當(dāng)前通過非傳統(tǒng)解剖法對胎兒體內(nèi)整體骨骼結(jié)構(gòu)的位置關(guān)系及形態(tài)進(jìn)行直接觀察和分析的有效手段，在臨床有著廣泛的應(yīng)用和意義。

關(guān)鍵詞：胎兒；透明標(biāo)本；骨骼染色；設(shè)計(jì)；制作

透明標(biāo)本的制作，就是在對機(jī)體組織處理過程中，通過一些物理方法和化學(xué)藥品的應(yīng)用，使組織的折射率達(dá)到與周圍介質(zhì)和透明劑相似的要求，從而達(dá)到透明的目的。而胎兒骨骼染色標(biāo)本的設(shè)計(jì)與制作，也就是通過應(yīng)用相應(yīng)的物理方法和化學(xué)制劑，實(shí)現(xiàn)在保證胎兒完整外形結(jié)構(gòu)的前提下，使其軟組織的折光率能夠同周圍介質(zhì)與透明劑相近。胎兒骨骼染色透明標(biāo)本，為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)教學(xué)提供出了一套最直觀的標(biāo)本資料，在對胎兒各期骨骼發(fā)育情況進(jìn)行觀察和學(xué)習(xí)的過程中發(fā)揮出了重要的參考意義。

1 資料與方法

1.1材料 在制作過程中主要應(yīng)用的材料有：以濃度系數(shù)為10%的甲醛溶液為固定液；濃度為6%的過氧化鈉溶液為漂白劑，并用濃度系數(shù)分別為50%、70%、90%、95%的酒精為脫水劑；透明劑采用濃度系數(shù)為4%的氫氧化鉀溶液，其中應(yīng)用的染色液有2g氫氧化鉀、0.04g的茜素紅以及100g的蒸餾水。同時(shí)在制作過程中還需一孕育4w左右的男性新鮮胎兒尸體。

1.2清洗 在正是操作之前，首先對胎體表面的血跡、污垢利用清水做清潔處理，并在沖洗過程中同時(shí)對胎兒的胸腔和腹腔進(jìn)行擠壓，以便存在于胎兒體內(nèi)的內(nèi)容物都能順利排出，但為了保證胎兒整體的完整性，在操作過程中要保留胎兒的內(nèi)臟及腦組織。

1.3排血 在整個(gè)標(biāo)本制作過程中，排血操作做為了一項(xiàng)最重要的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)。在排血操作過程中，首先在胎兒的胸骨柄處切開一口，以成功找到胎兒的心臟及各大出入血管，切開下腔靜脈，促使胎兒排血；而后對胎兒肺動脈和主動脈起始端進(jìn)行結(jié)扎，在動脈中進(jìn)行肝素溶液的連續(xù)注射，直到胎兒靜脈流出的肝素溶液呈現(xiàn)無色即可停止注射操作。

1.4固定 固定好胎兒姿勢，并將其保持該姿勢置入濃度為10%的甲醛溶液中進(jìn)行固定浸泡，浸泡時(shí)間為5d。

1.5漂白 將經(jīng)過浸泡的胎兒標(biāo)本取出，并用清水進(jìn)行連續(xù)12h的沖洗，再將沖洗過后的胎兒標(biāo)本放置到濃度為6%的過氧化氫溶液中進(jìn)行為期3～4d的浸泡，進(jìn)行漂白處理，進(jìn)而成功去除胎兒組織中的污物和色素。

1.6脫水 經(jīng)過漂白處理之后，再將胎兒標(biāo)本用清水進(jìn)行12h的清洗，隨后再將清洗后的標(biāo)本置入不同濃度的酒精中進(jìn)行脫水處理，從低濃度等級向高濃度等級依次進(jìn)行，每一濃度等級中進(jìn)行5d的浸泡。在脫水處理過程中可用針頭扎標(biāo)本，以利于胎兒脫水的更有效進(jìn)行，也便于標(biāo)本的透明。

1.7透明 利用濃度為4%的氫氧化鉀溶液，并在結(jié)合胎兒標(biāo)本具體大小的基礎(chǔ)上進(jìn)行透明處理，溶液每隔2～3d進(jìn)行一次更換，直至胎兒組織完全透明。

1.8染色 將完全透明的標(biāo)本置入染色液中進(jìn)行為期3～5d的染色處理，直到胎兒硬骨及骨鈣化點(diǎn)被成功著色后即可立即取出標(biāo)本，以避免出現(xiàn)肌肉的過度染色。

1.9軟組織脫色 將處理好的胎兒標(biāo)本放置入各級甘油中進(jìn)行軟組織脫色處理，同脫水處理一樣，從低濃度向高濃度依次進(jìn)行，每一濃度級進(jìn)行為期2d左右的脫色，直至機(jī)體軟組織浮色成功去除即可完成。

1.10二次透明 將經(jīng)過軟組織脫色處理后的胎兒標(biāo)本放入甘油中進(jìn)行二次透明處理，在處理過程中對于肌肉較厚的部位可采取人工注入甘油的方法來強(qiáng)化透明效果。

1.11保存 最后，對處理好的胎兒骨骼染色透明標(biāo)本進(jìn)行整理和修飾，所有整理工作結(jié)束后，將其放入冬青油中進(jìn)行密封保存。

2 結(jié)果

經(jīng)過一系列的處理過程而完成的胎兒染色透明標(biāo)本，胎兒機(jī)體軟組織呈現(xiàn)無色透明特點(diǎn)，其中硬骨及骨鈣化點(diǎn)均被成功的染成紅色，而且骨骼界限也尤為清晰，更加便于觀察和識別。實(shí)現(xiàn)了在保證胎兒整體外部結(jié)構(gòu)完整的情況下，能夠更加精準(zhǔn)直觀的觀察其內(nèi)部的骨骼結(jié)構(gòu)位置和形態(tài)特征。

3 討論

3.1 在標(biāo)本制作過程中的注意事項(xiàng)

3.1.1在制作過程中所應(yīng)用到的胎兒材料要確保足夠新鮮，便于透明和排血處理。因?yàn)槿绻簶?biāo)本放置時(shí)間過長，都會由于凝血原因?qū)е卵芏氯?，進(jìn)而對沖洗機(jī)排血等過程帶來極大地不便[1-4]。

3.1.2漂白和脫水作為標(biāo)本制作過程中的兩大關(guān)鍵環(huán)節(jié)，在具體的實(shí)施過程中要確保標(biāo)本不被破壞的前提下進(jìn)行充分的漂白；另外，漂白液濃度的提高，雖然會縮短漂白時(shí)間，但也會造成組織損傷，因此為更好的確保標(biāo)本外形的完整性，通常會采取較低濃度的漂白液。對于脫水處理過程，經(jīng)過脫水處理后的胎兒標(biāo)本，能夠更好地實(shí)現(xiàn)透明劑的滲入，進(jìn)而達(dá)到透明充分的目的。但同時(shí)由于較高濃度酒精所具備的滲透速度快、脫水能力強(qiáng)等特點(diǎn)，會導(dǎo)致標(biāo)本出現(xiàn)明顯的收索硬化進(jìn)而損壞胎兒外形，因此在脫水環(huán)節(jié)，通常采取逐級脫水的方法，以此有效的避免了標(biāo)本的外形改變，并充分的保證了胎兒的外部形態(tài)的完整性。

3.1.3由于胎齡越大，質(zhì)量越重，身體結(jié)實(shí)度越強(qiáng)，相應(yīng)的溶液融入也就越困難，因此在透明處理過程中要結(jié)合胎兒的具體年齡、質(zhì)量以及堅(jiān)實(shí)程度等特點(diǎn)進(jìn)行透明劑氫氧化鉀的選取，避免由于溶液濃度過高而造成標(biāo)本的腐蝕。

3.1.4染色液濃度和染色時(shí)間也要根據(jù)材料的大小進(jìn)行確定。在染色過程中要保持緊密的觀察，對于染色時(shí)間及染色程度進(jìn)行準(zhǔn)確的把握，避免染色過度現(xiàn)象的發(fā)生。

3.2胎兒骨骼染色透明標(biāo)本的作用分析 在傳統(tǒng)的教學(xué)模式中，只是單純的局限于對傳統(tǒng)理論及解剖實(shí)驗(yàn)的講解，對于在保持機(jī)體完整狀態(tài)下進(jìn)行的骨骼結(jié)構(gòu)形態(tài)觀察嚴(yán)重缺乏，因此對學(xué)生的學(xué)習(xí)帶來了極大地不便。胎兒骨骼染色透明標(biāo)本的設(shè)計(jì)及制作，為現(xiàn)代胚胎學(xué)的醫(yī)學(xué)影像學(xué)研究和骨骼學(xué)研究以及解剖學(xué)研究等方面，提供出了一套直觀真實(shí)的形態(tài)學(xué)資料。并在實(shí)踐教學(xué)中，通過同臨床影像學(xué)資料的對比，使得教學(xué)手段得到了極大的豐富，有效的提高學(xué)生們的學(xué)習(xí)積極性，并促使其對于胎兒骨骼結(jié)構(gòu)的位置關(guān)系和形態(tài)有了一更為直觀的認(rèn)識，有效的提高了教學(xué)效果；除此之外，該透明標(biāo)本還能夠長期保存，可供展覽使用。

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