慢性咽炎協(xié)定處方代茶飲兩種制備方法的比較

張婧 張晉京 蘇爽 鄭金鳳 王景紅

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·論著·

慢性咽炎協(xié)定處方代茶飲兩種制備方法的比較

張婧 張晉京 蘇爽 鄭金鳳 王景紅

目的 測(cè)定兩種不同方法制備的慢性咽炎協(xié)定處方代茶飲其主要指標(biāo)含量差異，探索適當(dāng)?shù)闹苽錀l件，為指導(dǎo)患者合理用藥提供依據(jù)。方法 采用單因素考察法比較該處方水煎煮和水泡服兩種方法制備的代茶飲水溶性浸出物的情況；采用紫外分光光度法測(cè)定兩種代茶飲水溶液吸光度的變化；采用高效液相色譜法測(cè)定兩種代茶飲水溶液中綠原酸和木犀草苷的含量變化；采用微生物限度檢查法測(cè)定兩種代茶飲水溶液的細(xì)菌、霉菌、酵母菌和大腸埃希菌染菌情況。結(jié)果 水泡服代茶飲出膏率21.46%，紫外吸光度在326 nm下為1.052，主要成分綠原酸、木犀草苷含量總和為141.11 mg，微生物檢查情況為細(xì)菌90 cfu/mL、霉菌<10 cfu/mL、未檢出大腸埃希菌；水煎煮代茶飲出膏率28.38%，紫外吸光度在326 nm下為1.162，主要成分綠原酸、木犀草苷含量總和為131.21 mg，微生物檢查情況為細(xì)菌70 cfu/mL、霉菌<10 cfu/mL，未檢出大腸埃希菌。結(jié)論 水煎煮代茶飲在出膏率和吸光度上占有優(yōu)勢(shì)，水泡服代茶飲在主要成分溶出率占有優(yōu)勢(shì)，二者均符合微生物限量檢查標(biāo)準(zhǔn)。

代茶飲； 泡服； 煎煮； 含量測(cè)定； 綠原酸； 木犀草苷

中藥的煎煮方法已有2000多年的歷史，歷代名醫(yī)都十分重視。煎藥的器具、煎藥用水、服用的方法等都非?？季?，在古書中均有詳細(xì)的記載。李時(shí)珍闡述了藥液煎煮不當(dāng)?shù)牟涣己蠊骸胺卜帲m品物專精，修治如法，而煎藥者魯莽造次，水火不良，火候失度，則藥亦無(wú)功?！薄夺t(yī)藥源流改》曰：“病之愈不愈，不但方中病，方雖中病，而服之不得其法，則非特?zé)o功，而反有害，此不可不知也?！?古人已認(rèn)識(shí)到中藥煎煮過(guò)程中有許多因素影響煎煮質(zhì)量，其煎煮質(zhì)量的好壞直接影響藥物治病的療效；正確的煎煮和服藥方法可增加中藥的治療功效，達(dá)到事半功倍的效果，有助于疾病的治療，更能夠充分地發(fā)揮藥物的功效。

中藥代茶飲始于三國(guó)時(shí)期，清代中藥代茶飲發(fā)展最為迅速，成為清宮皇室防治疾病的重要?jiǎng)┬椭?。近年?lái)，隨著大眾對(duì)中醫(yī)養(yǎng)生的喜愛，代茶飲的應(yīng)用更加的廣泛，但對(duì)于代茶飲的具體服用方法并沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可循。中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院治療慢性咽炎的代茶飲處方使用頻率較高，為呼吸科及耳鼻喉科常用處方，該處方為：菊花10 g、金銀花3 g、胖大海3 g、麥冬6 g、甘草3 g，方中菊花清熱宣肺為君藥；金銀花和胖大海清熱解毒共為臣藥；麥冬養(yǎng)陰利咽為佐藥；甘草調(diào)和諸藥為使藥。為比較此代茶飲處方泡服和煎煮效果，提高藥物臨床治療效果、指導(dǎo)患者合理用藥，避免中草藥資源的浪費(fèi)，故對(duì)此協(xié)定處方代茶飲兩種制備方法進(jìn)行比較研究。

1 材料與方法

1.1 儀器

Agilent 1200 Series高效液相色譜儀(G1312B四元梯度泵、G1322A脫氣機(jī)、G1316B柱溫箱、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315C二極管陣列紫外檢測(cè)器)、UV-2450紫外分光光度儀(日本島津)、1810A摩爾原子型超純水器(上海摩勒科學(xué)儀器有限公司)、賽多利斯Bp211DAG電子天平(德國(guó)Sartorius)、DHG-9246A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海江華儀器有限公司)、HH-2恒溫水浴鍋(金壇市新航儀器)。

1.2 藥材

菊花ChrysanthemummorifoliumRamat(產(chǎn)地：浙江，批號(hào)：141181791)，金銀花LonicerajaponicaThunb(產(chǎn)地：河南，批號(hào)：141280441)，胖大海SterculialychnophoraHance(產(chǎn)地：云南，批號(hào)：140182061)，麥冬Ophiopogonjaponicus(L.f) Ker-Gawl(產(chǎn)地：四川，批號(hào)：141281701)，甘草GlycyrrhizauralensisFisch(產(chǎn)地：內(nèi)蒙古，批號(hào)：141282091)均由康美藥業(yè)股份有限公司北京分公司提供。

1.3 藥品與試劑

綠原酸(110753-201314)、木犀草苷(111720-201408)均由中國(guó)食品藥品生物制品檢定研究院提供；色譜乙腈(美國(guó)Fisher公司)；水為超純水(實(shí)驗(yàn)室自制)，其他試劑均為分析純。

1.4 代茶飲制備工藝研究

1.4.1 泡服溫度考察 (1)樣品制備：按處方量稱取中藥飲片置于500 mL燒杯中，分別加入80℃、90℃、100℃的純化水400 mL，浸泡30分鐘后，紗布過(guò)濾，濾液冷卻至室溫后定容至500 mL即得。(2)水溶性浸出物測(cè)定：精密量取上述濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，計(jì)算水溶性浸出物的含量。(3)水溶性浸出物紫外吸光度的測(cè)定：精密量取上述濾液1 mL，置于25 mL容量瓶中，用純水稀釋至刻度。在紫外分光光度計(jì)下進(jìn)行全波段掃描(200～800 nm)，得最大吸收波長(zhǎng)信息，并在該波長(zhǎng)下，測(cè)定不同溫度下代茶飲水溶性浸出物吸光度。

1.4.2 泡服次數(shù)考察 (1)樣品制備：按處方量稱取中藥飲片置于500 mL燒杯中，加入100℃的純化水浸泡5次，每次浸泡30分鐘，第1次加水400 mL，2～5次加水200 mL，紗布過(guò)濾，分別收集濾液，冷卻至室溫后定容至500 mL即得。(2)水溶性浸出物測(cè)定：精密量取上述濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量,計(jì)算水溶性浸出物的含量。(3)水溶性浸出物紫外吸光度的測(cè)定：精密量取上述濾液1 mL，置于25 mL容量瓶中，用純水稀釋至刻度。在326 nm下，測(cè)定不同泡服次數(shù)下代茶飲水溶性浸出物吸光度。

1.5 水泡服和水煎煮兩種代茶飲制備方法的比較

1.5.1 水泡服和水煎煮 兩種代茶飲制備(1)水泡服代茶飲：按篩選最佳工藝條件制備，即按處方量稱取中藥飲片置于500 mL燒杯中，加入100℃的純化水浸泡3次，每次浸泡30分鐘，第1次加水400 mL，2、3次加水200 mL，紗布過(guò)濾，合并濾液，冷卻至室溫后定容至1000 mL即得。(2)水煎煮代茶飲：按處方量稱取中藥飲片置于500 mL燒杯中，加水煎煮3次，第一次加水400 mL，2、3次加水200 mL，每次煎煮30分鐘，紗布過(guò)濾，合并濾液，冷卻至室溫后定容至1000 mL即得。

1.5.2 兩種代茶飲水溶性浸出物測(cè)定 精密量取兩種代茶飲濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量,計(jì)算水溶性浸出物的含量。

1.5.3 兩種代茶飲紫外吸光度測(cè)定 精密量取上述濾液1 mL，置于25 mL容量瓶中，用純水稀釋至刻度。在326 nm下，測(cè)定兩種制備方法的代茶飲水溶性浸出物吸光度。

1.6 兩種代茶飲微生物限量檢查

(1)供試液的制備：取供試液10 mL，加pH 7.0無(wú)菌氯化鈉—蛋白胨緩沖液至100 mL，混勻，作為供試液(1∶10)。(2)檢查方法：采用10-1薄膜過(guò)濾法，濾膜孔徑為0.45 μm，直徑為50 mm。濾膜及濾器在使用前采用121℃高壓滅菌30分鐘。試驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)保持濾膜前后的完整性。將制備好的供試液(1∶10)過(guò)濾，然后用100 mL pH 7.0無(wú)菌氯化鈉—蛋白胨緩沖液(注意保持供試品溶液覆蓋整個(gè)濾膜表面)。總沖洗量不超過(guò)1000 mL，沖洗后，用鑷子取出濾膜，菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。細(xì)菌于34℃培養(yǎng)48小時(shí)，霉菌于26℃培養(yǎng)72小時(shí)。

1.7 兩種代茶飲HPLC含量測(cè)定

1.7.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 試驗(yàn)Phenomenex C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B，洗脫程序，0～11分鐘，10%～18%A；11～30分鐘，18%～20%A；30～40分鐘，20%A；檢測(cè)波長(zhǎng)為348 nm，流速為1.0 mL/min；柱溫為30℃。在選定條件下，測(cè)定理論塔板數(shù)(N)。

1.7.2 對(duì)照品溶液的制備 取綠原酸對(duì)照品、木犀草苷對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含綠原酸125.64 μg，木犀草苷25 μg的混合溶液，即得(10℃以下保存)。

1.7.3 供試品溶液的制備 取1.5.1項(xiàng)下兩種代茶飲溶液，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，即得。

1.7.4 線性關(guān)系 考察精密吸取上述混合對(duì)照品溶液10 μL進(jìn)樣，測(cè)定各色譜峰峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)X，色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并擬合回歸方程。

1.7.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述混合對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定綠原酸、木犀草苷峰面積，其RSD分別為0.22%、0.69%，表明儀器的精密度良好。

1.7.6 穩(wěn)定性 試驗(yàn)取同一供試品溶液(水泡組)，分別于0、1、2、4、8、16、24小時(shí)進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積計(jì)算。綠原酸、木犀草苷RSD分別為0.90%、1.23%，結(jié)果表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2 結(jié)果

2.1 泡服溫度考察結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)泡服溫度為100℃時(shí)，水溶性浸出物得出率最高，在326 nm波長(zhǎng)處紫外吸光度也最高，故最佳泡服溫度確定為100℃，結(jié)果見表1、圖1。

表1 不同溫度水溶性浸出物及紫外吸光度比較(n=3)

圖1 水溶性浸出物全波長(zhǎng)掃描圖

2.2 泡服次數(shù)考察結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著泡服次數(shù)增加，代茶飲水溶性浸出物和紫外吸光度依次降低，前3次水溶性浸出物和紫外吸光度分別為82.3%和87.8%，說(shuō)明基本提取完全，故選擇100℃水泡服3次為宜。因此最佳泡服條件：100℃水泡服3次，每次30分鐘，第一次加水400 mL，2、3次200 mL。結(jié)果見表2、圖2。

表2 不同泡服次數(shù)水溶性浸出物(n=3)

圖2 不同泡服次數(shù)紫外疊加圖

2.3 水泡服和水煎煮兩種代茶飲制備

水泡服和水煎煮兩種代茶飲制備方法水溶性浸出物測(cè)定和紫外吸光度測(cè)定結(jié)果見表3。

表3 兩種代茶飲水溶性浸出物及吸光度比較(n=3)

2.4 兩種代茶飲微生物限量檢查

結(jié)果表明，兩種制備方法樣品細(xì)菌總數(shù)均不超過(guò)100 cfu/mL，霉菌和酵母菌數(shù)不超過(guò)10 cfu/mL，均未檢出大腸埃希菌。結(jié)果見表4。

表4 兩種方法微生物檢查情況(n=3)

2.5 代茶飲兩種制備方法HPLC含量測(cè)定結(jié)果

在選定條件下，綠原酸和木犀草苷色譜峰與樣品中其他組分色譜峰達(dá)基線分離，其理論塔板數(shù)(N)均大于4000。見圖3。綠原酸在0.1256～2.0102 μg，木犀草苷在0.0104～0.1664 μg線性關(guān)系良好。水煎法和水泡法兩種不同制備方法代茶飲的含量測(cè)定結(jié)果見表5。

注：1為綠原酸；2為木犀草苷

圖3 對(duì)照品(A)與樣品(B)HPLC圖

3 討論

慢性咽炎為耳鼻咽喉科常見病，本病可為局部炎癥，也可為上呼吸道慢性炎癥的一部分?；颊咧饕憩F(xiàn)為咽腔干燥、異物感、發(fā)癢感、刺激性咳嗽等，病程長(zhǎng)，癥狀頑固，不易治愈。據(jù)統(tǒng)計(jì)[1]，慢性咽炎發(fā)病率為咽喉部疾病的10%～12%。西藥沒(méi)有太好的治療方法，通常采用服用西地碘治療，長(zhǎng)期服用可出現(xiàn)口內(nèi)銅腥味、喉部燒灼感、鼻炎、皮疹等不良反應(yīng)。中醫(yī)治療慢性咽炎以養(yǎng)陰利咽為主，輔以清熱解毒、化痰散結(jié)治療，療效明確，各種方劑有效率均可達(dá)90%以上[2]。

由于該病具有周期長(zhǎng)、容易反復(fù)發(fā)作，且日常預(yù)防極為重要的特點(diǎn)，通常需要長(zhǎng)期治療，因此臨床多以中醫(yī)治療和預(yù)防為主。

中藥代茶飲由于既保持了中醫(yī)湯劑辨證論治加減靈活、療效明確的特色，又克服了傳統(tǒng)湯劑煎煮繁瑣、攜帶不便等特點(diǎn)，與現(xiàn)代生活節(jié)奏加快的發(fā)展趨勢(shì)相適應(yīng)，近年來(lái)應(yīng)用也日趨廣泛，不但用于治療各種疾病，還用于平時(shí)的養(yǎng)生保健。代茶飲在三甲醫(yī)院、社區(qū)醫(yī)院和鄉(xiāng)鎮(zhèn)醫(yī)院等醫(yī)療機(jī)構(gòu)中應(yīng)用都非常廣泛，用于治療咽炎、高脂血癥、糖尿病等疾病[3-7]，療效明確，但對(duì)于代茶飲的具體服用方法比較混亂，沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，目前也沒(méi)有相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，水泡服代茶飲的最佳條件為100℃水泡服3次，每次30分鐘，第一次加水400 mL，2、3次加水200 mL。水煎煮制備的代茶飲水溶液在水溶性浸出物上和紫外吸光度上較水泡服制備的代茶飲有一定優(yōu)勢(shì)，但在主要有效成分綠原酸和木犀草苷的含量總和溶出率上，水泡服制備的代茶飲水溶液更勝一籌，二者都符合微生物限量檢查的規(guī)定。

[1] 王正敏，陸書昌.現(xiàn)代耳鼻咽喉科學(xué)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2001：787.

[2] 林明慧.慢性咽炎的研究與防治[J].臨床合理用藥，2011，4(12)：172-173.

[3] 豐勝利，張學(xué)智，張?jiān)旅?，?自擬降脂代茶飲治療痰瘀互結(jié)型血脂異常的臨床觀察[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，20(2)：52-53.

[4] 盛燕兒，黃海燕，章曉紅，等.中藥代茶飲聯(lián)合穴位埋線治療糖尿病前期50例[J].浙江中醫(yī)雜志，2014，49(3)：186.

[5] 莊學(xué)瓊.中藥代茶飲配合社區(qū)干對(duì)中青年正常高值血壓的控制效果觀察[J].廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，16(4)：33-34.

[6] 孟兆慧，劉照娟.黃芪代茶飲配合補(bǔ)液治療羊水過(guò)少13例[J].吉林中醫(yī)藥，2013，33(8)：813-814.

[7] 王莉.麥冬代茶飲對(duì)放療后口干癥的效果觀察[J].天津護(hù)理，2013，21(3)：211.

(本文編輯： 董歷華)

The comparison of two preparation methods of chronic pharyngitis agreement prescription herbal tea

ZHANGJing，ZHANGJin-jing，SUShuang，etal.

WangjingHospitalofChinaAcademyofChineseMedicalScience，Beijing100102，China

WANGJing-hong，E-mail：wangjinghong2002@126.com

Objective To detect the content difference of the main indexes in two different preparation methods of chronic pharyngitis on prescription herbal tea, to explore the proper preparation conditions and guide the rational use of drugs in patients. Methods The single factor investigation method was used to compare the water-soluble extractives of two kinds of the herbal tea by soak and decoction. The ultraviolet spectrophotometry was used to compare the absorbance of two kinds of the herbal tea. The high performance liquid chromatography was used to measure the content change of chlorogenic acid and galuteolin in the two kinds of the herbal tea. The microbial limit tests were used to measure the bacteria, mycete, saccharomycete, and escherichia coli (e. coli) in the two kinds of the herbal tea. Results For the herbal tea by soak, the extract rate was 21.46%, the ultraviolet absorbance under 326 nm was 1.052, the total content of chlorogenic acid and galuteolin was 141.11 mg, the bacteria was 90 cfu/mL, the mycete was less than 10 cfu/mL, and e. coli was not detected. For the herbal tea by decoction, the extract rate was 28.38%, the ultraviolet absorbance under 326 nm was 1.162, the total content of chlorogenic acid and galuteolin was 131.21 mg, the bacteria was 70 cfu/mL, the mycete was less than 10 cfu/mL, and e. coli was not detected.Conclusion The herbal tea by decoction has the advantages on the extract rate and absorbance, and the advantages of the herbal tea by soak is dissolution rate of main ingredients. They both are accord with standard of microbial limit examination.

Herbal tea； Soak； Decoction； Content determination； Chlorogenic acid； Galuteolin

100102 北京，中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院藥學(xué)部

張婧(1984- )，女，本科，主管藥師。研究方向：臨床藥學(xué)。E-mail：zhangjing10132003@126.com

王景紅(1965- )，女，本科，主任藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。E-mail：wangjinghong2002@126.com

R284

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2016.12.005

2016-10-13)