中藥蘇葉與蘇梗中黃酮含量測定

鐘優(yōu)艷，陳連國，王 瓊

(浙江省溫州市人民醫(yī)院，浙江溫州 325000)

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中藥蘇葉與蘇梗中黃酮含量測定

鐘優(yōu)艷，陳連國*，王 瓊

(浙江省溫州市人民醫(yī)院，浙江溫州 325000)

[目的]建立蘇葉和蘇梗中黃酮含量測定的紫外分光光度法。[方法]以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法在510 nm處分別測定蘇葉和蘇梗中的總黃酮含量。[結(jié)果]蘇葉、蘇梗中總黃酮的含量分別為57.174 3、3.850 2 mg/g，總黃酮提取率分別為5.72%、0.39%，蘇葉中總黃酮含量遠(yuǎn)高于蘇梗中總黃酮含量。[結(jié)論]對于研究紫蘇中黃酮類化合物，蘇葉更具有研究價值。

蘇葉；蘇梗；黃酮含量；紫外分光光度法

紫蘇為我國傳統(tǒng)中藥，全株均有食用和藥用價值，主要以葉、梗、果實入藥。其中蘇葉辛溫發(fā)散，解表散寒，行氣和胃，用于風(fēng)寒感冒、咳嗽嘔惡、妊娠嘔吐、魚蟹中毒等。蘇梗辛溫，理氣寬中，止痛、安胎，用于胸膈痞悶、胃脘疼痛、噯氣嘔吐、胎動不安等[1]。紫蘇可開發(fā)出多種保健食品，在醫(yī)藥、食品工業(yè)上具有廣泛的用途，前景十分廣闊[2-3]。紫蘇中黃酮含量較高，是紫蘇抗氧化、抗炎、抗過敏和抑菌的主要活性成分[4]。目前，國內(nèi)外對蘇葉的研究主要集中在紫蘇色素、紫蘇精油等方面[5-6]，而對蘇葉黃酮的研究較少。筆者以蘇葉和蘇梗為原料，采用水浴加熱回流的方法分別提取兩者的總黃酮，并將蘆丁作為對照品，以未加任何顯色試劑的供試品溶液作參比，采用紫外分光光度法在510 nm處測定其吸光度[7]，最后計算蘇葉和蘇梗提取液中總黃酮的含量，并進行比較分析，以期為紫蘇的進一步開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 紫蘇采自浙江溫州，采收后干燥備用；蘆丁(化學(xué)對照品)來源于中國藥品生物制品檢定所；無水乙醇(分析純)購自上海聯(lián)試化工試劑有限公司；亞硝酸氫鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉均為分析純；電子天平AL204(梅特勒—托利多儀器有限公司，上海)；紫外可見光譜儀HP8453(上海捷辰儀器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。精密稱取0.053 g蘆丁，置于50 mL容量瓶中，加70%乙醇振蕩溶解并定容，搖勻，得到濃度為1.06 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

1.2.2 供試品溶液的制備。將蘇葉剪碎，稱取5.0 g，藥材和50%乙醇以1∶30的比例加入到250 mL圓底燒瓶中，室溫浸泡60 min后，于80 ℃加熱回流提取60 min，抽濾，濾去濾渣，至濾液無沉淀物；再加熱回流60 min，抽濾，濾去濾渣，至濾液無沉淀物，得紫蘇葉供試品。紫蘇梗供試品的制備過程與紫蘇葉的相同。

1.2.3 參比溶液的制備。

1.2.3.1 參比溶液a的制備。精密移取蘇葉、蘇梗供試品溶液各1 mL至25 mL容量瓶，加水至刻度，搖勻，放置。

1.2.3.2 參比溶液b的制備。精密移取1.2 mL蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液各6份，各加0.106 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2 mL，分別稀釋至50 mL。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。用移液管準(zhǔn)確量取“1.2.1”蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照液0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00、2.25 mL，分別置于25 mL容量瓶中，各加水6 mL、5% NaNO2溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，加10% Al(NO3)3溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，加5% NaOH試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。然后以溶劑及顯色試劑為參比溶液，在510 nm處測吸光度A，以吸光度A為縱坐標(biāo)、蘆丁溶液濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5 方法學(xué)考察。

1.2.5.1 精密度試驗。精密移取1.06 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，加入至25 mL容量瓶中，加6 mL水、5% NaNO2溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，加10% Al(NO3)3溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，加5% NaOH試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。然后以溶劑及顯色試劑為參比溶液，用紫外分光光度法在510 nm處測吸光度A，重復(fù)測樣6次，并計算RSD值。

1.2.5.2 穩(wěn)定性試驗。精密移取蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液各1 mL，按“1.2.5.1”操作。并于15、30、45、60、75、90 min測定6次，得吸光度A，計算RSD值。

1.2.5.3 重現(xiàn)性試驗。精密移取蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液各1 mL，按“1.2.5.1”操作。以“1.2.3.1”制備的參比溶液作對照，將配備好的溶液于紫外分光光度計上測定6次，得吸光度A，分別計算蘇葉和蘇梗中的黃酮含量及其RSD。

1.2.5.4 加樣回收率試驗。將1.06 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋10倍，精密移取1.2 mL蘇葉供試品溶液6份，各加0.106 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2 mL，分別加入至50 mL容量瓶中，加6 mL水、5% NaNO2溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，加10% Al(NO3)3溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，加5% NaOH試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。以“1.2.3.2”制備的參比溶液b作對照，于510 nm處測定吸光度A，計算回收率。蘇梗供試品溶液的處理同上。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以吸光度A為縱坐標(biāo)、蘆丁溶液濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=9.407 2X+0.009 1(R2=0.999 5)，表明蘆丁濃度在10.6～95.4 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈較好的線性關(guān)系。

2.2 精密度試驗 按照“1.2.5.1”操作，測得吸光度的平均值為0.404 2，RSD=0.4%，表明儀器精密度較好。

2.3 穩(wěn)定性試驗 按照“1.2.5.2”操作，計算得蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液的吸光度的RSD分別為1.5%、2.8%，表明蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液在室溫下90 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重復(fù)性試驗 平行樣6份，定量測得5 g蘇葉、5 g蘇梗中提取的總黃酮平均含量分別為285.871 5、19.251 2 mg，則蘇葉、蘇梗中總黃酮含量分別為57.174 3、3.850 2 mg/g，總黃酮提取率分別為5.72%、0.39%，蘇葉、蘇梗中總黃酮提取率的RSD分別為1.2%、2.9%，表明該提取方法的重現(xiàn)性良好。

2.5 加樣回收率試驗 由表1～2可知，蘇葉、蘇梗中總黃酮的平均回收率分別為100.5%、101.0%，RSD分別為0.9%、1.4%，可見該方法的回收率較為理想，方法可行。

表1 蘇葉中總黃酮加樣回收率測定結(jié)果

表2 蘇梗中總黃酮加樣回收率測定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

試驗結(jié)果顯示，蘇葉、蘇梗中總黃酮的含量分別為57.174 3、3.850 2 mg/g，總黃酮提取率分別為5.72%、0.39%，可見蘇葉中總黃酮提取率遠(yuǎn)高于蘇梗中總黃酮提取率。因此對于研究紫蘇中黃酮類化合物，蘇葉比蘇梗具有更大的開發(fā)價值和應(yīng)用前景。

該試驗以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定紫蘇葉和紫蘇梗中總黃酮含量，設(shè)備要求不高，操作簡便易行；以未加所有顯色試劑的供試品溶液作為參比溶液，消除了供試液本身的干擾，使吸光度測定值穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。因此，該方法可用于紫蘇中總黃酮的含量測定。

[1] 崔國靜，玉亭，賀薔．紫蘇的用藥部位及性能特點[J]．首都醫(yī)藥，2013(15)：50.

[2] 張洪，黃建韶，趙東海．紫蘇營養(yǎng)成分的研究[J]．食品與機械，2006，22(2)：41-43.

[3] 楊曉靜，王立眾，李和．紫蘇子油不皂化物的分離與分析[J]．中國油料作物學(xué)報，2006，28(2)：207-209.

[4] 劉娟，雷焱霖，唐友紅，等．紫蘇的化學(xué)成分與生物活性研究進展[J]．時珍國醫(yī)國藥，2010，21(7)：1768-1769.

[5] 劉建輝，陳蘭貴．紫蘇油中主要化學(xué)成分的分離和鑒定[J]．香料香精化妝品，1998(1)：19-20.

[6] YOSHIDA K，KAMEDA K，KONDO T．Diglucuronoflavones from purple leaves ofPerillaocimoides[J]．Phytochemistry，1993，33(4)：917-919.

[7] 鄭杭生，李計萍，韓煒，等．紫外-可見分光光度法測定總黃酮含量的方法學(xué)考察要點[J]．中成藥，2008，30(9)：1364-1365.

Determination on Flavone Content in Traditional Chinese Medicine Folium Perillae and Caulis Perllae

ZHONG You-yan, CHEN Lian-guo*, WANG Qiong

(Wenzhou Municipal People’s Hospital, Wenzhou, Zhejiang 325000)

[Objective] The aim was to establish ultraviolet spectrophotometry for determining flavone content in folium perillae and caulis perllae. [Method] With rutin as control, flavone content in folium perillae and caulis perllae was determined at 510 nm by ultraviolet spectrophotometry. [Result] Total flavone in folium perillae and caulis perllae were 57.174 3, 3.850 2 mg/g, extraction rate were 5.72%, 0.39%, total flavone content in folium perillae was higher than that in caulis perllae. [Conclusion] Folium perillae has more research value in research about flavonoid.

Folium perillae; Caulis perllae; Flavone content; Ultraviolet spectrophotometry

鐘優(yōu)艷(1986-)，女，浙江溫州人，初級藥師，從事藥用植物學(xué)研究。*通訊作者，初級藥師，碩士，從事中藥藥理研究。

2016-08-31

S 567.21+9

A

0517-6611(2016)31-0112-02