鼻咽癌組織中BLU／ZMYND10α蛋白的表達(dá)變化及意義

韋祝新，張?jiān)龇澹赫潲?，陳霜，羅殿中

（1廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021；2廣西醫(yī)科大學(xué)）

鼻咽癌組織中BLU／ZMYND10α蛋白的表達(dá)變化及意義

韋祝新1，張?jiān)龇?，梁珍麗2，陳霜1，羅殿中1

（1廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021；2廣西醫(yī)科大學(xué)）

目的 探討B(tài)LU／ZMYND10α蛋白在人鼻咽癌組織中的表達(dá)及其與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法 選取鼻咽癌蠟塊標(biāo)本90例（其中24例伴癌旁正常鼻咽上皮）和正常鼻咽黏膜組織蠟塊標(biāo)本18例，采用組織微陣列技術(shù)結(jié)合免疫組化法檢測(cè)標(biāo)本中BLU／ZMYDD10α蛋白表達(dá)，分析BLU／ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與鼻咽癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 鼻咽癌組織中BLU／ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁正常鼻咽上皮組織、正常鼻咽上皮組織（P均＜0.05），鼻咽癌組織BLU／ZMYDD10α蛋白在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率低于正常鼻咽上皮組織和癌旁正常鼻咽上皮組織（P均＜0.05）。鼻咽癌組織中BLU／ZMYND10α蛋白表達(dá)與患者性別、腫瘤組織學(xué)分類(lèi)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期無(wú)關(guān)（P均＞0.05）。結(jié)論 BLU／ZMYND10α蛋白在鼻咽癌組織中呈低表達(dá)，其低表達(dá)可能促進(jìn)鼻咽癌的發(fā)生。

鼻咽腫瘤；組織微陣列；BLU／ZMYND10α蛋白；免疫組織化學(xué)

鼻咽癌（NPC）是我國(guó)南方和東南亞地區(qū)的高發(fā)惡性腫瘤，其發(fā)病機(jī)制仍未完全清楚。NPC的發(fā)生、發(fā)展與多個(gè)癌基因和抑癌基因的激活和失活密切相關(guān)［1］。最近文獻(xiàn)報(bào)道，BLU／ZMYDD10α基因與某些惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)［2，3］，然而B(niǎo)LU／ZMYDD10α基因在NPC組織中的表達(dá)尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用組織芯片結(jié)合免疫組化技術(shù)對(duì)正常鼻咽上皮組織、癌旁和NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白水平進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)分析NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白的表達(dá)與患者臨床病理特征之間的關(guān)系，以探討B(tài)LU／ZMYDD10α在NPC發(fā)生發(fā)展中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料 選擇2003年2月～2008年12月廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科保存的NPC蠟塊標(biāo)本90例（其中24例伴癌旁正常鼻咽上皮），患者男69例、女21例，年齡13～75（43.12±3.21）歲；患者均未行放化療。WHO的NPC組織學(xué)分類(lèi)［4］：分化型83例，未分化型7例。90例NPC患者中，有69例經(jīng)臨床檢查、頭頸部MRI和（或）CT、淋巴結(jié)活檢病理診斷證實(shí)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例。TNM分期采用2003年修改的國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）、美國(guó)腫瘤聯(lián)合會(huì)（AJCC）聯(lián)合制定修改的標(biāo)準(zhǔn)，90例NPC患者中，有58例有完整臨床資料，TNM分期如下：Ⅰ期2例，Ⅱ期18例，Ⅲ期20例，Ⅳ期18例。同時(shí)選取正常鼻咽黏膜組織蠟塊標(biāo)本18例，男10例、女8例，年齡16～73（41.89 ±3.73）歲）；其性別、年齡與NPC患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2不同鼻咽上皮組織中BLU／ZMYDD10α蛋白檢測(cè) 組織微陣列采用美國(guó)Beecher公司的組織陣列儀制作。兔抗人多克隆抗體BLU／ZMYDD10α蛋白抗體購(gòu)自Santa Cruz公司，抗兔免疫組織化學(xué)超敏SP試劑盒、正常非免疫羊血清和DAB顯色試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。組織蠟塊標(biāo)本采用全自動(dòng)切片機(jī)連續(xù)切片，切片厚4 μm。采用免疫組織化學(xué)SP染色法，首先將標(biāo)本芯片切片脫蠟，水化后置于3%H2O2中室溫封閉30 min后，滴加1∶500濃度的兔抗人多克隆抗體BLU／ZMYDD10α置于密封濕盒中4℃過(guò)夜；取出，滴入即用型生物素標(biāo)記二抗，以標(biāo)記過(guò)氧化物酶的鏈霉菌抗生物素蛋白，DAB顯色后，蘇木素復(fù)染，采用中性樹(shù)膠封片。陽(yáng)性對(duì)照為確診的肺腺癌切片，陰性對(duì)照以PBS代替一抗。采用盲法由2位資深病理醫(yī)師顯微鏡下觀察，高倍鏡下（×400）計(jì)數(shù)1 000個(gè)（要求避開(kāi)壞死區(qū)及其周邊部位）細(xì)胞，視野中棕黃色細(xì)小顆粒為細(xì)胞陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞20%為BLU／ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)［5］。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1不同鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白表達(dá) 正常鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為94.4%（17／18），癌旁正常鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為91.7%（22／24），NPC組織BLU／ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為64.4%（58／90）。NPC組織BLU／ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁正常鼻咽上皮、正常鼻咽上皮組織（P均＜0.05）。

2.2不同鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白表達(dá)定位 正常鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白單純?cè)诩?xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為5.6%（1／18），在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為94.4%（17／18）；癌旁正常鼻咽上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白單純?cè)诩?xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為12.5%（3／24），在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為87.5%（21／24）；鼻咽癌組織BLU／ZMYDD10α蛋白單純?cè)诩?xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為48.9%（44／90），在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為51.1%（46／90）。正常鼻咽上皮和癌旁正常上皮組織BLU／ZMYDD10α蛋白在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率高于NPC組織（P均＜0.05）。

2.3不同臨床病理特征NPC患者的BLU／ZMYDD10α蛋白表達(dá) 見(jiàn)表1。

表1　不同臨床病理特征NPC患者的BLU／ZMYDD10α蛋白表達(dá)比較（例）

3　討論

研究發(fā)現(xiàn)，BLU／ZMYDD10α基因定位于細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核［6，7］，主要編碼糖酵解限速酶的蛋白，能夠催化磷酸甘油轉(zhuǎn)化為磷酸烯醇式丙酮酸；同時(shí)編碼的c-myc啟動(dòng)子結(jié)合蛋白（MBP-1），在細(xì)胞核內(nèi)無(wú)酶活性，具有負(fù)向調(diào)控c-myc表達(dá)功能［8，9］。研究發(fā)現(xiàn)，原癌基因c-myc參與調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，這可能是MBP-1抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的主要原因［10］。BLU／ZMYDD10α基因位于人染色體1p35～p36，當(dāng)此段基因缺失時(shí)，成神經(jīng)細(xì)胞瘤、惡性黑色素瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、乳腺癌和肝癌等惡性腫瘤均可發(fā)生［11］。文獻(xiàn)報(bào)道，轉(zhuǎn)染BLU／ZMYDD10α cDNA，以染色體1p缺失的成神經(jīng)細(xì)胞瘤株誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡可減少低存活的癌細(xì)胞數(shù)目，因此成神經(jīng)細(xì)胞瘤特征為染色體1p缺失［12］。缺失1p的成神經(jīng)瘤細(xì)胞在體外被導(dǎo)入轉(zhuǎn)錄的BLU／ZMYDD10α mRNA后，生長(zhǎng)受到抑制，類(lèi)似于導(dǎo)入293細(xì)胞系，提示MBP-1具有普遍的抑制腫瘤活性。研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌細(xì)胞被導(dǎo)入腺病毒介導(dǎo)外源的MBP-1后，癌細(xì)胞可發(fā)生凋亡［9］。BLU／ZMYDD10α在非小細(xì)胞肺癌中普遍表達(dá)下調(diào)，且表達(dá)下調(diào)程度越嚴(yán)重預(yù)后越差［13］。

本研究發(fā)現(xiàn)在正常鼻咽上皮和癌旁正常鼻咽上皮組織中BLU／ZMYDD10α蛋白正常表達(dá)，而NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白表達(dá)下調(diào)，說(shuō)明其表達(dá)下調(diào)與NPC的發(fā)生可能有關(guān)。但是，BLU／ZMYDD10α的表達(dá)水平與患者臨床特征如性別、組織學(xué)分類(lèi)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期等無(wú)關(guān)。有報(bào)道BLU／ZMYDD10α蛋白在非小細(xì)胞肺癌［8］和與HBV相關(guān)的肝腫瘤［14］中高表達(dá)，且腫瘤惡性程度與表達(dá)水平呈正相關(guān)。此類(lèi)瘤細(xì)胞較正常細(xì)胞代謝率更高，而B(niǎo)LU／ZMYDD10α蛋白具有糖分解酶活性，當(dāng)細(xì)胞代謝升高時(shí)，則呈現(xiàn)BLU／ZMYDD10α的高表達(dá)狀態(tài)。

研究顯示，BLU／ZMYDD10α蛋白位于細(xì)胞內(nèi)不同部位，其功能活性也有不同。定位于細(xì)胞質(zhì)時(shí)，具有糖酵解限速酶的酶活性；而在細(xì)胞核時(shí)，具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。本文發(fā)現(xiàn)，NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)的陽(yáng)性表達(dá)低于正常鼻咽黏膜上皮、癌旁正常鼻咽上皮組織。在正常鼻咽上皮、癌旁正常鼻咽上皮組織，大量BLU／ZMYDD10α蛋白為細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，而NPC組織中BLU／ZMYDD10α蛋白單純?cè)诩?xì)胞質(zhì)表達(dá)量較高，細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)BLU／ZMYDD10α蛋白表達(dá)相對(duì)降低，導(dǎo)致在NPC上皮組織細(xì)胞核中抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的MBP-1減少或缺失，c-myc活性增強(qiáng)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。

綜上所述，鼻咽癌細(xì)胞中BLU／ZMYDD10α蛋白細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)表達(dá)下調(diào)，其表達(dá)變化與鼻咽癌發(fā)生相關(guān)，因此其為臨床研究鼻咽癌發(fā)病機(jī)制提供了新的方向，同時(shí)也為鼻咽癌的早期診斷提供了新的分子靶標(biāo)。

［1］Gao Y，Zhu SY，Dai Y，et al.Diagnostic accuracy of sonography versus magnetic resonance imaging for primary nasopharyngeal carcinoma［J］.J Ultrasound Med，2014，33（5）：827-834.

［2］Pan D，Zhu SY，Xu YB，et al.Sonographic findings of nasopharyngeal carcinoma and its involvement in the parapharyngeal space［J］.J Ultrasound Med，2013，32（6）：1041-1047.

［3］Fung WW，Wu VW，Teo PM，et al.Developing an adaptive radiation therapy strategy for nasopharyngeal carcinoma［J］.J Radiat Res，2014，55（2）：293-304.

［4］Li Z，Chen Y，Li Y，et al.Raman microspectroscopy as a diagnostic tool to study single living nasopharyngeal carcinoma cell lines［J］.Biochem Cell Biol，2013，91（3）：182-186.

［5］Feng G，Wang X，You C，et al.Antiproliferative potential of Artemisia capillaris polysaccharide against human nasopharyngeal carcinoma cells［J］.Carbohydr Polym，2013，92（2）：1040-1045.

［6］Wang RH，Zhang SX，Zhou LH，et al.Volume and dosimetric variations during two-phase adaptive intensity-modulated radiotherapy for locally advanced nasopharyngeal carcinoma［J］.Biomed Mater Eng，2014，24（1）：1217-1225.

［7］Huang W，Chan KL，Zhou J.Region-based nasopharyngeal carcinoma lesion segmentation from MRI using clustering-and classification-based methods with learning［J］.J Digit Imaging，2013，26（3）：472-482.

［8］Ye Y，Chen Y，Su Y，et al.Raman spectral analysis of nasopharyngeal carcinoma cell line CNE2 after microwave radiation［J］.Biochem Cell Biol，2013，91（2）：67-71.

［9］Chang MC，Chen JH，Liang JA，et al.Accuracy of whole-body FDG-PET and FDG-PET／CT in M staging of nasopharyngeal carcinoma：a systematic review and meta-analysis［J］.Eur J Radiol，2013，82（2）：366-373.

［10］Gao J，Tao YL，Li G，et al.Involvement of difference in decrease of hemoglobin level in poor prognosis of Stage I and II nasopharyngeal carcinoma：implication in outcome of radiotherapy［J］.Int J Radiat Oncol Biol Phys，2012，82（4）：1471-1478.

［11］Kumdee O，Bhongmakapat T，Ritthipravat P，et al.Prediction of nasopharyngeal carcinoma recurrence by neuro-fuzzy techniques［J］.Fuzzy Set Syst，2012，203（2）：95-111.

［12］Zeng J，Dai P，Ren L，et al.Apoptosis-induced anti-tumor effect of Curcuma kwangsiensis polysaccharides against human nasopharyngeal carcinoma cells［J］.Carbohydr Polym，2012，89（4）：1067-1072.

［13］Liu WS，Wu MF，Tseng HC，et al.The role of pretreatment FDGPET in nasopharyngeal carcinoma treated with intensity-modulated radiotherapy［J］.Int J Radiat Oncol Biol Phys，2012，82（2）：561-566.

［14］Liu XW，Xie CM，Mo YX，et al.Magnetic resonance imaging features ofnasopharyngealcarcinomaandnasopharyngealnon-Hodgkin′s lymphoma：are there differences［J］.Eur J Radiol，2012，81（6）：1146-1154.

10.3969／j.issn.1002-266X.2016.21.015

R739.6

B

1002-266X（2016）21-0040-03

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳科研課題（z2014046）。

張?jiān)龇澹‥-mail：zfzhangphd＠163.com）

（2015-12-15）