三種侵染柑橘木虱的蠟蚧菌屬真菌的生物學特性

鹿連明，杜丹超，胡秀榮，蒲占湑，黃振東，陳國慶

(浙江省農業(yè)科學院 浙江柑桔研究所，浙江 黃巖 318020)

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三種侵染柑橘木虱的蠟蚧菌屬真菌的生物學特性

鹿連明，杜丹超，胡秀榮，蒲占湑，黃振東，陳國慶*

(浙江省農業(yè)科學院 浙江柑桔研究所，浙江 黃巖 318020)

菌株ZJLA08、ZJLP09和ZJLSP07為從柑橘木虱蟲體中分離純化的蠟蚧菌屬真菌，經(jīng)鑒定分別為漸狹蠟蚧菌Lecanicilliumattenuatum、刀孢蠟蚧菌Lecanicilliumpsalliotae及1個新種Lecanicilliumsp.，均對柑橘木虱具有強致病性。為明確這3個菌株的生物學特性，測定了溫度、光照和紫外照射等條件對菌株生長、產孢和孢子萌發(fā)的影響。結果表明：25～30 ℃是菌株生長、產孢和孢子萌發(fā)的適宜溫度；光照對菌株生長和孢子萌發(fā)影響不顯著，但適當?shù)墓庹沼欣诰戤a孢，如在連續(xù)光照條件下培養(yǎng)7 d后，菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的產孢量依次為6.72×108、6.13×108、10.38×108個·mL-1；紫外照射對3個菌株的生長、產孢和孢子萌發(fā)均產生顯著的抑制作用，如紫外照射60 min對菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的產孢抑制率分別達38.32%、51.17%和32.41%，對孢子萌發(fā)的抑制率分別為81.43%、87.35%和78.14%；濕度高有利于菌株孢子的萌發(fā)，如在相對濕度為62%時，菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的孢子萌發(fā)率相比飽和濕度條件下分別下降了84.31%、86.21%和77.47%。在測試的3個菌株中，菌株ZJLP09的菌絲生長速率、產孢量、孢子萌發(fā)率等均顯著高于其他2個菌株，且其對高溫、低濕和紫外照射等具有更強的抗逆性。

柑橘木虱；蠟蚧菌；紫外照射；孢子萌發(fā)

柑橘黃龍病(Citrus Huanglongbing，CHLB)是當前柑橘生產上的一種毀滅性病害，廣泛分布在亞洲、非洲和美洲等多個國家和地區(qū)[1]。盡管從發(fā)現(xiàn)該病害至今已有百余年的歷史，但目前尚缺乏有效的防治藥劑和理想的抗病品種，因此，主要采取以治蟲防病為主的綜合防控措施來控制該病害的發(fā)生和流行。該病害的病原物為韌皮部桿菌屬(CandidatusLiberibacter)細菌[2]，在自然條件下主要通過柑橘木虱(Diaphorinacitri)傳播擴散。柑橘木虱除作為主要自然蟲媒傳播黃龍病外，還是柑橘、九里香等蕓香科植物新梢期的主要害蟲，可直接取食為害新梢嫩葉及產生分泌物誘發(fā)煤煙病等。因此，加強對柑橘木虱的防治，無論對于控制柑橘黃龍病的流行還是降低蟲體本身對柑橘的危害都具有重要的意義。

目前，對于柑橘木虱的防治多采用化學防治措施，然而化學農藥的頻繁使用造成了農藥殘留、環(huán)境污染、生物多樣性破壞和柑橘木虱產生抗藥性等諸多問題。因此，利用生物農藥防治柑橘木虱也逐漸引起人們的重視。對柑橘木虱具有致病效果的真菌有檬形被毛孢(Hirsutellacitriformis)、宛氏擬青霉(Paecilomycesvarioti)、玫煙色擬青霉(Paecilomycesfumosoroseus)等[3-6]。但目前關于利用生防菌制劑在農業(yè)生產中成功防治柑橘木虱的實例尚未見報道。因此，對柑橘木虱蟲生真菌進一步的分離篩選和生防潛能的深入研究，對于促進將來柑橘木虱生物防治的順利開展具有重要的意義?；诖?，本研究對已分離的3種侵染柑橘木虱的蠟蚧菌屬真菌的生物學特性進行測定，明確溫度、光照、紫外照射等條件對菌株生長、產孢和孢子萌發(fā)的影響，為今后篩選和開發(fā)用于防治柑橘木虱的優(yōu)良菌株提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 真菌菌株

3種侵染柑橘木虱的真菌為本實驗室分離自浙江省臺州市黃巖區(qū)橘園內采集的柑橘木虱蟲尸，菌株純化培養(yǎng)后經(jīng)過形態(tài)學和分子生物學方法鑒定該3種真菌分別為蠟蚧菌屬的漸狹蠟蚧菌(Lecanicilliumattenuatum)、刀孢蠟蚧菌(Lecanicilliumpsalliotae)及1個新種Lecanicilliumsp.[7]，分別將其編號為ZJLA08、ZJLP09和ZJLSP07，菌株于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)后置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 菌株生長的影響因素測定

用無菌打孔器在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d左右的各菌株菌落周圍打取5 mm大小的菌餅，然后將菌餅分別置于數(shù)個新鮮制備的PDA平板(直徑為9 cm)中央。分別于5、10、15、20、25、30、35和40 ℃微生物培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，測定溫度對菌株生長的影響；于25 ℃培養(yǎng)箱中，分別在0、12和24 h·d-1光照條件下培養(yǎng)，測定光照對菌株生長的影響；取各菌株5 mm大小的菌餅，于超凈工作臺上置于距紫外燈(30 W，120 lx)20 cm處，分別照射15、30和60 min后，將菌餅轉移到新鮮的PDA平板上，然后置于25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，以未經(jīng)紫外照射處理的菌株為對照，測定紫外照射對菌株生長的影響。以上每個處理重復3次。連續(xù)培養(yǎng)14 d，每24 h觀察菌落生長情況并采用十字交叉法記錄菌落直徑。

1.3 菌株產孢量的影響因素測定

取新鮮培養(yǎng)的濃度為1.0×108個·mL-1的各菌株種子培養(yǎng)液0.5 mL均勻涂布于PDA平板，分別置于10、15、20、25、30、35 ℃培養(yǎng)箱中恒溫暗培養(yǎng)，培養(yǎng)5、7、10和14 d；置于25 ℃培養(yǎng)箱中，分別在0、12和24 h·d-1光照條件下，培養(yǎng)7 d；分別于超凈工作臺上置于距紫外燈(30 W，120 lx)20 cm處照射15、30和60 min后，轉移至25 ℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)7 d，以未經(jīng)紫外照射處理的菌株為對照。以上每個處理均重復3次。刮取以上各處理培養(yǎng)皿中的孢子，并重懸于含0.05% Tween-80的無菌水中，適當稀釋后在血球計數(shù)板上于光學顯微鏡下記錄孢子數(shù)量并計算孢子濃度，測定溫度、光照和紫外照射對菌株產孢量的影響。

1.4 菌株孢子萌發(fā)的影響因素測定

將PDA培養(yǎng)基上各菌株的分生孢子用PDB液體培養(yǎng)基洗脫，制成分生孢子懸浮液，分別取30 μL孢子懸浮液滴加至無菌載玻片的中央，然后將玻片放于墊有濾紙的培養(yǎng)皿的U型管上，以無菌水濕潤濾紙，然后置于5、10、15、20、25、30、35和40 ℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，每隔1 h取樣觀察；置于25 ℃培養(yǎng)箱中，分別在0 h光照/6 h黑暗、3 h光照/3 h黑暗、6 h光照/0 h黑暗的光照條件下恒溫培養(yǎng)，6 h后取樣觀察；將滴加至載玻片中央的孢子懸浮液先置于距紫外燈(30 W，120 lx)20 cm處分別照射15、30和60 min后，再將其置于培養(yǎng)皿中于25 ℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，以未經(jīng)紫外照射處理的菌株為對照，培養(yǎng)6 h后取樣觀察；分別取150 μL孢子懸浮液涂布于無菌的涂有PDA薄層培養(yǎng)基的載玻片上，快速風干，將玻片放于培養(yǎng)皿中的U型管上，培養(yǎng)皿中分別添加Mg(NO3)2·6H2O、NH4NO3、NaCl、KCl、KNO3飽和鹽溶液和無菌水，獲得相對濕度分別為53%、62%、75%、85%、93%和100%恒定濕度小空間，之后將培養(yǎng)皿放入25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6 h后取樣觀察。以上每個處理均重復3次。將培養(yǎng)產物置于光學顯微鏡下計數(shù)400～600個孢子，以芽管長度超過孢子長度1/2為標準視為孢子萌發(fā)，統(tǒng)計孢子萌發(fā)個數(shù)并計算孢子萌發(fā)率，測定溫度、光照、紫外照射和濕度對孢子萌發(fā)的影響。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所得數(shù)據(jù)利用Microsoft Excel 2003進行統(tǒng)計和作圖，利用SAS 9.1軟件的鄧肯新復極差法(DMRT)進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 菌株生長的影響因素

2.1.1 溫度對菌株生長的影響

菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09在PDA培養(yǎng)基上于10～35 ℃均可生長，其中25～30 ℃為其適宜生長溫度，5和40 ℃條件下3個菌株均不生長。在相同溫度條件下，菌株ZJLP09的生長速率遠高于菌株ZJLSP07和ZJLA08(圖1)。其中，25 ℃培養(yǎng)14 d，菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的菌落直徑大小分別為48.58、49.16和60.77 mm。除在35 ℃下菌株ZJLSP07的生長速率略高于菌株ZJLA08外，其他各溫度下均低于ZJLA08。

2.1.2 光照對菌株生長的影響

在0、12和24 h·d-1光照條件下，菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09均生長良好，同一菌株在不同光照條件下菌落生長速率無顯著差異。在相同光照條件下，各菌株生長速率大小為ZJLP09>ZJLA08>ZJLSP07(表1)。

2.1.3 紫外照射對菌株生長的影響

紫外照射對菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09均有不同程度的抑制作用，紫外照射時間越長，對菌落生長的抑制強度越大。紫外照射15 min，菌株ZJLA08和ZJLSP07的菌落生長即可受到較明顯的抑制，而對菌株ZJLP09則無明顯的抑制作用。菌株ZJLP09培養(yǎng)的前5 d，紫外照射60 min處理組菌落直徑略低于對照組，但培養(yǎng)7 d以后，處理組菌落直徑增加速度加快，且大于對照組。菌株ZJLSP07培養(yǎng)的前7 d紫外照射60 min的菌落直徑為培養(yǎng)10 d后測量；產孢量為培養(yǎng)7 d后測量；分生孢子萌發(fā)率為培養(yǎng)6 h后測量。同行中數(shù)據(jù)后無相同大寫字母表示差異顯著(P<0.05)，同列數(shù)據(jù)后無相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

圖1 菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09在不同溫度下的生長速率Fig.1 Growth rate of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 at different temperatures

表1 不同光照條件下菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的菌株生長、產孢量和孢子萌發(fā)情況

Table 1 Growth， sporulation quantity and conidial germination of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 under different photoperiods

菌株Strain不同光照條件(h·d-1)的菌落直徑Colonydiameterunderdifferentphotoperiods(h·d-1)/mm01224不同光照條件(h·d-1)產孢量Sporulationquantityunderdifferentphotoperiods(h·d-1)/(108conidia·mL-1)01224不同光照條件(h·d-1)孢子萌發(fā)率Conidialgerminationunderdifferentphotoperiods(h·d-1)/%01224ZJLSP0734.20Ac34.50Ac34.12Ac4.32Bb6.85Ab6.72Ab63.12Ac63.73Ac62.86AcZJLA0837.23Ab36.88Ab37.15Ab3.72Bc6.28Ac6.13Ac67.85Ab68.05Ab68.27AbZJLP0946.85Aa47.05Aa47.00Aa7.70Ba10.56Aa10.38Aa99.53Aa99.80Aa99.25Aa

Colony diameter was measured after 10-day incubation， sporulation quantity was measured after 7-day incubation， and conidial germination was measured after 6-hour incubation. Data marked without the same uppercase letter in each row indicated significant differences atP<0.05. Data marked without the same lowercase letter in each column indicated significant differences atP<0.05. The same as bellow.

處理組菌落直徑低于對照組，但9 d以后，處理組菌落則大于對照組。而菌株ZJLA08在培養(yǎng)14 d內，其紫外照射60 min的處理組菌落直徑始終低于對照組(圖2)。表明3個菌株中ZJLP09的抗紫外能力較強，其次為ZJLSP07，而菌株ZJLA08的抗紫外能力最弱。

2.2 菌株產孢量的影響因素

A，未經(jīng)紫外照射的菌株ZJLSP07；B，紫外照射60 min的菌株ZJLSP07；C，未經(jīng)紫外照射的菌株ZJLA08；D，紫外照射60 min的菌株ZJLA08；E，未經(jīng)紫外照射的菌株ZJLP09；F，紫外照射60 min的菌株ZJLP09A， Strain ZJLSP07 without UV irradiation; B， Strain ZJLSP07 irradiated with UV light for 60 min; C， Strain ZJLA08 without UV irradiation; D， Strain ZJLA08 irradiated with UV light for 60 min; E， Strain ZJLP09 without UV irradiation; F， Strain ZJLP09 irradiated with UV light for 60 min圖2 紫外照射60 min后菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的生長情況Fig.2 Mycelial growth of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 after UV irradiation for 60 min

2.2.1 溫度對菌株產孢量的影響

菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09在10～35 ℃溫度條件下均可產孢，其中25 ℃為3個菌株的最佳產孢溫度，其次為30和20 ℃，10 ℃條件下各菌株的產孢量最低(圖3)。在25 ℃，菌株ZJLP09培養(yǎng)7 d其產孢量即可達7.65×108個·mL-1，而菌株ZJLSP07和ZJLA08在培養(yǎng)10 d后的產孢量仍顯著低于菌株ZJLP09，分別為5.45×108和5.12×108個·mL-1。

2.2.2 光照對菌株產孢量的影響

菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09在不同光照條件下的產孢量見表1?？梢钥闯?，3個菌株在全光照和光暗交替條件下的產孢量均顯著高于于全黑暗條件下的產孢量，說明光照對菌株產孢具有一定的促進作用。而各菌株在全光照和光暗交替條件下的產孢量無顯著差異。在相同光照條件下，各菌株產孢量大小為ZJLP09>ZJLSP07>ZJLA08。

圖3 菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09在不同溫度下培養(yǎng)7 d后的產孢量Fig.3 Sporulation quantity of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 after 7 days incubation at different temperatures

2.2.3 紫外照射對菌株產孢量的影響

紫外照射對菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的產孢量表現(xiàn)為不同程度的抑制作用，紫外照射時間越長對菌株產孢的抑制強度越大(表2)。紫外照射相同時間，對3個菌種產孢量的抑制率大小依次為ZJLA08、ZJLSP07、ZJLP09，紫外照射60 min對菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的產孢抑制率分別可達38.32%、51.17%和32.41%?？梢娋闦JLP09的抗紫外能力最強，其次為ZJLSP07，而菌株ZJLA08的抗紫外能力最弱。

2.3 菌株孢子萌發(fā)的影響因素

2.3.1 溫度對孢子萌發(fā)的影響

菌株ZJLSP07和菌株ZJLA08在10～35 ℃均可萌發(fā)，在5和40 ℃不能萌發(fā)。而菌株ZJLP09除在5 ℃不能萌發(fā)外，在10～40 ℃均可萌發(fā)(圖4)。3株菌孢子萌發(fā)最適宜的溫度為25～30 ℃。在同一溫度條件下，菌株ZJLP09的孢子萌發(fā)率遠高于菌株ZJLSP07和ZJLA08，25 ℃培養(yǎng)6 h其萌發(fā)率即可達100%，在35 ℃較高溫度條件下培養(yǎng)6 h其萌發(fā)率也可達95.25%，而此條件下菌株ZJLSP07和ZJLA08的萌發(fā)率僅為1.22%和0.85%。除在35 ℃菌株ZJLSP07的萌發(fā)率高于ZJLA08外，在10～30 ℃菌株ZJLA08的萌發(fā)率均高于ZJLSP07。

2.3.2 光照對孢子萌發(fā)的影響

在0 h光照/6 h黑暗、3 h光照/3 h黑暗、6 h光照/0 h黑暗條件下，菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的孢子萌發(fā)率無顯著差異。在相同光照條件下，各菌株孢子萌發(fā)率大小為ZJLP09>ZJLA08>ZJLSP07(表1)。

2.3.3 紫外照射對孢子萌發(fā)的影響

表2 紫外照射不同時間菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的產孢量和孢子萌發(fā)率

Table 2 Sporulation quantity and conidial germination rate of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 after ultraviolet irradiation for different times

菌株Strain產孢量Sporulationquantity/(×108個·mL-1)0min15min30min60min孢子萌發(fā)率Conidialgerminationrate/%0min15min30min60minZJLSP074.28Ab3.72Bb3.25Cb2.64Db62.85Ac45.86Bb28.37Cb11.67DbZJLA083.83Ac3.24Bc2.62Cc1.87Dc67.68Ab44.73Bb26.55Cc8.56DcZJLP097.62Aa6.85Ba6.08Ca5.15Da99.50Aa78.32Ba48.84Ca21.75Da

圖4 菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的分生孢子在不同溫度下培養(yǎng)6 h后的萌發(fā)率Fig.4 Conidial germination rate of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 after 6 h incubation at different temperatures

紫外照射對菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09分生孢子的萌發(fā)均產生顯著影響，紫外照射時間越長，各菌株分生孢子的萌發(fā)率越低(表2)。紫外照射相同時間，對3個菌種產孢量的抑制率大小為ZJLA08>ZJLSP07>ZJLP09。如紫外照射60 min對菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09分生孢子萌發(fā)的抑制率分別為81.43%、87.35%和78.14%?？梢娋闦JLP09孢子的抗紫外線能力最強，其次為ZJLSP07，而菌株ZJLA08的抗紫外線能力最弱。

2.3.4 濕度對孢子萌發(fā)的影響

濕度對菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09分生孢子的萌發(fā)均產生顯著影響。隨著濕度的降低，各菌株的分生孢子萌發(fā)率均明顯下降(表3)。在相對濕度為62%時，菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的孢子萌發(fā)率相比飽和濕度條件下分別下降了84.31%、86.21%和77.47%，其中，菌株ZJLSP07和ZJLA08的孢子萌發(fā)率不足10%，而菌株ZJLP09則具有22.38%相對較高的萌發(fā)率?？梢娋闦JLP09較菌株ZJLSP07和ZJLA08具有更強的低濕度適應能力。

表3 菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的分生孢子在不同濕度條件下培養(yǎng)6 h后的萌發(fā)率

Table 3 Conidial germination rate of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 after 6 h incubation under different humidity conditions

菌株Strain培養(yǎng)6h后的孢子萌發(fā)率Conidialgerminationrateafter6hincubation/%53%RH62%RH75%RH85%RH93%RH100%RHZJLSP073.87Fb9.78Eb23.31Db43.22Cb57.67Bc62.34AcZJLA083.35Fb9.25Eb22.56Db43.64Cb61.38Bb67.12AbZJLP0912.42Fa22.38Ea47.34Da78.85Ca93.27Ba99.35Aa

3 討論

蠟蚧菌屬真菌是從輪枝孢屬(Verticillium)真菌中分離出來的一類真菌，其寄主范圍廣泛，除可寄生蚜蟲、粉虱、蚧、薊馬、害螨等多種農業(yè)害蟲外，還可寄生線蟲及銹病病菌、白粉病菌等多種植物病原真菌[8-10]。因此，蠟蚧菌屬真菌是農業(yè)生產中一類重要的生防真菌，目前該屬的蠟蚧菌(Lecanicilliumlecanii)制劑已有市場化生產，用于防治同翅目、鱗翅目、縷翅目等多類農業(yè)害蟲。

本研究所用的真菌菌株ZJLA08、ZJLP09和ZJLSP07，為從臺州市黃巖區(qū)橘園內采集的柑橘木虱蟲尸中分離純化獲得，經(jīng)過形態(tài)學和分子生物學方法鑒定該3種真菌均為蠟蚧菌屬真菌，通過接種試驗證明其對柑橘木虱均具有強的致病性，尤其以ZJLP09致病力最強。本研究對該3種菌株的生物學特性進行測定，可為今后篩選和開發(fā)用于防治柑橘木虱的優(yōu)良菌株提供依據(jù)。通過研究得知，溫度是影響菌株生長、產孢和孢子萌發(fā)的重要因素；光照條件對菌株生長和孢子萌發(fā)影響不顯著，但適當?shù)墓庹談t有利于菌株產孢；紫外線照射對3個菌株的生長、產孢和孢子萌發(fā)均產生顯著的抑制作用；濕度大有利于菌株孢子萌發(fā)。其與本實驗室分離的另1株柑橘木虱蟲生真菌——淡紫擬青霉ZJPL08具有相似的生物學特性，如菌株的適宜生長溫度均為25 ～30 ℃，光照對菌株生長無顯著影響等[11]。因此，在制備菌株分生孢子時，應選擇各菌株的適宜溫度、培養(yǎng)基和適宜的光照進行發(fā)酵培養(yǎng)；在制備菌粉制劑時，在孢子粉中宜添加合適的濕潤劑、穩(wěn)定劑、分散劑、抗紫外劑等以保證菌制劑的質量和方便使用；在菌粉制劑田間應用時，最好選擇在適宜的溫度和相對濕度較高的天氣條件下進行。

菌株毒力、產孢量、抗逆性等是衡量菌株在生物防治上有無應用前景的重要指標。本研究分離的3個菌株中，菌株ZJLP09的菌絲生長速率、產孢量、孢子萌發(fā)率等均顯著高于其他2個菌株，且其對高溫、低濕和紫外照射等具有更高的抗逆性，其在35 ℃相對高溫條件下也較淡紫擬青霉菌株ZJPL08具有更強的孢子萌發(fā)能力[11]。因此，今后可首先考慮對菌株ZJLP09開發(fā)應用。菌株ZJLSP07作為蠟蚧菌屬的一個新種，其抗逆性和對柑橘木虱的致死率也優(yōu)于菌株ZJLA08，進一步加深對該菌株的研究，了解其對柑橘木虱的致病機理，明確其分泌的毒素類型及其在致病過程中的作用，或能為以后開發(fā)新型的生防藥劑提供新的材料。

[1] BOVé J M. Huanglongbing: a destructive， newly-emerging， entury-old disease of citrus [J].JournalofPlantPathology， 2006， 88(1): 7-37.

[2] TEIXEIRA D C， DANET J L， EVEILLARD S， et al. Citrus huanglongbing in S?o Paulo State， Brazil: PCR detection of the ‘Candidatus’ Liberibacter species associated with the disease [J].MolecularandCellularProbes， 2005， 19(3): 173-179.

[3] 陳祝安， 曹光照， 許益?zhèn)ィ?等. 柑桔害蟲病原真菌資源的考察和生測[J]. 微生物學通報， 1985， 12(5): 194-198.

CHEN Z A， CAO G Z， XU Y W， et al. Resource survey and bioassay of pathogenic fungi infecting citrus pests [J].MicrobiologyChina， 1985， 12(5): 194-198. (in Chinese)

[4] MEYER J M， HOY M A， BOUCIAS D G. Isolation and characterization of anIsariafumosoroseaisolate infecting the Asian citrus psyllid in Florida [J].JournalofInvertebratePathology， 2008， 99(1): 96-102.

[5] MEYER J M， HOY M A， BOUCIAS D G. Morphological and molecular characterization of aHirsutellaspecies infecting the Asian citrus psyllid，DiaphorinacitriKuwayama (Hemiptera: Psyllidae) in Florida [J].JournalofInvertebratePathology， 2007， 95(2): 101-109.

[6] AUBERT B.TriozaerytreaeDel Guercio andDiaphorinacitriKuwayama (Homoptera: Psylloidea)， the two vectors of citrus greening disease: biological aspects and possible control strategies [J].Fruits， 1987， 42(3): 149-162.

[7] LU L M， CHENG B P， DU D C， et al. Morphological， molecular and virulence characterization of threeLencanicilliumspecies infecting Asian citrus psyllids in Huangyan citrus groves [J].JournalofInvertebratePathology， 2015， 125: 45-55.

[8] ZARE R， GAMS W. A revision ofVerticilliumsectionProstrata. IV. The generaLecanicilliumandSimplicilliumgen. nov [J].NovaHedwigia， 2001， 73: 1-50.

[9] ZARE R， GAMS W. A revision of theVerticilliumfungicolaspecies complex and its affinity with the genusLecanicillium[J].MycologicalResearch， 2008， 112(Pt7): 811-824.

[10] GOETTEL M S， KOIKE M， KIM J J， et al. Potential ofLecanicilliumspp. for management of insects， nematodes and plant diseases [J].JournalofInvertebratePathology， 2008， 98(3): 256-261.

[11] 杜丹超， 尤明其， 胡秀榮， 等. 柑橘木虱致病真菌淡紫擬青霉ZJPL08的生物學特性研究[J]. 浙江柑橘， 2014， 31(4): 17-21.

DU D C， YOU M Q， HU X R， et al. Studies on the biological characteristic ofPaecilanyceslilacinusstrain ZJPL08 infecting Asian citrus psyllids [J].ZhejiangCitrus， 2014， 31(4): 17-21. (in Chinese)

(責任編輯 侯春曉)

Biological characteristics of threeLecanicilliumspecies infecting Asian citrus psyllids

LU Lian-ming， DU Dan-chao， HU Xiu-rong， PU Zhan-xu， HUANG Zhen-dong， CHEN Guo-qing*(CitrusResearchInstituteofZhejiangProvince，ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences，Huangyan318020，China)

Strains ZJLA08， ZJLP09 and ZJLSP07,Lecanicilliumspecies isolated fromDiaphorinacitricadavers， were identified asLecanicilliumattenuatum，Lecanicilliumpsalliotaeand a new species ofLecanicillium， and showed strong pathogenicity againstD.citri. In order to make clear the biological characteristics of these strains， effect of temperature， light and UV irradiation on mycelial growth， sporulation quantity and conidial germination were determined. The results showed that the optimum temperature for mycelial growth， sporulation quantity and conidial germination of these three strains was 25 ℃ to 30 ℃. Light did not exert significant effect on mycelial growth and conidial germination， while was beneficial to sporulation.The sporulation quantity of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 were 6.72×108， 6.13×108and 10.38×108conidia·mL-1after 7 days of incubation under continuous light. UV irradiation exhibited a dose-dependent inhibition effect on mycelial growth， sporulation quantity and conidial germination. After exposure to UV light for 60 min， the inhibition rates to sporulation quantity of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 were 38.32%， 51.17% and 32.41%， and to conidial germination were 81.43%， 87.35% and 78.14%， respectively. High humidity could facilitate conidial germination. At 62% relative humidity， the conidial germination rates of strains ZJLSP07， ZJLA08 and ZJLP09 dropped by 84.31%， 86.21% and 77.47%， compared to those at 100% relative humidity. The mycelial growth rate， sporulation quantity and conidial germination rate of strain ZJLP09 were higher than the other two under the same conditions， and had stronger tolerance to high temperature， low humidity and UV irradiation.

Asian citrus psyllid;Lecanicillium; UV irradiation; conidial germination

http://www.zjnyxb.cn

10.3969/j.issn.1004-1524.2016.10.16

2016-03-14

浙江省公益技術研究農業(yè)項目(2015C32077)

鹿連明(1979—)，男，山東安丘人，博士，副研究員，主要從事柑橘病害的研究。E-mail: minglu79@126.com

*通信作者，陳國慶，E-mail: cgq5373@163.com

S476.12

A

1004-1524(2016)10-1738-07

浙江農業(yè)學報ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2016，28(10): 1738-1744

鹿連明， 杜丹超， 胡秀榮， 等. 三種侵染柑橘木虱的蠟蚧菌屬真菌的生物學特性[J]. 浙江農業(yè)學報， 2016， 28(10): 1738-1744.