內(nèi)皮抑素不同給藥途徑聯(lián)合腹腔注射阿霉素對大鼠肝癌細(xì)胞移植瘤血管生成和腫瘤生長的抑制作用

王加良 高月娟 李海燕 趙玉梅

(牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院藥學(xué)部，黑龍江 牡丹江 157011)

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內(nèi)皮抑素不同給藥途徑聯(lián)合腹腔注射阿霉素對大鼠肝癌細(xì)胞移植瘤血管生成和腫瘤生長的抑制作用

王加良 高月娟 李海燕 趙玉梅

(牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院藥學(xué)部，黑龍江 牡丹江 157011)

目的 分析內(nèi)皮抑素不同給藥途徑聯(lián)合腹腔注射阿霉素抗血管生成和腫瘤殺傷作用。方法 在40只大鼠背部皮下接種H22鼠源性肝癌細(xì)胞，接種腫瘤直徑在1 cm左右時，隨機(jī)分為4組各10只，對照組瘤內(nèi)和腹腔注射生理鹽水，瘤內(nèi)組瘤內(nèi)注射內(nèi)皮抑素和腹腔注射阿霉素，靜脈組靜脈注射內(nèi)皮抑素和腹腔注射阿霉素，阿霉素組靜脈注射生理鹽水和腹腔注射阿霉素，3 d后測量腫瘤直徑，每15 d檢測血漿血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量及大鼠生存期等。結(jié)果 給藥后時間與分組因素效應(yīng)顯著(F=45.37，P<0.05)，不同治療大鼠腫瘤體積差異明顯，不同作用時間下腫瘤抑制作用差異明顯(P<0.05)，瘤內(nèi)組腫瘤生長顯著低于其他小組(P<0.05)，瘤內(nèi)組微血管密度(MVD)水平和VEGF顯著低于其他組(P<0.05)，靜脈組生存期顯著長于阿霉素和對照組(P<0.05)，瘤內(nèi)組與靜脈組生存期差異不明顯(P>0.05)。結(jié)論 內(nèi)皮抑素瘤內(nèi)注射聯(lián)合腹腔注射阿霉素抑制腫瘤生長效果更佳，但是對生存期影響與靜脈注射無顯著差異。

內(nèi)皮抑素；阿霉素；注射；腫瘤

大部分肝癌患者發(fā)現(xiàn)時就已經(jīng)處于中晚期，生存率超過2年患者不足50%，目前肝癌治療中大多數(shù)藥物具有很大毒副作用〔1〕，預(yù)后效果不佳，研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞及外周細(xì)胞受到刺激導(dǎo)致血管生成表型，肝癌治療開始研究分子靶向治療〔2〕，內(nèi)皮抑素是近幾年臨床研究熱點(diǎn)藥物之一，已經(jīng)成為臨床治療腫瘤有效治療藥物但是內(nèi)皮抑素靜脈注射費(fèi)用較高〔3〕，本文分析不同給藥途徑聯(lián)合腹腔注射阿霉素對肝癌大鼠抗血管生成和腫瘤殺傷作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 昆明大鼠(4～6周齡，體重18～22 g)40只，內(nèi)皮抑素購自山東先聲麥得津生物制藥，阿霉素購自深圳萬樂藥業(yè)，試驗(yàn)均在SPF級動物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 方法 肝癌H22細(xì)胞計(jì)數(shù)為1.5×107/ml，在大鼠腹腔注射0.2 ml肝癌細(xì)胞，1 w后每只大鼠背部皮下接種0.1 ml。

待大鼠腫瘤直徑約在1.0 cm，將其隨機(jī)平均分為4組，對照組瘤內(nèi)注射+腹腔注射各0.1 ml生理鹽水；瘤內(nèi)組瘤內(nèi)注射內(nèi)皮抑素，腹腔注射阿霉素；靜脈組靜脈注射內(nèi)皮抑素，腹腔注射阿霉素；阿霉素組靜脈注射生理鹽水，腹腔注射阿霉素。內(nèi)皮抑素注射標(biāo)準(zhǔn)為10 mg/mg，阿霉素為1 mg/kg，注射2 w后，抽取5只標(biāo)本檢測生化指標(biāo)，其余觀察生存期變化。

1.3 觀察指標(biāo) 測定腫瘤直徑，取均值。眼球摘除法取血，采用酶聯(lián)免疫雙夾心法測定血漿血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量，腫瘤標(biāo)本常規(guī)固定，按試劑盒說明計(jì)算腫瘤組織微血管數(shù)目。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件行t及F檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 各組腫瘤生長、抑瘤率比較 瘤內(nèi)組移植瘤生長抑制，部分腫瘤體積減少，大鼠進(jìn)食減少，未出現(xiàn)消瘦情況，靜脈組移植瘤生長緩慢，進(jìn)食減少，未見消瘦。阿霉素組移植瘤生長緩慢，反應(yīng)遲鈍，對照組移植瘤逐漸長大，毛發(fā)粗糙、消瘦。給藥后時間與分組因素效應(yīng)顯著(F=45.37，P<0.05)，不同治療組大鼠腫瘤體積比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)，不同作用時間下腫瘤抑制作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，瘤內(nèi)組腫瘤生長顯著低于其他組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，抑瘤率變化見表2。

2.2 各組VEGF、MVD變化 瘤內(nèi)組MVD水平和VEGF顯著低于其他組(P<0.05)，見表3。

表1 各組不同時間點(diǎn)腫瘤體積變化

表2 各組抑瘤率比較(%，n=10)

表3 各組MVD、血漿VEGF結(jié)果對比

與對照組比較：1)P<0.05；與靜脈組比較：2)P<0.05

2.3 生存期比較 瘤內(nèi)組和靜脈組生存期〔49(46.85～51.23)d、46(40.71～49.26)d〕顯著長于阿霉素組〔29(16.12～41.85)d〕和對照組〔18(17.15～18.88)d〕(P<0.05)，瘤內(nèi)組與靜脈組生存期差異不明顯(P>0.05)。

3 討 論

目前在腫瘤治療中，一般以最大程度殺傷腫瘤細(xì)胞為治療目的，化療藥物往往選取最大耐受劑量，毒副作用很大，很多患者不愿采用化療，內(nèi)皮抑素是分析靶向藥物，作用于內(nèi)皮細(xì)胞，毒副反應(yīng)小，但是內(nèi)皮抑素發(fā)揮相關(guān)生物學(xué)效應(yīng)本身還處于研究之中〔4,5〕，在臨床使用中往往需要反復(fù)輸入比較藥物濃度，費(fèi)用很高，研究內(nèi)皮抑素采用何種給藥方式對患者治療有重要價值。在以往研究中發(fā)現(xiàn)實(shí)體瘤在缺乏新生情況下不會超過2～3 mm，VEGF是促進(jìn)腫瘤生長的重要因子〔6〕，內(nèi)皮抑素為膠原XⅧ的C末端非膠原區(qū)NCI結(jié)構(gòu)與氨基酸，能夠抑制腫瘤生長。內(nèi)皮抑素治療惡性腫瘤給藥途徑包括肌肉注射、瘤內(nèi)注射、腹腔注射及靜脈注射等〔7〕，能夠有效抑制腫瘤原發(fā)病灶轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，本文說明采用瘤內(nèi)局部注射方式效果要顯著好于靜脈注射。內(nèi)皮抑素抑制腫瘤生長與VEGF信號傳導(dǎo)有關(guān)，采用VEGF作為觀察指標(biāo)之一，在腫瘤血管生成評價中一直采用MVD標(biāo)準(zhǔn)〔8〕，CD34作為微血管密度檢測指標(biāo)定量反映病灶內(nèi)微血管生成情況。本結(jié)果提示采用瘤內(nèi)局部注射方式能夠有效抑制VEGF分泌，減少M(fèi)VD，進(jìn)而達(dá)到間接抑制腫瘤生長效果，可能是因?yàn)閮?nèi)皮抑素為活性蛋白、半衰期短，采用瘤內(nèi)注射能夠極大地縮短藥物達(dá)到靶組織的時間，延長藥物與血管內(nèi)皮細(xì)胞作用時間，提高抑制腫瘤生長效果；局部內(nèi)皮抑素的升高能夠抑制VEGF表達(dá)，阿霉素能夠起到直接殺傷腫瘤細(xì)胞目的；內(nèi)皮抑素能夠使腫瘤血管有序化，有利于細(xì)胞毒物進(jìn)入腫瘤組織中提高治療效果。本文表明內(nèi)皮抑素聯(lián)合阿霉素化療能夠達(dá)到延長生存期的目的，但是瘤內(nèi)注射并不會延長生存期。

1 張翠翠,陳 程,金子良,等.重組人血管內(nèi)皮抑制素對小鼠移植瘤及正常組織中血管相關(guān)因子影響的比較〔J〕.中國腫瘤臨床,2012;39(14):952-6.

2 王海鵬,朱襲嘉,田小林,等.卡培他濱、奧沙利鉑聯(lián)合重組人血管內(nèi)皮抑素治療老年晚期大腸癌的療效〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2012;32(16):3542-3.

3 咼曉梅,戴曉芳,丁 潔,等.內(nèi)皮抑素對人肝癌細(xì)胞HepG2VEGF表達(dá)的影響及對血管生成的抑制作用〔J〕.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012;41(2):171-6.

4 楊芝萍,杜月光,謝永紅,等.人重組血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合放療對鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤抑制及其機(jī)制的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2012;19(4):259-62.

5 陳俊青,藍(lán) 天,韓 娜,等.貝伐單抗與重組人血管內(nèi)皮抑素對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞裸鼠移植瘤生長的影響〔J〕.中國腫瘤,2014;23(5):408-11.

6 史紅媛,田 迎,胡秋菊,等.動態(tài)增強(qiáng)磁共振評價重組人血管內(nèi)皮抑素抑制人肺癌裸鼠皮下移植瘤的血管生成〔J〕.臨床腫瘤學(xué)雜志,2012;17(1):19-23.

7 王澤新,汪森明,周 琪,等.內(nèi)皮抑素不同給藥途徑聯(lián)合阿霉素治療鼠肝移植瘤〔J〕.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010；30(8):1903-5.

8 王澤新,汪森明,胡喜鋼,等.內(nèi)皮抑素聯(lián)合阿霉素治療鼠H22肝癌移植瘤研究〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2010;26(6):954-6.

〔2015-02-19修回〕

(編輯 苑云杰)

趙玉梅(1972-)，女，碩士，副主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)、臨床藥學(xué)、藥事管理研究。

王加良(1978-)，男，碩士，主管藥師，主要從事藥學(xué)調(diào)劑工作研究。

R925

A

1005-9202(2016)19-4701-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.19.012