全自動(dòng)固相萃取—?dú)庀嗌V質(zhì)譜法檢測動(dòng)物性食品中五氯酚鈉殘留量

黃季維，梅玉琴，劉天潔，漆航

自貢市疾病預(yù)防控制中心，四川自貢643000

全自動(dòng)固相萃取—?dú)庀嗌V質(zhì)譜法檢測動(dòng)物性食品中五氯酚鈉殘留量

黃季維，梅玉琴，劉天潔，漆航

自貢市疾病預(yù)防控制中心，四川自貢643000

目的建立全自動(dòng)固相萃取—?dú)赓|(zhì)法檢測食品中五氯酚鈉的方法。方法取20份豬肉、雞肉樣品，經(jīng)乙酸乙酯—正己烷（50+50）混合液提取，氮?dú)獯蹈珊蠹? mL乙腈溶解；通過全自動(dòng)固相萃取儀以1 mL/min過SLC固相萃取柱萃取，用4 mL乙腈洗脫SLC固相萃取柱上吸附的待測物，氮?dú)獯蹈桑靡宜狒拎ぃ?0+50）衍生后，取有機(jī)相供氣相色譜質(zhì)譜測定。結(jié)果樣品在0～200 μg/L范圍線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.999，最低檢出濃度0.3 μg/kg（5 g樣品）；10 μg/L加標(biāo)樣品五氯酚鈉的回收率為108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為5.3%；100 μg/L加標(biāo)樣品五氯酚鈉的回收率為102%，RSD為3.5%；200 μg/L加標(biāo)樣品五氯酚鈉的回收率為105%，RSD為4.8%。結(jié)論該方法簡便準(zhǔn)確，適用于動(dòng)物性食品中五氯酚鈉的檢測。

五氯酚鈉；動(dòng)物食品；氣相色譜質(zhì)譜儀；固相萃取

五氯酚鈉是一種高效的抗菌劑和木材防腐劑，同時(shí)也是一種良好的殺蟲劑和除草劑，因價(jià)格低廉，曾在世界范圍內(nèi)廣泛使用；在我國，被長期用于消滅稻田內(nèi)寄生血吸蟲的釘螺［1］。五氯酚鈉化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易降解，五氯酚鈉廣泛使用易導(dǎo)致水體、環(huán)境污染并通過食物鏈進(jìn)入人體導(dǎo)致急性慢性中毒。主要因其刺激細(xì)胞氧化過程，阻抑磷酸化過程，以致氧化過程受刺激所產(chǎn)生的能量不能通過磷酸化過程轉(zhuǎn)變?yōu)槿姿嵯佘蘸土姿峒∷岬男问接枰再A存，而以熱能散發(fā)；因而對(duì)人體的呼吸系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、皮膚、肝臟和腎臟等均有毒性［2-3］。許多國家對(duì)五氯酚鈉的使用以及產(chǎn)品中的殘留量進(jìn)行了限定。它在1991年被美國聯(lián)邦列為31種最危險(xiǎn)物質(zhì)之一，美國環(huán)境保護(hù)署將其列為可疑致癌物質(zhì)，限制使用；歐盟于1992年開始限制其使用；20世紀(jì)70～90年代奧地利、印度、印尼、新西蘭、瑞典、瑞士等國也相繼將其列入禁用范圍；2002年中國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》和NY 5071-2002《無公害食品漁用藥物使用準(zhǔn)則》，明確了規(guī)定了食品動(dòng)物生產(chǎn)中禁用五氯酚鈉。目前檢測五氯酚鈉常用的方法有高效液相色譜法［4］、氣相色譜法［5］、分光光度法［6］，但面臨有機(jī)溶劑使用量大，定性、定量效果不準(zhǔn)確，測定結(jié)果較粗放等缺點(diǎn)；新建立的全自動(dòng)固相萃取—?dú)赓|(zhì)法［7-8］對(duì)五氯酚鈉進(jìn)行檢測，其精密度和準(zhǔn)確度良好。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent Technologies 5975C氣相色譜質(zhì)譜儀，LabTech全自動(dòng)固相萃取儀，乙腈（色譜純，158032），乙酸乙酯（色譜純，131659），正己烷（色譜純，123838），乙酸酐（分析純，20030823），吡啶（分析純，20150226），三氯乙酸（分析純，2014110601）SLC固相萃取柱（500 mg/ 6 mL）

1.2 方法

1.2.1 五氯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制吸取1.00 mL濃度為1 000 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（編號(hào)：24769XM）于100.00 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，再吸取1.00 mL，用純水稀釋至10.00 mL，得到100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液，4℃冰箱貯存，備用。

1.2.2 2，4-二溴酚內(nèi)標(biāo)使用液的配制稱取0.014 8 g2，4-二溴酚內(nèi)標(biāo)物，加10 mL丙酮配成1.48 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再吸取1.00 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用丙酮定容至100.00 mL，得到14.8 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液，放置4℃冰箱貯存，備用。

1.2.3 氣相色譜質(zhì)譜條件DB-5MS毛細(xì)色譜柱（30 m× 0.25 mm×0.25 μm），進(jìn)樣口溫度：230℃，接口溫度：260℃，柱溫：初溫80℃，保持2 min，以10℃/min升至250℃，290℃后運(yùn)行4 min。載氣：高純氦氣；流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣量：1 μL；電離方式：EI源，70 eK；離子源溫度230℃，進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

1.2.4 樣品準(zhǔn)備及提取用絞肉機(jī)絞碎樣品后，稱取5 g樣品于離心管中，加入30 μL，10 μg/mL 2，4-二溴酚內(nèi)標(biāo)液，20 mL 5%三氯乙酸溶液，用10 mL乙酸乙酯-正己烷混合液提取，斡旋提取2 min，然后在0℃10 000 rpm離心5 min，吸出上層有機(jī)相入具塞試管內(nèi)，在60℃水浴內(nèi)氮?dú)獯蹈珊?，? mL乙腈超聲溶解，10 000 rpm離心5 min，乙腈相待凈化。

1.2.5 樣品的凈化在全自動(dòng)固相萃取儀安裝SLC固相萃取柱（500 mg/6 mL），加2 g無水硫酸鈉于萃取柱中，用4 mL乙腈活化柱子，連接好管路，樣品自動(dòng)以1 mL/min的流速過活化好的SLC固相萃取柱，上樣完成以后再用4 mL乙腈洗脫，收集洗脫液于10 mL具塞的試管中，洗脫液60℃氮?dú)獯蹈?，殘余物待衍生?/p>

1.2.6 衍生向上述吹干的樣品中加1 mL乙酸乙酯—正己烷（1：4）衍生提取液，再加0.1 mL乙酸酐—吡啶（1：1）衍生液，密封于60℃烘箱內(nèi)衍生15 min，取出冷卻后加2 mL碳酸鉀溶液，充分混勻，靜置分層，取有機(jī)相供氣相色譜質(zhì)譜測定。

1.2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取10 μL、25 μL、50 μL、100 μL、200 μL，1.0 μg/mL五氯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別加入30 μL，10 μg/mL 2，4-二溴酚內(nèi)標(biāo)液，1.0 mL衍生提取液，0.1 mL衍生液密封，同樣品一起衍生，獲得10～200 μg/L五氯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.8 樣品的測定將上述前處理后的測定液取1 μL進(jìn)樣，以五氯酚鈉的保留時(shí)間定性，因內(nèi)標(biāo)物2，4-二溴酚的濃度固定不變，而待分析物五氯酚鈉的濃度是呈梯度的，這樣待分析物的響應(yīng)值（峰面積）與內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)值的比應(yīng)該是呈梯度的，這個(gè)比值叫做RF，利用這個(gè)比值進(jìn)行定量，而不是利用分析物的峰面積對(duì)分析物的濃度定量；將樣品峰面積響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)值之比所得的值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出五氯酚鈉的含量。

2 結(jié)果

2.1 色譜條件的確定

在該色譜條件下，五氯酚鈉衍生后的產(chǎn)物五氯苯乙酸酯以及內(nèi)標(biāo)物2，4-二溴酚在DB-5MS色譜柱上能夠有效分離，根據(jù)五氯苯乙酸酯保留時(shí)間及碎片離子進(jìn)行定性、定量分析（圖1）。

圖1 五氯苯乙酸酯及2，4二溴酚總離子流圖

2.2 檢測限和線性范圍

以3倍的基線噪音計(jì)算，樣品中最低檢出限為0.3 μg/kg（5 g樣品），五氯酚鈉的濃度在0～200 μg/L時(shí)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.999。

2.3 準(zhǔn)確度和精密度實(shí)驗(yàn)

取樣品分3組進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，其加標(biāo)樣品濃度分別為10、100、200 μg/L，同樣品操作步驟進(jìn)行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加標(biāo)樣品五氯酚鈉的回收率分別為108%、102%、105%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為5.3%、3.5%、4.8%，見表1。

表1 加標(biāo)樣品中五氯酚鈉回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.4 樣品檢測

取從市場采取的10份豬肉、10份雞肉經(jīng)過上述提取，凈化，衍生過程，氣相色譜質(zhì)譜法檢測，測定結(jié)果均低于方法的最低檢出限（0.3 μg/kg）。

3 討論

五氯酚鈉滅釘螺污染環(huán)境后，通過食物鏈或其他途徑進(jìn)入畜體殘留于食品中，被人們食用后可引起急性中毒。大劑量的五氯酚鈉進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)，可引起急性中毒死亡。小劑量的五氯酚鈉會(huì)長期污染環(huán)境，因此人們必須高度重視五氯酚鈉的毒害作用［9］，運(yùn)用目前成熟，高效，穩(wěn)定的檢測方法及時(shí)對(duì)各類容易污染的動(dòng)物性食品進(jìn)行高效的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測。新建立的全自動(dòng)固相萃取—?dú)庀嗌V質(zhì)譜法檢測動(dòng)物食品中五氯酚鈉的方法，前處理自動(dòng)化程度高，操作簡便，樣品在0～200 μg/L范圍線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.999，最低檢出濃度0.3 μg/kg（5 g樣品）；10 μg/L加標(biāo)樣品五氯酚鈉的回收率為108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為5.3%；100 μg/L加標(biāo)樣品五氯酚鈉的回收率為102%，RSD為3.5%；200 μg/L加標(biāo)樣品五氯酚鈉的回收率為105%，RSD為4.8%。結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，適用于動(dòng)物性食品中五氯酚鈉的檢測。

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Full-automatic Solid-phase Extractions and Gas Chromatography-mass Spectrometry in Detecting the Sodium Pentachlorophenate Residual Quantity in Animal Food

HUANG Ji-wei，MEI Yu-qin，LIU Tian-jie，QI Hang
Disease Control and Prevention Center，Zigong，Sichuan Province，643000 China

Objective To establish a method of full-automatic solid-phase extractions and gas chromatography-mass spectrometry in detecting the sodium pentachlorophenate residual quantity in animal food.Methods 20 pieces of pork and chicken samples were selected and extracted by the ethylacetate and normal hexane（50+50）miscible liquid，and dissolved by 2mL acetonitrile after dry under nitrogen，the full-automatic SPE apparatus was adopted for extraction through SLC solid phase extraction column at a 1mL/min rate，the adsorptive determinands on the SLC solid phase extraction column was cleared by 4mL methyl cyanide，and measured by organic phase gas chromatography mass spectrometry after dry under nitrogen and derived from acetic anhydride-pyridine（50+50）.Results The linear relationship of samples was good between 0 and 200 μg/L，and the correlation coefficient r=0.999，and the lowest detecting concentration was 0.3 μg/kg（5g samples），the recovery rate of 10 μg/L spiked sample sodium pentachlorophenate was 108%，RSD was 5.3%，and the recovery rate of 10 μg/L spiked sample sodium pentachlorophenate was 102%，RSD was 3.5%，and the the recovery rate of 10 μg/L spiked sample sodium pentachlorophenate was 105%，RSD was 4.8%.Conclusion The method is easy and accurate，which is suitable for the detection of sodium pentachlorophenate residual quantity in animal food.

Sodium pentachlorophenate；Animal food；Gas chromatography mass spectrometer；Solid-phase extraction

R19

A

1672-5654（2016）10（c）-0074-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.30.074

2016-07-19）

黃季維（1988.7-），男，四川自貢人，碩士研究生，主要從事理化檢測工作。