冠心舒通膠囊的抗血小板聚集及抗動脈收縮作用

王衛(wèi)明，邢曉雪，高慧，王玲燕，劉敏娜，樊官偉

（1.天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室，天津　300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津　300193）

冠心舒通膠囊的抗血小板聚集及抗動脈收縮作用

王衛(wèi)明1，2，邢曉雪1，2，高慧1，2，王玲燕1，2，劉敏娜1，2，樊官偉1，2

（1.天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193）

［目的］檢測冠心舒通膠囊在治療血栓栓塞性疾病中的療效。［方法］對比冠脈舒通膠囊對二磷酸腺苷（ADP）和凝血酶誘導(dǎo)的大鼠血小板最大聚集率、抑制率；對比其對去甲腎上腺素和氯化鉀（KCl）誘導(dǎo)的大鼠胸主動脈環(huán)收縮的舒張率。［結(jié)果］冠心舒通膠囊對ADP和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集有抑制作用；對去甲腎上腺素和KCl誘導(dǎo)的大鼠胸主動脈收縮有舒張作用。［結(jié)論］冠心舒通膠囊對血栓栓塞性疾病有確切療效。

冠心舒通膠囊；血小板；動脈環(huán)

目前腦部血栓栓塞性疾病包括腦梗死、腦血栓、短暫性腦缺血發(fā)作以及心臟疾病中的心絞痛、心肌梗死等，心腦血管疾病常并發(fā)，針對各種機(jī)制的用藥種類繁多，多種藥物聯(lián)合應(yīng)用導(dǎo)致了胃腸反應(yīng)、肝腎損傷，導(dǎo)致了生活不便，經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)加重。這些疾病共同的病理起因是動脈硬化，其病理機(jī)制是血管內(nèi)皮損傷收縮能力下降和血小板的激活聚集，血小板與內(nèi)皮之間的相互作用在血栓栓塞性疾病的發(fā)生中起了重要的作用［1-6］。冠心舒通膠囊是陜西咸陽步長制藥有限公司研制的治療冠心病心絞痛的中成藥，由丹參、丁香、冰片、天竺黃等組成，具有活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、行氣止痛的作用，在臨床中對急性心肌梗死及經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)（PCI）術(shù)后再狹窄有較好的療效［7-12］。而且對血脂異常、心絞痛、室性早搏等有效，主要不良反應(yīng)是輕微可逆的消化道反應(yīng)［13］。本實驗通過檢測冠心舒通膠囊對血小板的抗聚集作用和對大鼠胸主動脈的擴(kuò)張作用，為冠心舒通膠囊兼具保護(hù)內(nèi)皮和抗血小板聚集治療血栓栓塞性疾病提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1藥物與試劑冠心舒通膠囊，陜西步長制藥有限公司研制提供，批號為130803；阿司匹林腸溶片，生產(chǎn)企業(yè)Bayer Health Care Manufacturing.S.r.l，進(jìn)口分裝企業(yè)拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號BJ18283；雙嘧達(dá)莫片，天津力生制藥股份有限公司，批號為1311010；氯化鈉（NaCl），氯化鉀（KCl），磷酸二氫鉀（KH2PO4），七水合硫酸鎂（MgSO4·7H2O），碳酸二氫鈉（NaH2CO3），葡萄糖（C6H12O6），氯化鈣（CaCl2），天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；氯化鎂（MgCl2），去甲腎上腺素（NE），乙酰膽堿（ACH，Sigma公司）；純水（美國Millipore純水系統(tǒng)）；檸檬酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）：檸檬酸鈉（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）：tris-base；凝血酶（Sigma公司）；二磷酸腺苷（ADP，Sigma公司）。

1.2實驗動物SD大鼠，雄性，體質(zhì)量250～300 g（北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司）。

1.3實驗儀器Maclab AID生物記錄軟件（澳大利亞Powerlab公司），Radnoti組織器官灌流系統(tǒng)（美國Powerlab公司）；多功能酶標(biāo)儀（美國perkin Elmer公司）；低速自動平衡離心機(jī)（德國Thermo Fisher）。

1.4實驗方法將ADP誘導(dǎo)的血小板聚集分為5 mg/L雙嘧達(dá)莫片組、模型組、1.5 g/L冠心舒通膠囊組、1.25 g/L冠心舒通膠囊組、1.0 g/L冠心舒通膠囊組；將凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集分為20 g/L阿司匹林腸溶片組、模型組、1.5 g/L冠心舒通膠囊組、1.25 g/L冠心舒通膠囊組、1.0 g/L冠心舒通膠囊組、0.75 g/L冠心舒通膠囊組、0.5 g/L冠心舒通膠囊組。

1.4.1血小板聚集實驗

1.4.1.1復(fù)方枸櫞酸鈉（ACD）溶液的配置檸檬酸38 mmol/L，檸檬酸鈉75 mmol/L，葡萄糖124 mmol/L。1.4.1.2血小板緩沖溶液的配置NaCl 130 mmol/L，檸檬酸鈉10 mmol/L，碳酸氫鈉（NaHCO3）9 mmol/L，葡萄糖6 mmol/L，MgCl20.9 mmol/L，磷酸二氫鉀0.81 mmol/L，Tris-base10 mmol/L。

1.4.1.3實驗方法腹主動脈取血與ACD溶液混勻離心用緩沖溶液提取血小板，調(diào)節(jié)血小板混懸液使其A值在1.1～0.88之間，加入各濃度藥物及雙嘧達(dá)莫片混懸液或各濃度藥物及腸溶阿司匹林混懸液，模型組加入緩沖溶液，37℃孵育30 min，各組同時加入ADP或凝血酶，迅速在酶標(biāo)儀檢測450nm的A值每次間隔45 s連續(xù)檢測30 min。根據(jù)各時間點的A值計算血小板聚集率，觀察對比各藥物在30min內(nèi)聚集率的變化趨勢、比較各藥物的最大聚集率。血小板聚集率的計算公式為：血小板聚集率=起點A值-各時間點A值/起點A值×100%。通過各藥物最大聚集率與模型組比較計算藥物對聚集的抑制率，血小板抑制率的計算公式為：模型組最大聚集率-各藥物組最大聚集率/模型組最大聚集率×100%。

1.4.2動脈環(huán)舒張實驗

1.4.2.1Krebs試液的配置NaCl 118 mmol/L，氯化鉀（KCl）4.7mmol/L，硫酸鎂（MgSO4）1.2 mmol/L，KH2PO41.2 mmol/L，NaHCO325 mmol/L，CaCl21.3 mmol/L，d-glucose 10 mmol/L。

1.4.2.2實驗方法分離剪取胸主動脈，剪成3～4mm的血管環(huán)將處理好的動脈環(huán)一端固定于洗浴槽，另一端連接張力換能器，固定好后調(diào)整動脈環(huán)張力至0.5 g，置于不斷充入95%氧氣（O2）和5%二氧化碳（CO2）混合氣體的10 mL的37℃Krebs試液中持續(xù)15 min。然后換液，逐步調(diào)節(jié)動脈環(huán)張力到2.0 g，此過程不小于90 min，待穩(wěn)定后正式實驗。加入NE（終濃度10-6mol/L）刺激血管收縮8 min，然后加入ACH（終濃度為10-5mol/L）作用8 min，證明血管內(nèi)皮是否存在，換液，加入10mL的Krebs試液，平衡到2.0g（15min）。血管的舒張幅度≥80%證明內(nèi)皮完整為納入標(biāo)準(zhǔn)，血管的舒張幅度=（加入NE后動脈環(huán)張力-加入ACH后動脈環(huán)張力）/（加入NE后動脈環(huán)張力-動脈環(huán)基礎(chǔ)張力）×100%。加入NE（終濃度10-6mol/L）或高鉀母液（使其終濃度達(dá)到60 mmol/L）刺激血管收縮平穩(wěn)后觀察3 min，然后加入冠脈疏通膠囊混懸液，依次各觀察3 min與空白組對比舒張率。舒張率的計算方法：（加藥物后最大血管張力-基礎(chǔ)張力）/（加NE或KCl后最大張力-基礎(chǔ)張力）×100%。

2　統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，血小板最大聚集率和血小板抑制率組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較若方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett’s T3法，動脈環(huán)舒張率組間比較采用配對t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3　結(jié)果

3.1冠心舒通膠囊對血小板聚集的影響

3.1.1冠心舒通膠囊對血小板聚集的影響數(shù)據(jù)匯總ADP為血小板聚集的弱激活劑，雙嘧達(dá)莫片能夠有效抑制其誘導(dǎo)的血小板聚集，凝血酶是血小板聚集的強(qiáng)效激活劑，在本實驗中能夠使血小板最大聚集率接近80%，阿司匹林腸溶片能夠有效抑制其聚集，而冠心舒通膠囊對兩者誘導(dǎo)的血小板聚集皆具有療效，見表1。

表1　冠心舒通膠囊對血小板最大聚集率及抑制率影響的對比（±s）%

表1　冠心舒通膠囊對血小板最大聚集率及抑制率影響的對比（±s）%

注：與模型組比較，*P＜0.05；與20 mg/L阿司匹林腸溶片相比，#P＜0.05。

ADP凝血酶最大聚集率抑制率最大聚集率抑制率5 mg/L雙嘧達(dá)莫片26.45±0.33*19.73±0.62--20 mg/L阿司匹林腸溶片--14.35±0.02*81.90±0.39模型組32.96±0.15-79.32±1.58-1.5 g/L冠心舒通膠囊27.43±3.6816.40±6.904.16±1.57*84.78±1.89#1.25 g/L冠心舒通膠囊25.49±0.60*22.67±1.543.13±0.35*96.04±0.53#1 g/L冠心舒通膠囊34.12±0.14-12.83±3.39*83.86±4.06 0.75 g/L冠心舒通膠囊--22.77±4.11*71.37±4.67 0.5 g/L冠心舒通膠囊--55.19±11.07*30.63±12.71組別

3.1.2冠心舒通膠囊對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的影響冠心舒通膠囊（1.25 g/L和1.5 g/L）和5 mg/L雙嘧達(dá)莫片對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集率有降低的趨勢，1.25 g/L冠心舒通膠囊對血小板聚集率的降低與模型組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），見圖1。冠心舒通膠囊（1.25 g/L和1.5 g/L）與5 mg/L雙嘧達(dá)莫片對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制率無統(tǒng)計學(xué)差異，見圖2。

圖1　冠心舒通膠囊對ADP誘導(dǎo)的血小板最大聚集率的影響

圖2　冠心舒通膠囊對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率的影響

3.1.3冠心舒通膠囊對凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集的影響冠心舒通膠囊對凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用具有劑量相關(guān)性，顯著降低了凝血酶誘導(dǎo)的血小板最大的聚集率，與模型組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），見圖3。冠心舒通膠囊對凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制率亦呈劑量相關(guān)性，且冠心舒通膠囊（1.25 g/L和1.5 g/L）與20 mg/L阿司匹林腸溶片相比具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），見圖4。

圖3　冠心舒通膠囊對凝血酶誘導(dǎo)的血小板最大聚集率的影響

圖4　冠心舒通膠囊對凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率的影響

3.2冠心舒通膠囊對動脈收縮的抑制作用

3.2.1冠心舒通膠囊對NE誘導(dǎo)的胸主動脈收縮的影響冠心舒通膠囊對NE誘導(dǎo)的胸主動脈收縮具有抑制作用，在1.5、3.0、4.5 g/L濃度范圍依次增強(qiáng)，與空白組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），見圖5。

3.2.2冠心舒通膠囊對氯化鉀誘導(dǎo)的胸主動脈收縮的影響冠心舒通膠囊對氯化鉀誘導(dǎo)的胸主動脈收縮具有抑制作用，在0.75、1.5、3.0 g/L劑量范圍內(nèi)呈劑量依賴關(guān)系，與空白組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），見圖6。

圖5　冠心舒通膠囊對NE導(dǎo)致的大鼠胸主動脈收縮的影響

圖6　冠心舒通膠囊對KCl導(dǎo)致的大鼠胸主動脈收縮的影響

4　討論

冠心舒通膠囊中的廣棗含有黃銅、酚酸等25種化合物，具有改善血液流變、抑制血小板聚集的作用［14］。丹參素可明顯改善血管收縮舒張功能損傷［15］。還能夠改善局部微循環(huán)障礙［16］。冠心舒通膠囊及其組方中的丹參、冰片、天竺黃均能抑制AngⅡ引起的心肌細(xì)胞和動脈平滑肌細(xì)胞增殖的作用［17］，而且冠心舒通膠囊也能夠抑制晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)的血管平滑肌增值［18］，從而抑制心和血管的慢性舒縮功能失調(diào)。丁香具有散寒止痛，溫中降逆的功效，能夠佐制丹參、冰片、天竺黃的寒涼之性，以防因寒而凝滯，有相反相成之意。

ADP和凝血酶等是血小板激活后釋放的物質(zhì)，它們能夠進(jìn)一步激活血小板。雙嘧達(dá)莫片能夠抑制磷酸二酯酶活性，激活腺苷酸環(huán)化酶，增加血小板內(nèi)cAMP含量，對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有抑制作用。阿司匹林能夠抑制環(huán)氧合酶-1的活性，從而抑制血小板血栓素A2的合成發(fā)揮抗血小板聚集作用。雙嘧達(dá)莫的擴(kuò)血管作用可能導(dǎo)致頭痛、暈厥甚至誘發(fā)心絞痛等不良反應(yīng)，而且雙嘧達(dá)莫緩釋片同阿司匹林合用預(yù)防中風(fēng)再發(fā)與單用沒有差異、大出血風(fēng)險稍高［19］。阿司匹林不良反應(yīng)時有報道，如胃腸道反應(yīng)及黏膜損傷、阿司匹林哮喘、過敏反應(yīng)、瑞氏綜合征、水楊酸反應(yīng)，另外還有大皰性表皮松解型藥疹、血液系統(tǒng)反應(yīng)、中毒性低血糖、聽力損害、肝臟毒性、腎損害、心臟毒性、誘發(fā)癲癇、習(xí)慣性和成癮性、眩暈、鼻炎、涎腺腫大等特殊不良反應(yīng)［20］。即使采用小劑量和制成腸溶片也增加上消化道出血的風(fēng)險［21］。并且阿司匹林抵抗現(xiàn)象影響了其療效，多項臨床試驗證實與臨床事件相關(guān)［22］。本實驗中冠心舒通膠囊抑制ADP、凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集在一定劑量范圍內(nèi)與雙嘧達(dá)莫片或阿司匹林腸溶片療效相當(dāng)或強(qiáng)于兩者。目前冠心舒通膠囊沒有此兩藥類似的不良反應(yīng)報道。至于冠心舒通膠囊在1.5 g/L濃度時效果無劑量相關(guān)性與其濃度過高對血小板的聚集有物理刺激有關(guān)。

本實驗中去甲腎上腺素通過激活大鼠胸主動脈的α受體而起到收縮作用的。而KCl是通過誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞超極化，鈣離子（Ca2+）通道開放，細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流，增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度，收縮血管。冠心舒通膠囊對此兩者誘導(dǎo)的大鼠胸主動脈收縮都具有拮抗作用。

本研究針對血栓栓塞性疾病發(fā)生的血小板激活和血管舒縮功能障礙兩個關(guān)鍵環(huán)節(jié)，通過實驗研究證實冠心舒通膠囊能夠抑制血小板的抗聚集作用和擴(kuò)展胸主動脈，為臨床上冠心舒通膠囊治療血栓栓塞性疾病提供了依據(jù)。

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Anti-platelet aggregation and anti-atrial contractile effect of Guanxinshutong capsule

WANG Wei-ming1，2，XING Xiao-xue1，2，GAO Hui1，2，WANG Ling-yan1，2，LIU Min-na1，2，F(xiàn)AN Guan-wei1，2
（1.Research Centre of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300100，China）

［Objective］Our explicit objective was to study the function of Guanxinshutong capsule in the treatment of thromboembolic disease.［Methods］We determined the maximal aggregation ratio of Adenosine diphosphate（ADP）and Thrombin-induced platelet aggregation and inhibition rate.We further determined the diastolic ratio and KCl norepinephrine-induced contraction of rat aortic ring.［Results］We found that Guanxinshutong capsule had a potential inhibitory effect on platelet aggregation stimulated by ADP and Thrombin. Furthermore，it was found that Guanxinshutong could inhibit both noradrenaline and KCl-induced contraction of aortic ring and the consequent platelet aggregation.［Conclusion］Guanxinshutong capsule has a definite therapeutic effect against thromboembolic disease.

Guanxinshutong capsule；platelet；aortic ring

R285.5

A

1673-9043（2016）02-0104-05

10.11656/j.issn.1673-9043.2016.02.09

王衛(wèi)明（1978-），男，碩士研究生，研究方向為中藥心血管藥理作用研究。

樊官偉，E-mail：fgw1005@hotmail.com。

（2015-12-15）