miR-26a靶向MMP16參與調(diào)控胃癌細(xì)胞侵襲作用研究

陳治宇，王辰辰，胡 健，趙曉瑩，李文樺，朱曉東

1.復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海 200032；

2.中國人民解放軍第四五五醫(yī)院消化內(nèi)科，上海 200052

miR-26a靶向MMP16參與調(diào)控胃癌細(xì)胞侵襲作用研究

陳治宇1，王辰辰1，胡 健2，趙曉瑩1，李文樺1，朱曉東1

1.復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海 200032；

2.中國人民解放軍第四五五醫(yī)院消化內(nèi)科，上海 200052

背景與目的：胃癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者預(yù)后不良的重要因素。本研究旨在明確miR-26a在調(diào)控胃癌細(xì)胞運動侵襲中的作用及其可能機制。方法：通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）檢測胃癌組織細(xì)胞中miR-26a表達(dá)情況，體外通過CCK-8法、平板克隆形成實驗和Matrigel-Transwell實驗評價miR-26a對人胃癌細(xì)胞增殖、運動和侵襲能力的影響。熒光素酶報告基因系統(tǒng)評估m(xù)iR-26a對下游靶基因的調(diào)控作用。結(jié)果：胃癌組織中miR-26a表達(dá)較癌旁組織明顯下降。miR-26a體外對胃癌細(xì)胞增殖無明顯影響，但可顯著抑制胃癌細(xì)胞的運動和侵襲。相反，抑制miR-26a表達(dá)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲能力。生物信息學(xué)分析提示，基質(zhì)金屬蛋白酶16（matrix metalloproteinase 16，MMP16）為miR-26直接調(diào)控靶基因，miR-26a可抑制胃癌細(xì)胞MMP16 miRNA和蛋白的表達(dá)。熒光素酶報告基因檢測提示，miR-26a可與MMP16 mRNA 3’UTR結(jié)合誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)錄后抑制。進(jìn)一步研究提示，MMP16 siRNA對胃癌細(xì)胞侵襲具有模擬miR-26a作用，而過表達(dá)MMP16可拮抗miR-26a對胃癌細(xì)胞侵襲的影響。結(jié)論：miR-26a可通過靶向MMP16來抑制胃癌細(xì)胞運動侵襲，miR-26a可作為抑制胃癌細(xì)胞侵襲的重要干預(yù)靶點。

miR-26a；胃癌；基質(zhì)金屬蛋白酶16；侵襲

胃癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)居第4位，死亡率居惡性腫瘤死因的第2位［1］。我國是胃癌高發(fā)國家，目前已成為第2位常見癌癥和第3位癌癥死因［2］。因此，探尋胃癌侵襲轉(zhuǎn)移機制，尋找干預(yù)靶點具有重要臨床價值。miRNA在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用在近年來受到廣泛關(guān)注和深入研究［3］。已有研究提示，miRNA在調(diào)控胃癌細(xì)胞增殖、運動和侵襲等惡性表型方面發(fā)揮重要作用［4］。因此，本研究將深入探討miR-26a在調(diào)控胃癌細(xì)胞侵襲中的作用及其可能機制。

1　材料和方法

1.1 細(xì)胞系

人胃癌細(xì)胞系MGC-803、HGC-27及人腎上皮細(xì)胞293T均購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所細(xì)胞庫。其中MGC-803和HGC-27用含有10%胎牛血清、丙酮酸鈉和HEPES的RPMI1640來培養(yǎng)；293T用含有10%小牛血清、4 mmol/L谷氨酰胺的培養(yǎng)液。所有的細(xì)胞均在37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的溫箱中培養(yǎng)，每2～3 d更換1次培養(yǎng)液。

1.2 WST法細(xì)胞體外增殖測定

將處于對數(shù)期的細(xì)胞按5 000個/孔（100 μL/孔）的濃度接種至96孔板，每孔設(shè)3個對照，于24、48、72、96和120 h后加入CCK-8溶液10 μL，37 ℃溫育3 h，測量在450 nm處的吸光度（D）值并繪制生長曲線。

1.3 體外運動、侵襲實驗

按1∶3的比例混合Matrigel和RPMI1640培養(yǎng)基制備成人工基底膜；將Transwell置于24孔培養(yǎng)板中，于上室各加入50 μL的混合液，37 ℃溫育2 h以使其凝固；按1×106/mL的濃度將處于對數(shù)期的細(xì)胞用無血清RPMI1640培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，于上室中加入100 μL的細(xì)胞懸液（1×105個細(xì)胞），下室加入600 μL含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，每室設(shè)3個對照；于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下分別培養(yǎng)24 h。在24孔板上取下Transwell，用棉簽蘸去小室上面的細(xì)胞后進(jìn)行H&E染色，顯微鏡下進(jìn)行侵襲細(xì)胞計數(shù)。

1.4 RNA的提取

參照GENERAY公司總RNA抽提試劑盒（Trizol-離心柱型）使用說明進(jìn)行RNA抽提后，經(jīng)紫外分光光度計檢測其D260及D280并計算其RNA濃度（C=D260×40×稀釋倍數(shù)×10-3，單位: μg/μL）；用DEPC水調(diào)整RNA濃度至1 μg/μL，置-70 ℃冰箱保存。

1.5 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）檢測

參照Fermentas “RevertAidTM”First Strand cDNA Synthesis Kit”進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA（RT），-20 ℃保存。采用SYBR GREEN法RTFQ-PCR，PCR反應(yīng)體系總體積25 μL，PCR反應(yīng)條件:95 ℃熱啟動15 min，94 ℃變性30 s，53 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，共40個循環(huán)，至4 ℃結(jié)束。miR-26a特異性擴增引物為:5’-TGTCAACGATACGCTACCTAACGGCA TGACAGTGTCAGCCTA-3’。U6 特異性引物為5’-GAACGCTTCACGAATTTGC-3’?；|(zhì)金屬蛋白酶16（matrix metalloproteinase 16，MMP16）擴增引物序列為:上游5’-AGCACGTTGTTTCC CTTCC-3’，下游5’-CCCGAGCTGTTTATCCA TCA-3’。GAPDH 擴增引物序列為:上游5’-GGGAGCCAAAAGGGTCATCATCTC-3’，下游5’-CCATGCCAGTGAGCTTCCCGTTC -3’。

1.6 蛋白抽提及蛋白［質(zhì)］印跡法（Western blot）檢測

細(xì)胞長至瓶底的80%～90%時，棄去培養(yǎng)液，以預(yù)冷的PBS洗滌2次后，向培養(yǎng)瓶中加入相應(yīng)體積的蛋白裂解液，于冰上振搖30 min，然后用刮棒刮下細(xì)胞，收集到預(yù)冷的1.5 mL離心管中，以4 ℃、12 000×g離心15 min，將上清液按需分裝，保存于-70 ℃。擬行Western blot檢測時，按《分子克隆》第2版相關(guān)章節(jié)配制SDS-聚丙烯酰胺凝膠，然后從不同樣品中取出等量蛋白（100 μg）與1×SDS蛋白上樣緩沖液混合，并于100 ℃變性10 min后，以4 ℃、12 000×g離心5 min；用離心所得的上清液上樣進(jìn)行電泳，轉(zhuǎn)膜，將轉(zhuǎn)膜后的硝酸纖維素膜浸泡至含5%牛奶的PBS溶液中進(jìn)行封閉，然后加入一抗（濃度1∶500），于4 ℃下，與膜共同溫育過夜，然后用PBS洗滌；將二抗按1∶2 000的比例稀釋，與膜于室溫下溫育1 h后用PBS洗滌，最后根據(jù)ECL試劑盒說明，于暗室中進(jìn)行顯影。本研究所用抗體MMP16和GAPDH均為兔抗人多抗，購自英國Abcam公司。

1.7 熒光素酶活性檢測

用胰蛋白酶消化293T細(xì)胞，離心后重懸于含有10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中并按4×104個細(xì)胞/孔的密度接種于48孔板上，培養(yǎng)24 h后（此時細(xì)胞密度為40%～50%），用磷酸鈣轉(zhuǎn)染法把相應(yīng)的miRNA表達(dá)載體（20 nmol/L）、3’UTR報告載體（80 ng）和pRL-TK（表達(dá)海腎熒光素酶蛋白作為實驗的內(nèi)參，40 ng）共轉(zhuǎn)到293T細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48 h后，用Dual-Luciferase Reporter Assay裂解細(xì)胞并用多功能酶標(biāo)儀測定熒光素酶活性。

1.8 RNA轉(zhuǎn)染

取6孔板，每孔5×105個細(xì)胞，2 mL無抗生素完全培養(yǎng)液；將6 μL miRNA mimics或inhibitors加入250 Opti-MEM中（每孔20 μmol/ L）；6 μL LipofectamineTM2000加入250 Opti-MEM中（每孔20 μmol/L）；室溫溫育5 min；兩者混合，室溫溫育20 min；500 μL混合液加入6孔板中，輕輕混勻，RNA終濃度為50 nmol/L；37 ℃培養(yǎng)6 h后，去除轉(zhuǎn)染液，更換完全培養(yǎng)液；培養(yǎng)24 h后繼續(xù)后續(xù)實驗。miR-26a mimics和inhibitors均購自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司。miR-26a mimics序列為:正義5’-UUCAAGUAAUCCAGGAUAGGCU-3’，反義5’-CCUAUCCUGGAUUACUUGAAUU-3’。miR-26a inhibitor序列為:5’-UUGUUCAUAU AGAUCUCGUCAUU-3’。MMP16 siRNA序列為:5’-AUAAUCUCCAAUAUCCUC UUAAA-3’。

1.9 統(tǒng)計學(xué)處理

本研究相關(guān)統(tǒng)計分析由SPSS 15.0軟件完成，主要方法為χ2檢驗和方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1 miR-26a在胃癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)

選擇10對人胃癌組織及癌旁正常組織，通過RTFQ-PCR檢測miR-26a表達(dá)情況，結(jié)果顯示，相對于癌旁正常組織，miR-26a在胃癌組織細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯下調(diào)（P＜0.001，圖1）。

圖 1 miR-26a在人胃癌組織與癌旁正常組織表達(dá)差異Fig. 1 A comparison of miR-26a expression levels in 10 paired gastric cancer and adjacent non-cancer tissues

2.2 miR-26a體外對胃癌細(xì)胞增殖無明顯影響

體外通過miR-26a mimics轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞，然后通過CCK-8法和平板克隆形成實驗評估m(xù)iR-26a體外對人胃癌細(xì)胞增殖克隆的影響。結(jié)果顯示，miR-26a過表達(dá)并沒有影響胃癌細(xì)胞體外增殖能力，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05，圖2）。

2.3 miR-26a抑制胃癌細(xì)胞運動、侵襲

體外通過Transwell實驗及Matrigel評估m(xù)iR-26a對人胃癌細(xì)胞運動、侵襲能力的影響。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-26a mimics進(jìn)行過表達(dá)可在體外顯著抑制胃癌細(xì)胞的運動和侵襲。相反，轉(zhuǎn)染miR-26a抑制劑anti-miR-26a inhibitors可促進(jìn)人胃癌細(xì)胞的運動和侵襲能力（圖3）。

2.4 MMP16為miR-26a直接調(diào)控靶基因

圖 2 miR-26a體外對人胃癌細(xì)胞增殖的影響Fig. 2 miR-26a has no effect on gastric cell growth in vitro

圖 3 miR-26a對人胃癌細(xì)胞運動、侵襲的影響Fig. 3 miR-26a suppresses gastric cancer cell migration and invasion in vitro

為明確miR-26a直接調(diào)控靶基因，我們通過Targetscan軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)，MMP16 mRNA 3’UTR存在miR-26a的結(jié)合位點，將含有MMP16 mRNA 3’UTR序列克隆到報告載體pGL-MCS-control中，得到野生型的3’UTR報告載體，同時也構(gòu)建含有突變靶位點的突變型3’UTR報告載體，然后利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn)，miR-26a可抑制野生型3’UTR報告載體熒光素酶活性，而對突變型3’UTR報告載體熒光素酶活性并沒有明顯的抑制作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miR-26a可明顯抑制胃癌細(xì)胞MMP16 mRNA和蛋白的表達(dá)，而抑制miR-26a表達(dá)可促進(jìn)MMP16 mRNA和蛋白的表達(dá)（圖4）。

2.5 MMP16介導(dǎo)了miR-26a抑制胃癌細(xì)胞運動侵襲作用

為進(jìn)一步評估MMP16是否為miR-26a功能性靶基因，我們通過siRNA進(jìn)行MMP16表達(dá)沉默后發(fā)現(xiàn)人胃癌細(xì)胞體外侵襲能力下降，與miR-26a作用相一致；然后構(gòu)建表達(dá)MMP16的表達(dá)載體進(jìn)行挽救實驗，由于靶基因的表達(dá)載體只克隆了其對應(yīng)基因的蛋白編碼區(qū)域而不包含其3’UTR序列，因此靶基因表達(dá)不受miR-26a抑制，可實現(xiàn)靶基因與miR-26a共表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MMP16的過表達(dá)可抑制miR-26a效應(yīng)（圖5）。

圖 4 MMP16為miR-26a直接調(diào)控靶基因Fig. 4 miR-26a down-regulates MMP16 expression by directly targeting its 3’-UTR

圖 5 MMP16介導(dǎo)miR-26a抑制胃癌細(xì)胞侵襲作用Fig. 5 MMP16 mediates the invasion-suppressive function of miR-26a

3　討　論

miRNA是一類長18～25 nt的非編碼RNA，可靶向于特異性mRNA的3’UTR區(qū)，通過抑制miRNA的翻譯或直接引起其降解來沉默對應(yīng)的靶基因，從而調(diào)節(jié)其生物學(xué)過程［5］。miRNA在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用在近年來受到廣泛關(guān)注［6］。目前認(rèn)為，miRNA主要通過2種方式發(fā)揮作用［7］:① 作為抑癌因子抑制原癌基因的激活；② 通過下調(diào)腫瘤抑制因子水平或下調(diào)抑癌基因表達(dá)從而產(chǎn)生致癌作用并促進(jìn)腫瘤的生長。已有研究提示，miRNA在調(diào)控胃癌細(xì)胞增殖、運動、侵襲、轉(zhuǎn)移及治療敏感性方面發(fā)揮重要作用［4］。同時基于miRNA表達(dá)指紋譜用于胃癌早期診斷［8］、化療療效［9］和預(yù)后預(yù)測［10］等方面具有重要價值。

既往研究提示，miR-26a在調(diào)控腫瘤細(xì)胞惡性表型方面具有重要作用。如miR-26a在許多惡性腫瘤中發(fā)揮抑制癌細(xì)胞增殖、運動及侵襲的作用，其機制除靶向傳統(tǒng)的腫瘤癌基因誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)錄后抑制外，還包括參與調(diào)控腫瘤相關(guān)炎性反應(yīng)、腫瘤干細(xì)胞干性維持等。另外，外周血miR-26a表達(dá)檢測可用于腫瘤治療療效及預(yù)后預(yù)測等［11］。但到目前為止，miR-26a在人胃癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及其對胃癌細(xì)胞運動、侵襲能力的作用研究尚未見報道。因此，本研究首次深入系統(tǒng)地研究了miR-26a對人胃癌細(xì)胞的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-26a可在體外明顯抑制人胃癌細(xì)胞的運動、侵襲能力，但本研究也發(fā)現(xiàn)，miR-26a對胃癌細(xì)胞的增殖能力并沒有顯著影響，提示其作用的發(fā)揮主要體現(xiàn)在對胃癌細(xì)胞的運動侵襲作用上，且其功能的發(fā)揮具有細(xì)胞特異性。

本研究還提示，MMP16為miR-26a直接調(diào)控靶基因。MMP家族是一類活性依賴于鋅離子和鈣離子的蛋白水解酶，主要的生理作用是降解細(xì)胞外基質(zhì)，破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵性作用，在腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移中的作用日益受到重視，被認(rèn)為是該過程中主要的蛋白水解酶［12-13］。本研究發(fā)現(xiàn)，MMP16介導(dǎo)了miR-26a抑制胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用。已有文獻(xiàn)報道，MMP16參與多種腫瘤的運動、侵襲及轉(zhuǎn)移，包括肺癌、胰腺癌和惡性黑素瘤等［14-16］。而本研究再次提示，MMP16在誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞運動、侵襲方面發(fā)揮了重要作用。

胃癌早期癥狀無特異性，大多數(shù)患者就診時已到晚期，預(yù)后很差，多因廣泛的侵襲轉(zhuǎn)移而死亡。因此研究胃癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)機制，有可能為胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的早期診斷和靶向治療提供幫助和依據(jù)。本研究提示，miR-26a可能作為人胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要干預(yù)靶點。而在目前，miRNA在臨床上除用于早期診斷、療效預(yù)測和預(yù)后判斷外，直接用于臨床治療已進(jìn)入臨床試驗階段，如Mirna Therapeutics開發(fā)的MRX34是一種miR-34脂質(zhì)體，補充miR-34治療腫瘤的臨床試驗已經(jīng)開展［17］。因此，miR-26a未來可能作為胃癌侵襲轉(zhuǎn)移新的干預(yù)靶點。

綜上所述，miR-26a在人胃癌組織中表達(dá)下調(diào)，miR-26a可抑制人胃癌細(xì)胞運動、侵襲能力，MMP16為miR-26a直接調(diào)控靶基因，其介導(dǎo)了miR-26a對人胃癌細(xì)胞運動侵襲的影響，miR-26有可能作為胃癌預(yù)后新的分子標(biāo)志物及重要的臨床干預(yù)靶點。

［1］ KARIMI P， ISLAMI F， ANANDASABAPATHY S， et al. Gastric cancer: descriptive epidemiology， risk factors，screening， and prevention［J］. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev， 2014， 23（5）: 700-713.

［2］ CHEN W， ZHENG R， BAADE P D， et al. Cancer statistics in China， 2015［J］. CA Cancer J Clin， 2016， 66（2）: 115-132.

［3］ ESQUELA-KERSCHER A， SLACK F J. Oncomirs - miRNAs with a role in cancer［J］. Nat Rev Cancer， 2006， 6（4）: 259-269.

［4］ JIANG C， CHEN X， ALATTAR M， et al. MicroRNAs in tumorigenesis， metastasis， diagnosis and prognosis of gastric cancer［J］. Cancer Gene Ther， 2015， 22（6）: 291-301.

［5］ KIM V N， HAN J， SIOMI M C. Biogenesis of small RNAs in animals［J］. Nat Rev Mol Cell Biol， 2009， 10（2）: 126-139.

［6］ ESQUELA-KERSCHER A， SLACK F J. Oncomirs-miRNAs with a role in cancer［J］. Nat Rev Cancer， 2006， 6（4）: 259-269.

［7］ IORIO M V， CROCE C M. MiRNAs in cancer: small molecules with a huge impact［J］. J Clin Oncol， 2009， 27（34）: 5848-5856.

［8］ LI X， ZHANG Y， ZHANG Y， et al. Survival prediction of gastric cancer by a seven-miRNA signature［J］. Gut， 2010，59（5）: 579-585.

［9］ WANG P， ZHUANG L， ZHANG J， et al. The serum miR-21 level serves as a predictor for the chemosensitivity of advanced pancreatic cancer， and miR-21 expression confers chemoresistance by targeting FasL［J］. Mol Oncol， 2013，7（3）: 334-345.

［10］ MATUSZCAK C， HAIER J， HUMMEL R， et al. MiRNAs: promising chemoresistance biomarkers in gastric cancer with diagnostic and therapeutic potential［J］. World J Gastroenterol， 2014， 20（38）: 13658-13666.

［11］ QIU X， ZHANG J， SHI W， et al. Circulating miRNA-26a in plasma and its potential diagnostic value in gastric cancer［J］. PLoS One， 2016， 11（3）: e151345.

［12］ NEMETH J A， YOUSIF R， HERZOG M， et al. Matrix metalloproteinase activity， bone matrix turnover， and tumor cell proliferation in prostate cancer bone metastasis［J］. J Natl Cancer Inst， 2002， 94（1）: 17-25.

［13］ LOKESHWAR B L. MMP inhibition in prostate cancer［J］. Ann N Y Acad Sci， 1999， 878: 271-289.

［14］ TATTI O， GUCCIARDO E， PEKKONEN P， et al. MMP16 mediates a proteolytic switch to promote cell-cell adhesion，collagen alignment， and lymphatic invasion in melanoma［J］. Cancer Res， 2015， 75（10）: 2083-2094.

［15］ LIN F， WANG X， JIE Z， et al. Inhibitory effects of miR-146b-5p on cell migration and invasion of pancreatic cancer by targeting MMP16［J］. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci， 2011， 31（4）: 509-514.

［16］ WANG P， CHEN L， ZHANG J， et al. Methylation-mediated silencing of the miR-124 genes facilitates pancreatic cancer progression and metastasis by targeting Rac1［J］. Oncogene，2014， 33（4）: 514-524.

［17］ BOUCHIE A. First miRNA mimic enters clinic［J］. Nat Biotechnol， 2013， 31（7）: 577.

miR-26a suppresses gastric cancer cell invasion by targeting MMP16

CHEN Zhiyu1， WANG Chenchen1， HU Jian2， ZHAO Xiaoying1， LI Wenhua1， ZHU Xiaodong1
（1.Department of Medical Oncology，F(xiàn)udan University Shanghai Cancer Center， Department of Oncology， Shanghai Medical College， Fudan University， Shanghai 200032， China； 2.Department of Gastroenterology， the 455th Hospital of Chinese People's Liberation Army， Shanghai 200052， China）
Correspondence to: CHEN Zhiyu E-mail: zychan75@163.com

Background and purpose: Invasion and metastasis lead to poor prognosis in gastric cancer. In this study， we investigated the potential function of miR-26a in gastric cancer. Methods: Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction （RTFQ-PCR） was used to detect the expression of miR-26a in gastric cancer cells. In vitro CCK-8 assay， cloning formation assay and Matrigel-Transwell assay were used to evaluate the proliferation， migration and invasion of gastric cancer cells. A luciferase reporter assay was also conducted to confirm that matrix metalloproteinase-16 （MMP16） is a direct target of miR-26a. Results: miR-26a was down-regulated in gastric cancer tissues compared with that in non-cancerous tissues. Functional studies showed that miR-26a inhibited cell proliferation， colony formation， cell motility and invasion. However， miR-26a had no effect on cell proliferation. We also characterized MMP16 as a direct target of miR-26a. We showed that knocking down MMP16 in gastric cancer cells significantly decreased MMP16 expression and inhibited cell invasion， whereas ectopic MMP16 expression significantly abrogated the suppressed cell invasion induced by miR-26a. Conclusion: miR-26a suppresses gastric cancer cell invasion by targeting MMP16. miR-26a could represent a potential therapeutic target for gastric cancer.

miR-26a； Gastric cancer； Matrix metalloproteinase-16； Invasion

10.19401/j.cnki.1007-3639.2016.10.002

R735.2

A

1007-3639（2016）10-0813-07

上海市自然科學(xué)基金（16ZR1406800）。

陳治宇 E-mail: zychan75@163.com

（2016-07-14

2016-09-05）