我國(guó)不同地方品種雞(Gallusgallusdomesticus)對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的易感性

李建梅，劉　梅，沈欣悅，程　旭，季正劍，劉丹丹，殷建玫，尤素蘭，蘇一軍，陶建平，戴亞斌*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，揚(yáng)州 225125；2.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院 禽類預(yù)防醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，揚(yáng)州 225009)

?

我國(guó)不同地方品種雞(Gallusgallusdomesticus)對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的易感性

李建梅1，劉梅1，沈欣悅1，程旭1，季正劍2，劉丹丹2，殷建玫1，尤素蘭1，蘇一軍1，陶建平2，戴亞斌1*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，揚(yáng)州 225125；2.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院 禽類預(yù)防醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，揚(yáng)州 225009)

旨在比較不同品種雞(Gallusgallusdomesticus)對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的易感性差異。選取26日齡無(wú)球蟲(chóng)感染的24個(gè)我國(guó)地方品種雞和國(guó)外引進(jìn)品種隱性白羽雞各45只，分別分為2個(gè)感染組和1個(gè)非感染對(duì)照組，每組15只。感染組每只雞嗉囊內(nèi)接種1×105個(gè)孢子化柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊，基于感染雞的死亡率、相對(duì)增重率、腸道病變記分、卵囊產(chǎn)量和抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI)等指標(biāo)，評(píng)價(jià)不同雞種對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的易感性。25個(gè)雞種中，狼山雞、藏雞、大骨雞、蕭山雞、文昌雞、安義瓦灰雞、白耳黃雞、仙居雞、大圍山微型雞和金湖烏鳳雞易感性最低，ACI介于56.80～85.76，表現(xiàn)為未發(fā)生死亡或死亡率低，相對(duì)增重率高，腸道病變記分低，但卵囊產(chǎn)量相對(duì)較高(藏雞除外)。隱性白羽雞、清遠(yuǎn)麻雞、惠陽(yáng)胡須雞、固始雞、北京油雞、瓢雞和汶上蘆花雞易感性最高，ACI介于-11.64～18.67之間，表現(xiàn)為死亡率較高(北京油雞除外)，相對(duì)增重率較低，腸道病變記分和卵囊產(chǎn)量較高(固始雞除外)。其余8個(gè)品種易感性中等，ACI介于29.81～53.36。不同品種雞對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的易感性存在較大的差異，且肉用型品種較蛋肉兼用型品種易感性高。

地方雞種；隱性白羽雞；柔嫩艾美耳球蟲(chóng)；易感性

雞球蟲(chóng)病(coccidiosis)是由寄生于腸消化道上皮細(xì)胞的艾美耳屬(Eimeria)球蟲(chóng)引起的一種寄生性原蟲(chóng)病。在雞的各類疾病中，球蟲(chóng)病發(fā)病率最高，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的禽病之一。該病病原有堆型艾美耳球蟲(chóng)(Eimeriaacervulina)、布氏艾美耳球蟲(chóng)(E.brunetti)、巨型艾美耳球蟲(chóng)(E.maxima)、和緩艾美耳球蟲(chóng)(E.mitis)、毒害艾美耳球蟲(chóng)(E.necatrix)、早熟艾美耳球蟲(chóng)(E.praecox)和柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(E.tenella)等7個(gè)種[1]，其中柔嫩艾美耳球蟲(chóng)可引起3～6周齡雛雞發(fā)生急性盲腸球蟲(chóng)病，是致病性最強(qiáng)、流行最為普遍的蟲(chóng)種[2]。目前雞球蟲(chóng)病的防治主要依賴于藥物防治和免疫預(yù)防，但是由于球蟲(chóng)耐藥性蟲(chóng)株的不斷出現(xiàn)，以及人們對(duì)藥物殘留問(wèn)題的日益關(guān)注和政府對(duì)抗球蟲(chóng)藥物的使用限制越來(lái)越嚴(yán)格，使得藥物防治雞球蟲(chóng)病面臨困境；同時(shí)由于球蟲(chóng)生活史復(fù)雜，不同蟲(chóng)種間沒(méi)有或僅有少部分的交叉保護(hù)力，即使同種不同蟲(chóng)株間交叉保護(hù)效果也不甚明顯，因而通過(guò)免疫接種途徑防治球蟲(chóng)病效果并不顯著。因此，迫切需要尋找新的策略來(lái)防控該病。近年來(lái)，隨著寄生蟲(chóng)與宿主間相互作用機(jī)制研究不斷深入，分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展，基于品種(系)本身的抗病遺傳特性而選育出抗球蟲(chóng)病雞種可能會(huì)發(fā)展成為一種新的球蟲(chóng)病防控手段。雞品種(系)本身的遺傳特性決定了其對(duì)一些疾病具有遺傳抗性或易感性，比如傳染性法氏囊病、馬立克病、沙門(mén)菌病等[3-6]。國(guó)內(nèi)外的一些研究也證實(shí)不同品種(系)雞在對(duì)球蟲(chóng)病的遺傳抗性或易感性上存在較大的差異[7-11]。我國(guó)擁有豐富的雞品種資源，其外貌特征、遺傳特性、生產(chǎn)性能各異，已成為世界家禽育種優(yōu)秀的物質(zhì)資源。較之于引進(jìn)品種，我國(guó)地方雞種還具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和抗病性。目前，國(guó)內(nèi)研究多限于地方雞種的遺傳多樣性及生產(chǎn)性能評(píng)價(jià)，而在抗病性評(píng)價(jià)方面鮮有報(bào)道。在抗球蟲(chóng)病方面，僅見(jiàn)文昌雞[10]以及鹿苑雞、固始雞、北京油雞和大骨雞[11]等我國(guó)少數(shù)幾個(gè)地方雞種的抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)性能評(píng)價(jià)的報(bào)道。為此，本研究對(duì)國(guó)家級(jí)地方雞種基因庫(kù)(江蘇)保存的25個(gè)品種雞的抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，旨在篩選出在球蟲(chóng)遺傳抗性上具有明顯差異的雞種，為球蟲(chóng)與宿主之間的相互作用機(jī)制深入研究以及抗球蟲(chóng)病育種素材選擇奠定良好的工作基礎(chǔ)，同時(shí)進(jìn)一步豐富我國(guó)地方雞種質(zhì)資源的基礎(chǔ)資料，為它們優(yōu)良性狀基因的挖掘和利用提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

1日齡清遠(yuǎn)麻雞、瓢雞、固始雞、惠陽(yáng)胡須雞、瑯琊雞、茶花雞、汶上蘆花雞、狼山雞、北京油雞、河南斗雞、泰和雞、安義瓦灰雞、大骨雞、金湖烏鳳雞、文昌雞、淮南麻雞、仙居雞、邊雞、鹿苑雞、蕭山雞、壽光雞、白耳黃雞、大圍山微型雞、藏雞和隱性白羽雞等25個(gè)雞種(Gallusgallusdomesticus)由國(guó)家級(jí)地方雞種基因庫(kù)(江蘇)提供，其中隱性白羽雞原產(chǎn)于法國(guó)，屬快大型白羽肉雞，其余24個(gè)雞種均為我國(guó)地方雞種。出殼后運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，飼養(yǎng)在無(wú)球蟲(chóng)的環(huán)境中，飼喂不含任何抗球蟲(chóng)藥的全價(jià)飼料。試驗(yàn)開(kāi)始前，采用常規(guī)方法鏡檢有無(wú)球蟲(chóng)卵囊，確認(rèn)無(wú)球蟲(chóng)卵囊污染后，方可用于試驗(yàn)。

1.2試驗(yàn)蟲(chóng)株

柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(E.tenella)孢子化卵囊由揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)教研室保存。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

25日齡時(shí)將所有試驗(yàn)雞逐只稱重并編號(hào)，挑選體況相近的各品種雞各45只，分為2個(gè)感染組和1個(gè)非感染對(duì)照組，每組15只。感染組和非感染對(duì)照組分籠飼養(yǎng)，感染組每只雞經(jīng)嗉囊接種1 mL(含1×105個(gè))柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊懸液，非感染對(duì)照組每只雞接種PBS 1 mL。接種后每天觀察雞的精神狀態(tài)、飲欲、食欲、糞便與發(fā)病情況。對(duì)死亡雞立即進(jìn)行稱重和剖檢，確定是否死于球蟲(chóng)病。感染后6～8 d，每天2次分別收集各組的全部糞便，用麥克馬斯特法(McMaster’s method)進(jìn)行卵囊計(jì)數(shù)。接種后第8天末，稱重并剖殺所有存活雞，取盲腸，觀察腸道病變并記分，同時(shí)取盲腸及其內(nèi)容物，勻漿并用胃蛋白酶消化，采用麥克馬斯特法對(duì)勻漿中的卵囊數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.4評(píng)價(jià)指標(biāo)

1.4.1血便記分參照N.F.Morehouse等[12]的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，即從感染后第4天開(kāi)始，每天2次觀察各組雞血便數(shù)。按24 h內(nèi)平均每只雞血便數(shù)最多的一次進(jìn)行記分，記分標(biāo)準(zhǔn)：糞便正常記0分；1、2、3堆血便分別記1、2、3分，4堆以上記4分。

1.4.2死亡率接種柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊后，觀察記錄各組死亡雞數(shù)，并進(jìn)行剖檢以確定是否死于盲腸球蟲(chóng)病。死亡率=(試驗(yàn)結(jié)束時(shí)每組死亡雞數(shù)÷試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)每組雞數(shù))×100%。

1.4.3相對(duì)增重率相對(duì)增重率=(感染組平均增重÷非感染對(duì)照組平均增重)×100%。

1.4.4病變記分腸道病變記分參照J(rèn). Johnson和W.M. Reid[13]的標(biāo)準(zhǔn)。兩側(cè)盲腸病變不一致時(shí)，以嚴(yán)重的一側(cè)為準(zhǔn)。盲腸正常并且無(wú)肉眼病變，記0分；盲腸壁有很少量散在淤血點(diǎn)，但腸壁不增厚，內(nèi)容物正常，記1分；盲腸壁增厚，盲腸內(nèi)容物明顯帶血，病變數(shù)量較多，記2分；盲腸內(nèi)容物多量帶血或有盲腸芯，盲腸壁肥厚明顯，記3分；盲腸因充滿大量血液或腸芯而明顯腫大，外觀呈醬色，記4分。死于球蟲(chóng)病雞記4分。

1.4.5抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI)ACI=(相對(duì)增重率+成活率)-(病變值+卵囊值)。其中，成活率=(試驗(yàn)結(jié)束時(shí)每組存活的雞數(shù)÷試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)每組雞數(shù))×100 %；病變值=平均病變記分×10；卵囊值參照文獻(xiàn)的計(jì)算方法[11]，即把收集的各感染組感染后6～8 d糞中卵囊數(shù)與該組盲腸剖檢消化后勻漿內(nèi)卵囊數(shù)相加，分別求出每組每只雞的平均卵囊數(shù)，按標(biāo)準(zhǔn)扣分[14]。判定標(biāo)準(zhǔn)：ACI≥180判為高抗，160～179判為中抗，<160判為易感。

1.5數(shù)據(jù)處理與分析

用SPSS軟件對(duì)各品種雞的感染組和非感染對(duì)照組數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)；對(duì)各品種間體重及腸道病變記分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析；對(duì)各品種間死亡率進(jìn)行Fisher’s檢驗(yàn)；對(duì)死亡率、相對(duì)增重率、腸道病變記分、ACI值等數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析(P<0.05)。

2　結(jié)　果

2.1臨床觀察

各感染組雞自感染后第4天起先后表現(xiàn)典型的臨床癥狀，表現(xiàn)為精神不振、飲食欲下降、喜扎堆。有的雞翅下垂、縮頭閉眼、羽毛逆立、排鮮紅色血便，有的甚至出現(xiàn)死亡，剖檢感染后第4～5天死亡的雞盲腸腫大呈暗紅色，腸腔內(nèi)充滿紅色血液和脫落的黏膜碎片，黏膜潰瘍出血。感染5 d以后死亡的雞剖檢發(fā)現(xiàn)盲腸內(nèi)容物逐漸變黏稠，至感染后第7天開(kāi)始形成盲腸芯，內(nèi)有凝血及充滿干酪樣的物質(zhì)，腸壁增厚，有的內(nèi)有出血點(diǎn)。試驗(yàn)期間，各品種雞非感染對(duì)照組中除一只壽光雞死亡外，其余試驗(yàn)雞在整個(gè)試驗(yàn)期間精神狀態(tài)良好、飲欲食欲正常。死亡的壽光雞經(jīng)剖檢確認(rèn)并非死于球蟲(chóng)病。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)各非感染對(duì)照組進(jìn)行糞檢，均未見(jiàn)球蟲(chóng)卵囊。

2.2血便記分

所有品種雞的感染組均于感染后第4天始有血便排出，其中仙居雞、文昌雞、固始雞早在感染后3.5 d即排出血便。除狼山雞血便高峰期為感染后第6天外，其余品種雞均為感染后第5天。不同品種雞排血便嚴(yán)重程度存在差異。從血便高峰期(24 h內(nèi))平均血便堆數(shù)來(lái)看，固始雞最多(11.43堆·只-1)，藏雞和鹿苑雞最少(3.53和3.84堆·只-1)，其余各品種介于與4.07～9.38堆·只-1之間(圖1)。按照血便記分標(biāo)準(zhǔn)，除藏雞和鹿苑雞分別記3.53和3.84分外，其余品種皆記4分。試驗(yàn)期間，所有品種雞的非感染對(duì)照組均無(wú)血便排出。

圖1　血便高峰期平均每只雞血便數(shù)Fig.1　Mean number of bloody stool of per chicken on peak day

2.3死亡率

試驗(yàn)結(jié)果顯示，不同品種雞間的死亡率存在較大差異。隱性白羽雞死亡率最高(40%)，其次為瓢雞(33.33%)；藏雞、白耳黃雞和大圍山微型雞等3個(gè)品種未見(jiàn)死亡；其它品種雞的死亡率為3.33%～30%(圖2)。藏雞、白耳黃雞和大圍山微型雞的死亡率與瓢雞、隱性白羽雞、清遠(yuǎn)麻雞、固始雞和惠陽(yáng)胡須雞差異顯著(P<0.05)，與其余品種無(wú)顯著差異(P>0.05)；鹿苑雞、蕭山雞、壽光雞死亡率與除固始雞、瓢雞、清遠(yuǎn)麻雞和隱性白羽雞外的品種差異不顯著(P>0.05)；大骨雞、金湖烏鳳雞、文昌雞、淮南麻雞、仙居雞、邊雞和安義瓦灰雞等的死亡率與瓢雞和隱性白羽雞差異顯著(P<0.05)，與其余品種差異不顯著(P>0.05)；泰和雞、斗雞、北京油雞、狼山雞的死亡率與除隱性白羽雞外的品種差異不顯著(P>0.05)。此外，不同品種雞在死亡時(shí)間上也有一定的差異。在出現(xiàn)死亡的25個(gè)品種中，隱性白羽雞、瓢雞、汶上蘆花雞、固始雞等于感染后第4天即開(kāi)始出現(xiàn)死亡，河南斗雞和北京油雞為第6天，狼山雞和安義瓦灰雞為第7天，而金湖烏鳳雞則在第8天才出現(xiàn)死亡，其余品種均為第5天。

圖2　各品種雞感染球蟲(chóng)后的死亡率Fig.2　Mortality of different chicken breed after inoculating E.tenella

2.4相對(duì)增重率

攻蟲(chóng)前，同一品種雞感染組與非感染對(duì)照組間平均體重相近，差異不顯著(P>0.05)，但不同品種雞間平均體重差異顯著(P<0.05)，其中大圍山微型雞、茶花雞、白耳黃雞、固始雞、泰和雞、清遠(yuǎn)麻雞、藏雞等體重顯著低于隱性白羽雞、壽光雞、鹿苑雞、惠陽(yáng)胡須雞、淮南麻雞、蕭山雞、大骨雞、瓢雞、文昌雞、瑯琊雞、邊雞、汶上蘆花雞、金湖烏鳳雞等(P<0.05)。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，瑯琊雞和狼山雞感染組與非感染對(duì)照組間平均體重?zé)o顯著差異(P>0.05)，其余各品種雞感染組與非感染對(duì)照組間差異顯著(P<0.05)(表1)。

25個(gè)品種雞中狼山雞和文昌雞相對(duì)增重率最高，達(dá)60.0%以上，惠陽(yáng)胡須雞、北京油雞、隱性白羽雞、固始雞、清遠(yuǎn)麻雞、汶上蘆花雞和邊雞等相對(duì)增重率低于10.0%，其余品種雞介于11.82%～47.39%之間(表1)。

表1相對(duì)增重率

Table 1Relative weight gain rate

品種Breed組別Group初始體重(x-±s)/gInitialbodyweight(g)終末體重(x-±s)/gFinalbodyweight(g)平均增重(x-±s)/gMeanweightgain(g)相對(duì)增重率/%Relativeweightgainrate(%)隱性白羽雞RecessivewhiteI283.00±11.69a290.23±17.53a7.23±8.63a4.36C261.45±16.27a427.15±29.43b165.70±13.98b100清遠(yuǎn)麻雞QingyuanpartridgeI149.00±4.07a146.40±10.31a3.88±2.81a5.00C146.33±13.44a223.89±21.93b77.56±9.23b100瓢雞PiaoI231.15±8.19a246.67±8.87a15.52±4.85a11.82C247.67±14.34a379.00±26.64b131.33±14.71b100固始雞GushiI146.57±10.34a143.71±11.31a4.00±1.32a4.74C144.44±7.19a228.78±9.26b84.33±3.27b100惠陽(yáng)胡須雞HuiyangbeardedI254.30±6.43a254.33±8.45a0.03±4.50a0.03C245.10±8.57a351.55±13.87b106.45±7.12b100瑯琊雞LangyaI214.70±3.50a247.90±12.72a33.20±12.40a38.69C215.90±17.39a301.70±28.77a85.80±11.66b100茶花雞ChahuaI127.40±2.99a138.00±5.81a10.60±6.69a19.83C127.89±7.77a181.33±12.89b53.44±8.85b100汶上蘆花雞WenshangbarredI199.40±4.63a205.40±12.76a6.00±10.77a7.38C199.78±8.54a281.11±13.55b81.33±6.72b100狼山雞LangshanI175.40±4.01a219.80±11.31a44.40±10.24a61.76C166.00±13.18a237.89±22.56a71.89±10.33b100北京油雞BeijingoilI180.60±5.76a176.90±10.88a4.50±1.80a0.67C178.90±7.66a245.70±13.91b66.80±7.07b100河南斗雞HenangameI180.78±7.27a190.33±6.70a9.56±4.50a15.24C181.40±5.26a244.10±7.57b62.70±4.84b100

(轉(zhuǎn)下頁(yè) Carried forward)

I.感染組；C.非感染對(duì)照組。同列數(shù)據(jù)標(biāo)有不同字母者差異顯著(P<0.05)I.infected group；C.control group.Means followed by the different letters within the same column are different significantly (P<0.05)

2.5病變記分

各品種雞感染組中，白耳黃雞腸道病變記分最低，為1.60，其次為河南斗雞(1.70)；隱性白羽雞最高，為3.60；淮南麻雞、邊雞、壽光雞、北京油雞、惠陽(yáng)胡須雞、清遠(yuǎn)麻雞、瓢雞、汶上蘆花雞等腸道病變也較嚴(yán)重，為3.1～3.4，其余品種雞為2.1～2.9。

白耳黃雞腸道病變記分與河南斗雞和仙居雞相比，差異不顯著(P>0.05)，與其余品種雞相比差異顯著(P<0.05)；隱性白羽雞腸道病變記分顯著高于除瑯琊雞、固始雞、淮南麻雞、邊雞、壽光雞、北京油雞、惠陽(yáng)胡須雞、清遠(yuǎn)麻雞、瓢雞和汶上蘆花雞等以外的其余品種雞(P<0.05)(圖3)。所有品種雞的非感染對(duì)照組腸道均未見(jiàn)明顯病變。

柱上無(wú)相同字母者差異顯著(P<0.05)Bars with no common letters differ significantly (P<0.05)圖3　各品種雞感染球蟲(chóng)后的平均腸道病變記分Fig.3　Mean lesion score of different chicken breed after inoculating E.tenella

2.6卵囊產(chǎn)量

所有品種雞感染組均有卵囊排出，根據(jù)扣分標(biāo)準(zhǔn)，卵囊值皆為40，但不同品種雞的卵囊產(chǎn)量差異較大(圖4)。固始雞、瑯琊雞、茶花雞、藏雞的卵囊產(chǎn)量較低，低于17.2×106個(gè)·只-1，而鹿苑雞、瓢雞、惠陽(yáng)胡須雞等卵囊產(chǎn)量較高，分別為106.2×106、190.3×106、264.8×106個(gè)·只-1。大圍山微型雞、仙居雞、邊雞、壽光雞為22.7×106～ 28.7×106個(gè)·只-1；安義瓦灰雞、河南斗雞、金湖烏鳳雞、大骨雞、白耳黃雞、汶上蘆花雞、清遠(yuǎn)麻雞、蕭山雞、泰和雞為31.5×106～ 39.8×106個(gè)·只-1；狼山雞和北京油雞分別為46.2×106和49.1×106個(gè)·只-1；文昌雞為58.6×106個(gè)·只-1；隱性白羽雞為68.1×106個(gè)·只-1；淮南麻雞為79.4×106個(gè)·只-1。試驗(yàn)期間，各品種雞非感染對(duì)照組均無(wú)球蟲(chóng)卵囊排出。

2.7ACI

所有品種雞的ACI值均低于160(圖5)，按照評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，均屬對(duì)球蟲(chóng)易感，但不同品種雞間ACI值差異較大，表明不同品種雞對(duì)球蟲(chóng)的易感程度存在較大的差異。在所有試驗(yàn)品種中隱性白羽雞ACI值最低，為負(fù)值，表明其易感性最高。其余24個(gè)品種的ACI值高低依次為狼山雞、文昌雞、大骨雞、安義瓦灰雞、蕭山雞、金湖烏鳳雞、白耳黃雞、藏雞、仙居雞、大圍山微型雞、鹿苑雞、瑯琊雞、河南斗雞、泰和雞、壽光雞、茶花雞、淮南麻雞、邊雞、北京油雞、汶上蘆花雞、固始雞、瓢雞、惠陽(yáng)胡須雞、清遠(yuǎn)麻雞。

2.8相關(guān)性分析

血便堆數(shù)、死亡率、腸道病變記分、相對(duì)增重率、卵囊產(chǎn)量、ACI等各項(xiàng)評(píng)價(jià)參數(shù)的相關(guān)性分析結(jié)果顯示：血便堆數(shù)與死亡率、腸道病變記分、卵囊產(chǎn)量、相對(duì)增重率、ACI等評(píng)價(jià)指標(biāo)間并無(wú)相關(guān)關(guān)系；死亡率與腸道病變記分顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.54；與相對(duì)增重率低度負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.44；卵囊產(chǎn)量與血便堆數(shù)、死亡率、腸道病變記分、相對(duì)增重率、ACI等評(píng)價(jià)參數(shù)間并無(wú)明顯的相關(guān)性；ACI與死亡率和腸道病變記分呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.79和-0.62，與相對(duì)增重率高度正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.88。

圖4　各品種雞感染球蟲(chóng)后的卵囊產(chǎn)量Fig.4　Oocyst production of different chicken breed after inoculating E.tenella

圖5　各品種雞抗球蟲(chóng)指數(shù)Fig.5　Anticoccidial index (ACI) of different chicken breed

3　討　論

本研究選用由國(guó)家級(jí)地方雞種基因庫(kù)(江蘇)保存的25個(gè)品種雞進(jìn)行了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染試驗(yàn)，基于血便記分、死亡率、相對(duì)增重率、病變記分、卵囊產(chǎn)量、ACI值等指標(biāo)，探討了不同品種雞對(duì)球蟲(chóng)的易感性差異。

所有品種雞感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)后均表現(xiàn)出盲腸球蟲(chóng)病典型的血便癥狀，但不同品種雞血便嚴(yán)重程度(包括排血便的開(kāi)始時(shí)間、血便數(shù)量和持續(xù)時(shí)間)存在一定程度的差異，這可能是因柔嫩艾美耳球蟲(chóng)在不同品種雞體內(nèi)裂殖生殖階段裂殖體形成時(shí)間、裂殖子逸出速度、裂殖生殖代次不同所致?？傮w來(lái)看，血便嚴(yán)重程度與死亡率、腸道病變記分、卵囊產(chǎn)量、相對(duì)增重率等各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)間并無(wú)相關(guān)關(guān)系。固始雞排血便時(shí)間最早，血便數(shù)量最多，但卵囊產(chǎn)量卻較低。金湖烏鳳雞和汶上蘆花雞血便持續(xù)時(shí)間較短，但汶上蘆花雞死亡率、腸道病變記分卻較高。因此，雖然血便嚴(yán)重程度在一定程度上可間接反映不同品種間易感性上的差異，但一般不以此作為評(píng)判指標(biāo)，僅將其視為感染發(fā)病的依據(jù)。

目前，國(guó)內(nèi)外研究工作者主要是采用死亡率、增重、平均腸道病變記分和卵囊產(chǎn)量等4個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)不同品種(系)雞對(duì)球蟲(chóng)的易感性。理論上講，這4個(gè)指標(biāo)間應(yīng)有很強(qiáng)相關(guān)性，即：死亡率、腸道病變記分和卵囊產(chǎn)量三者之間呈正相關(guān)關(guān)系，而它們均與增重呈負(fù)相關(guān)。但在實(shí)際試驗(yàn)中，結(jié)果并不盡然。其中，死亡率和增重的經(jīng)濟(jì)意義較高，是在抗病性評(píng)價(jià)中不可或缺的2個(gè)指標(biāo)。M.H.Pinard-Van Der Laan等[7]根據(jù)雞感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)后的死亡率、增重和腸道病變記分等指標(biāo)比較了2個(gè)埃及品系(Mandarah和Fayoumi)、1個(gè)洛島紅品系和2個(gè)白萊航品系(WLB21和WLDW)等5個(gè)遠(yuǎn)交品系雞對(duì)球蟲(chóng)的抗性或易感性，證實(shí)不同品系間對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的抗性存在較大的差異，其中Fayoumi系雞抵抗力最強(qiáng)，感染后未發(fā)生死亡，腸道病變記分低，增重較對(duì)照組僅下降了30%；WLDW系雞最易感，感染球蟲(chóng)后死亡率達(dá)27%，增重較對(duì)照組下降了85%；并認(rèn)為感染雞增重與死亡率和腸道病變記分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。本研究中相對(duì)增重率與死亡率間低度負(fù)相關(guān)，而與腸道病變記分并無(wú)相關(guān)關(guān)系。然而，N.Bumstead和B.Millard[8]根據(jù)死亡率、增重和卵囊產(chǎn)量評(píng)價(jià)了7個(gè)近交品系雞對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)和巨型艾美耳球蟲(chóng)的遺傳抗性。雖然不同品系間死亡率、增重和卵囊產(chǎn)量差異很大，但死亡率并不與增重呈負(fù)相關(guān)，也就是說(shuō)死亡率高的品系并不是增重最低的品系，表明增重不宜單獨(dú)作為抗性選擇指標(biāo)。

腸道病變記分反映了球蟲(chóng)對(duì)雞腸道的生理性損害程度，通常認(rèn)為是評(píng)價(jià)不同品種(系)雞對(duì)球蟲(chóng)易感性或抗性的一個(gè)良好指標(biāo)。一些研究結(jié)果表明柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染雞的腸道病變記分與增重呈負(fù)相關(guān)[7，15-16]，而D.P.Conway等[17]、L.A.Caron等[9]研究了不同雞種感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)后其增重和腸道病變記分之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)二者之間負(fù)相關(guān)性很弱。本研究中，腸道病變記分與相對(duì)增重率間無(wú)明顯的負(fù)相關(guān)。隱性白羽雞、汶上蘆花雞、清遠(yuǎn)麻雞、北京油雞及惠陽(yáng)胡須雞等平均腸道病變記分與相對(duì)增重率間呈負(fù)相關(guān)，但在大多數(shù)品種雞中相關(guān)性較差。如白耳黃雞和斗雞平均腸道病變記分最低，相對(duì)增重率并不高。此外，本研究中腸道病變記分與死亡率顯著正相關(guān)。如清遠(yuǎn)麻雞、瓢雞、惠陽(yáng)胡須雞、固始雞、隱性白羽雞死亡率較高，其腸道病變記分也較嚴(yán)重。

卵囊產(chǎn)量體現(xiàn)了球蟲(chóng)在動(dòng)物體內(nèi)的繁殖能力，間接反映雞對(duì)球蟲(chóng)易感程度，也是評(píng)價(jià)不同品種(系)雞對(duì)球蟲(chóng)的易感性的一個(gè)重要指標(biāo)。S.Lee等[18]和D.K.Kim等[19]研究表明卵囊產(chǎn)量與增重負(fù)相關(guān)，而N.Bumstead和B.Millard[8]、D.F.Zhang等[20]則發(fā)現(xiàn)兩者無(wú)相關(guān)性，本研究結(jié)果支持后者的觀點(diǎn)。固始雞、瑯琊雞、茶花雞卵囊產(chǎn)量較低，但固始雞死亡率較高，而相對(duì)增重率較低；狼山雞和文昌雞相對(duì)增重率較高，卵囊產(chǎn)量也較高；此外，卵囊產(chǎn)量與腸道病變記分之間也不完全正相關(guān)。如：隱性白羽雞腸道病變記分最高，但卵囊產(chǎn)量卻并不是最高；白耳黃雞和斗雞腸道病變記分最低，但卵囊產(chǎn)量卻較高。由于卵囊計(jì)數(shù)在不同時(shí)間間隔內(nèi)存在很大的變異性，因此以卵囊產(chǎn)量作為評(píng)價(jià)不同品種(系)雞對(duì)雞球蟲(chóng)感染的易感性或抗性的指標(biāo)也存在一定的局限性[21]。

鑒于評(píng)價(jià)指標(biāo)間相關(guān)性分析以及試驗(yàn)結(jié)果的復(fù)雜性，本研究中作者引入抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI)作為評(píng)價(jià)不同品種(系)雞對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的易感性或抗性的指標(biāo)，以期達(dá)到全面、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)不同品種(系)雞對(duì)球蟲(chóng)易感性的目的。ACI綜合了存活率、增重、腸道病變、卵囊產(chǎn)量、糞便記分等多項(xiàng)參數(shù)，通常認(rèn)為是評(píng)價(jià)雞球蟲(chóng)耐藥性或藥物效力的最可靠的指標(biāo)[20，22]。但是，不同的研究者在計(jì)算ACI時(shí)所采用的參數(shù)指標(biāo)、計(jì)算方法和評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)不盡相同。本研究根據(jù)目前國(guó)內(nèi)外通行的方法，采用存活率、增重、病變記分和卵囊產(chǎn)量等4個(gè)參數(shù)計(jì)算ACI，據(jù)此評(píng)價(jià)不同品種(系)雞對(duì)雞球蟲(chóng)的易感性或抗性。結(jié)果所有參試品種雞的ACI均低于160，表明它們對(duì)球蟲(chóng)均易感，但不同品種間ACI差異較大，說(shuō)明它們?cè)趯?duì)球蟲(chóng)的易感程度上存在較大的差異。

本研究基于ACI值，可將25個(gè)品種雞對(duì)球蟲(chóng)的易感性分為三個(gè)層次。狼山雞、藏雞、大骨雞、蕭山雞、文昌雞、安義瓦灰雞、白耳黃雞、仙居雞、大圍山微型雞和金湖烏鳳雞等10個(gè)品種的易感性低，表現(xiàn)為ACI值較高，未發(fā)生死亡或死亡率低，相對(duì)增重率較高，腸道病變記分較低，但除藏雞外卵囊產(chǎn)量均較高。隱性白羽雞、清遠(yuǎn)麻雞、惠陽(yáng)胡須雞、固始雞、北京油雞、瓢雞和汶上蘆花雞等7個(gè)品種的易感性高，表現(xiàn)為ACI值較低，除北京油雞外死亡率較高，相對(duì)增重率較低，除固始雞外腸道病變記分和卵囊產(chǎn)量均較高。其余8個(gè)品種的易感性中等。

4　結(jié)　論

不同品種雞對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的易感性存在較大差異。在參試的25個(gè)品種中，狼山雞、藏雞、大骨雞、蕭山雞、文昌雞、安義瓦灰雞、白耳黃雞、仙居雞、大圍山微型雞和金湖烏鳳雞等品種易感性低，而隱性白羽雞、清遠(yuǎn)麻雞、惠陽(yáng)胡須雞、固始雞、北京油雞、瓢雞、汶上蘆花雞等品種易感性高。

研究結(jié)果還表明，隱性白羽雞、清遠(yuǎn)麻雞、惠陽(yáng)胡須雞等肉用型品種較蛋肉兼用型品種易感，且以引進(jìn)品種隱性白羽雞易感性最高，這從一定程度上反映出我國(guó)地方雞種具有較強(qiáng)的抗病力。不同品種雞對(duì)球蟲(chóng)感染易感性差異的原因可能與雞種本身遺傳背景密切相關(guān)，如先天性免疫應(yīng)答能力、機(jī)體免疫因子、生化遺傳標(biāo)記及生長(zhǎng)繁殖性能等。

[1]MCDOUGALD L R.Intestinal protozoa important to poultry[J].PoultSci，1998，77(8)：1156-1158.

[2]ZHANG L，LIU R，MA L，et al.Eimeriatenella：expression profiling of toll-like receptors and associated cytokines in the cecum of infected day-old and three-week old SPF chickens[J].ExpParasitol，2012，130(4)：442-448.

[3]HASSAN M K，AFIFY M，ALY M M.Susceptibility of vaccinated and unvaccinated Egyptian chickens to very virulent infectious bursal disease virus[J].AvianPathol，2002，31(2)：149-156.

[4]ZEKARIAS B，TER HUURNE A A，LANDMAN W J，et al.Immunological basis of differences in disease resistance in the chicken[J].VetRes，2002，33(2)：109-125.

[5]MALEK M，HASENSTEIN J R，LAMONT S J.Analysis of chicken TLR4，CD28，MIF，MD-2，and LITAF genes in aSalmonellaenteritidisresource population[J].PoultSci，2004，83(4)：544-549.

[6]WIGLEY P.Genetic resistance toSalmonellainfection in domestic animals[J].ResVetSci，2004，76(3)：165-169.

[7]PINARD-VAN DER LAAN M H，MONVOISIN J L，PERY P，et al.Comparison of outbred lines of chickens for resistance to experimental infection with coccidiosis (Eimeriatenella)[J].PoultSci，1998，77(2)：185-191.

[8]BUMSTEAD N，MILLARD B.Genetics of resistance to coccidiosis：Response of inbred chicken lines to infection byEimeriatenellaandEimeriamaxima[J].BrPoultSci，1987，28(4)：705-715.

[9]CARON L A，ABPLANALP H，TAYLOR R L Jr.Resistance，susceptibility，and immunity toEimeriatenellain major histocompatibility (B) complex congenic lines[J].PoultSci，1997，76(5)：677-682.

[10]韓新疇.文昌雞、AA雞、海蘭雞和三黃雞對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)易感性研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2007，41(1)：39-40.

HAN X C.Study on susceptibility of Wenchang，AA，Hyline and three buff chickens toEimeriatenellainfection[J].JournalofTraditionalChineseVeterinaryMedicine，2007，41(1)：39-40.(in Chinese)

[11]竇新紅，童海兵，許明，等.不同品種地方雞對(duì)柔嫩艾美球蟲(chóng)的易感性分析[J].畜牧與獸醫(yī)，2009，41(12)：7-9.

DOU X H，TONG H B，XU M，et al.Susceptibilities of four local breeds of chickens toEimeriatenellainfection[J].AnimalHusbandry&VeterinaryMedicine，2009，41(12)：7-9.(in Chinese)

[12]MOREHOUSE N F，BARON R R.Coccidiosis：evaluation of coccidiostats by mortality，weight gains，and fecal scores[J].ExpParasitol，1970，28(1)：25-29.

[13]JOHNSON J，REID W M.Anticoccidial drugs：lesion scoring techniques in battery and floor-pen experiments with chickens[J].ExpParasitol，1970，28(1)：30-36.

[14]索勛，李國(guó)清.雞球蟲(chóng)病學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1998.

SUO X，LI G Q.Coccidia and Coccidiosis of Domestic Fowl[M].Beijing：China Agricultural University Publishing House，1998.(in Chinese)

[15]MEDAROVA Z，BRILES W E，TAYLOR R L Jr.Resistance，susceptibility，and immunity to cecal coccidiosis：effects of B complex and alloantigen system L[J].PoultSci，2003，82(7)：1113-1117.

[16]SWAGGERTY C L，GENOVESE K J，HE H，et al.Broiler breeders with an efficient innate immune response are more resistant toEimeriatenella[J].PoultSci，2011，90(5)：1014-1019.

[17]CONWAY D P，MCKENZIE M E，DAYTON A D.Relationship of coccidial lesion scores and weight gain in infections ofEimeriaacervulina，E.maximaandE.tenellain broilers[J].AvianPathol，1990，19(3)：489-496.

[18]LEE S，LILLEHOJ H S，PARK D W，et al.Effects of Pediococcus-and Saccharomyces-based probiotic (MitoMax?) on coccidiosis in broiler chickens[J].CompImmunolMicrobiolInfectDis，2007，30(4)：261-268.

[19]KIM D K，LILLEHOJ H S，HONG Y H，et al.Immune-related gene expression in two B-complex disparate genetically inbred Fayoumi chicken lines followingEimeriamaximainfection[J].PoultSci，2008，87(3)：433-443.

[20]ZHANG D F，SUN B B，YUE Y Y，et al.Anticoccidial activity of traditional Chinese herbal Dichroa febrifuga Lour.extract againstEimeriatenellainfection in chickens[J].ParasitolRes，2012，111(6)：2229-2233.

[21]REID W M.Relative value of oocysts counts in evaluating anticoccidial activity[J].AvianDis，1975，19(4)：802-811.

[22]WANG Z，SHEN J，SUO X，et al.Experimentally induced monensin-resistantEimeriatenellaand membrane fluidity of sporozoites[J].VetParasitol，2006，138(3-4)：186-193.

(編輯白永平)

The Susceptibility of Chinese Indigenous Chicken Breeds (Gallusgallusdomesticus) toEimeriatenellaInfection

LI Jian-mei1，LIU Mei1，SHEN Xin-yue1，CHENG Xu1，JI Zheng-jian2，LIU Dan-dan2，YIN Jian-mei1，YOU Su-lan1，SU Yi-jun1,TAO Jian-ping2，DAI Ya-bin1*

(1.PoultryInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Yangzhou225125，China；2.MinistryofEducationKeyLaboratoryforAvianPreventiveMedicine，CollegeofVeterinaryMedicine，YangzhouUniversity，Yangzhou225009，China)

This study was conducted to investigate the difference in susceptibility toEimeriatenellainfection among different chicken breeds (Gallusgallusdomesticus).Twenty-six-day-old，coccidia-free chickens of 24 Chinese indigenous chicken breeds and one commercial breed，recessive white，were divided into two infected groups and one non-infected control group randomly，15 chickens each group.The infected groups were inoculated into crop with 1×105sporulatedE.tenellaoocysts per bird.The mortality，relative rate of weight gain，cecal lesion scores，oocyst production and anticoccidial index (ACI) were measured as parameters for evaluation of the susceptibility of different breeds.Among 25 breeds，Langshan，Tibetan，Big bone，Xiaoshan，Wenchang，Anyi tile-like，Buff baier，Xianju，Daweishan mini and Jinhu silky chickens appeared clearly as the least susceptible，with the ACIs ranging from 56.80 to 85.76，showing no death or lower mortality，lower lesion score and higher relative rate of weight gain than other breeds，though higher oocyst production was found in those breeds except Tibetan chicken.Recessive white，Qingyuan partridge，Huiyang bearded，Gushi，Beijing oil，Piao and Wenshang barred chickens were the most susceptible with the ACIs ranging from -11.64 to 18.67，showing higher mortality (except Beijing oil chicken)，lower relative rate of gain，higher lesion scores and higher oocysts production (except Gushi chicken) than other breeds.The rest of the 8 breeds showed moderate susceptibility with the ACIs ranging from 29.81 to 53.36.There are significant differences in the susceptibility toE.tenellainfection among different chicken breeds.And the meat type breeds showed higher susceptibility than eggs and meat breeds.

Chinese indigenous chicken breed；recessive white chicken；Eimeriatenella；susceptibility

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.10.019

2016-04-25

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃重點(diǎn)專項(xiàng)(2016YFD0501600)；江蘇省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(現(xiàn)代農(nóng)業(yè))重點(diǎn)項(xiàng)目(BE2016347)；江蘇省動(dòng)物預(yù)防醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(K13042)

李建梅(1985-)，女，白族，云南大理人，助理研究員，碩士，主要從事家禽寄生蟲(chóng)病的防治研究，E-mail: jianmeili157@sina.com

戴亞斌，E-mail：ybdai@163.com

S852.723;S855.9

A

0366-6964(2016)10-2098-10