利用HPLC法建立五味子乙素的檢測方法及其方法學(xué)考察

王立英 黎婉瀅 林田夫 吳偉華 范干靈 張業(yè)敏

摘要：通過高效液相色譜法（HPLC法）建立五味子乙素的檢測方法及其方法學(xué)考察。利用高效液相色譜儀對五味子乙素進行測定，采用INERTSLLODS_SP C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇-水（77：23）；流速為1ml/min；檢測波長：254nm；柱溫：30℃。五味子乙素在6.72～15.12μg/ml范圍內(nèi)，峰面積與進樣量呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=29870x-9316.2，R2=0.9992。五味子乙素的平均回收率為92.9%。RSD=4.54%。本方法操作簡單，準(zhǔn)確可靠，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，可用來測定五味子乙素的含量。

關(guān)鍵詞：HPLC法；五味子乙素；檢測方法；方法學(xué)

中圖分類號：G642.0 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1674-9324（2016）38-0055-02

引言：

五味子為木蘭科植物五味子的干燥成熟果實，習(xí)稱“北五味子”，具有滋補強壯、增強非特異性免疫力、抗菌消炎及加強中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮過程等主要功效。在我國，五味子作為名貴中草藥，一直都在廣泛應(yīng)用。五味子中含有多種成分，包括木脂素、三萜、倍半萜、揮發(fā)油、多糖、黃酮、有機酸及氨基酸等，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥等藥理作用；對心血管系統(tǒng)具有保護心臟的作用。木脂素成分被認為是五味子中最主要的藥理活性成分。五味子乙素作為五味子木脂素中的主要活性成分之一，伴隨著對木脂素類成分的研究與應(yīng)用，現(xiàn)國內(nèi)外已發(fā)現(xiàn)五味子乙素具有抗腫瘤、抗氧化、保肝等藥理作用，廣泛應(yīng)用于保健品、護膚品等日常用品上，但中國藥典中對五味子乙素的含量測定方法仍未有系統(tǒng)性的歸納，使得市面上含五味子乙素的產(chǎn)品，其含量參差不齊。

就我國現(xiàn)狀對五味子乙素質(zhì)量技術(shù)監(jiān)管體制不完善的情況，建立及修改各項檢測方法是檢測五味子乙素含量時必不可少的條件。本實驗旨在通過HPLC法對五味子乙素建立測定方法及其方法學(xué)考察，歸納總結(jié)出最為準(zhǔn)確、穩(wěn)定、簡便及適用性最廣的檢測方案，為五味子乙素含量測定提供可靠依據(jù)，以及對其檢測提供相關(guān)的參考指標(biāo)。

一、實驗儀器與材料

（一）主要實驗儀器

電子天平；循環(huán)水式多用真空泵；超聲波清洗器；高效液相色譜儀。

（二）主要實驗材料

五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)品；甲醇；純凈水

二、方法

（一）色譜條件

INERTSLLODS_SP C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇-水（77：23）；流速為1ml/min；檢測波長：254nm；柱溫：30℃。

（二）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

精密稱取五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)品7.0mg，用少量甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，繼續(xù)加甲醇定容至刻度，搖勻，即得140μg/ml的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液①；精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液①15.0mL，置100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得21μg/ml的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液②；精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液①15ml，置于50ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得42μg/ml的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液③。標(biāo)準(zhǔn)儲備液均放置4℃的冰箱，備用。

（三）線性關(guān)系的考察

依次由五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)儲備液②中精密量取溶液，取樣量見表1（五味子乙素工作曲線各溶液加入量），用醇甲定容至25ml，0.45μ尼龍濾過。采用高效液相色譜儀在色譜條件中測定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，建立五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出線性回歸方程。

（四）方法學(xué)考察

1.精密度試驗。精密量取五味子標(biāo)準(zhǔn)儲備液① lml，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，0.45μ尼龍濾過。按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，分析色譜峰面積，測得五味子乙素濃度，計算RSD值。

2.重現(xiàn)性試驗。精密量取五味子標(biāo)準(zhǔn)儲備液① lml，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，平行制備6份，0.45μ尼龍濾過。按上述色譜條件進樣6次，分析色譜峰面積，測得五味子乙素濃度，計算RSD值。

3.穩(wěn)定性試驗。精密量取五味子標(biāo)準(zhǔn)儲備液① lml，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，0.45μ尼龍濾過。按上述色譜條件操作，分別在0、1、2、3、4、5h進樣檢測，分析色譜峰面積，測得五味子乙素濃度，計算RSD值。

4.加樣回收試驗。精密量取五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)儲備液③9mL，平均分成9份，置于10mL容量瓶中，再加入該含量的80%、100%和120%的五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)儲備液③，加甲醇定容至刻度，搖勻，0.45μ尼龍濾過。按上述色譜條件進樣，分析色譜峰面積，測得五味子乙素濃度，計算RSD值。

三、結(jié)果與討論

（一）五味子乙素線性關(guān)系

根據(jù)表1測得的色譜峰面積，與其進樣量呈良好的線性關(guān)系，可建立五味子乙素回歸方程為y=29870x-9316.2，R2=0.9992。表明五味子乙素在6.72～15.12μg/ml線性良好。結(jié)果見圖1。

由表5試驗結(jié)果得RSD為4.54%，表明該方法加樣回收率良好。

參考文獻：

[1]王文燕，陳建光.五味子的藥理作用及開發(fā)研究[J].北華大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2007，8（2）：128-133.

[2]潘瑤，林劍霞，李妍.五味子乙素的藥理作用研究概況[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報，2015，36（1）：60-62.