• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    超聲萃取—高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定大氣顆粒物中甾醇類化合物

    2016-10-21 12:14:25趙起越趙紅帥劉保獻王焱駱昉
    分析化學(xué) 2016年5期
    關(guān)鍵詞:甾醇

    趙起越 趙紅帥 劉保獻 王焱 駱昉

    摘要:采用超聲萃取與液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用,建立了快速測定大氣顆粒物中甾醇類化合物的方法。甾醇類化合物用甲醇超聲萃取,濃縮后使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析。采用Waters公司Atlantis C18色譜柱(100 mm × 2.1 mm,3 μm), 以乙腈和水混合流動相梯度洗脫,實現(xiàn)了膽甾醇、豆甾醇、菜油甾醇及β谷甾醇的分離。并在APCIMS/MS MRM模式下定量檢測。在選取的實驗條件下,方法回收率在80.3%97.7%之間,檢出限0.015 ng/m3,相對標準偏差小于15%,日內(nèi)及日間測定精密度小于20%。本方法具有較好的準確性及精密度,實際樣品的測試結(jié)果表明, 方法可以滿足大氣顆粒物中甾醇類化合物的定量分析要求。

    關(guān)鍵詞 :超聲萃?。桓咝б合嗌V串聯(lián)質(zhì)譜;大氣顆粒物;甾醇

    1 引 言

    甾醇是一類具有生物活性的物質(zhì),廣泛存在于自然界中,與動植物的新陳代謝密切相關(guān)[1,2]。大氣顆粒物中的甾醇類化合物主要包括膽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇及β谷甾醇等。有關(guān)研究表明:膽甾醇可以作為城市大氣中烤肉等烹飪源的示蹤化合物,而β谷甾醇可作為生物質(zhì)燃燒的有機示蹤化合物[3,4],因此大氣顆粒物中甾醇類化合物的分析測定對顆粒物源解析工作非常重要。

    甾醇的分析方法很多,主要有化學(xué)分析法、薄層色譜法、氣相色譜分析法及液相色譜分析法等?;瘜W(xué)分析法(包括毛地黃皂甙法及酶法)只能測定甾醇的總量,薄層色譜法靈敏度和重現(xiàn)性較差,氣相色譜直接進樣法進樣口溫度過高,易造成目標化合物的分解,液相色譜與紫外(Ultraviolet,UV)及蒸發(fā)光散射檢測器聯(lián)用法選擇性差,靈敏度較低[5,6]。

    氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析方法(Gas chromatographymass spectrometry, GC/MS)是常用的甾醇類化合物標準分析方法[7,8],該方法使用衍生化試劑與樣品進行衍生反應(yīng),應(yīng)用質(zhì)譜檢測器(MS)進行測定。方法流程長,試劑毒性大,檢測成本高,分析時間長。液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法無需衍生,檢測快速、準確,是進行甾醇類物質(zhì)含量測定的有效方法,食品、動物體中甾醇類化合物的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測工作已經(jīng)開展[9,10],但使用該方法進行大氣顆粒物中甾醇類化合物的分析尚無文獻報道。在前人工作基礎(chǔ)上,本研究采用超聲萃取與液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用,建立了測定大氣顆粒物中4種甾醇類化合物的方法。測量精密度小于20%。相比氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析甾醇類化合物的方法,本方法更加快速、經(jīng)濟,靈敏,為大氣顆粒物中甾醇類化合物的分析提供了較好的技術(shù)支持。

    2 實驗部分

    2.1 儀器與試劑

    Waters Alliance 2695高效液相色譜儀、Quattro Premier XE 三重四極桿質(zhì)譜儀(美國Waters公司);TDZ5WS多管架自動平衡離心機(湘儀離心機廠);氮氣蒸發(fā)儀(NEVAPTM111,美國 Organomation Associates公司)

    甲醇、二氯甲烷、正己烷和乙腈(色譜純,美國J T Baker公司),娃哈哈純凈水(市售),植物甾醇標準品膽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β谷甾醇(百靈威化學(xué)技術(shù)有限公司)。

    2.2 樣品來源

    2012年及2013年在北京市部分地區(qū)使用大流量采樣器采集大氣顆粒物樣品,濾膜為玻璃纖維及石英材質(zhì),采樣流速1.13 m3 /min,采樣時間24 h,濾膜面積50.24 cm2。為了去除干擾,濾膜在采樣前,在馬弗爐中550℃加熱6 h以上,空白濾膜經(jīng)實驗測定不含有目標化合物。

    2.3 標準溶液的配制

    取膽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇及β谷甾醇固體,配成濃度為1000 μg/mL的甲醇儲備液,再逐級稀釋成0.01,0.05,0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0和10 μg/mL的混合標準溶液。

    2.4 樣品前處理

    截取6.1544 cm2帶有顆粒物樣品的濾膜加入5 mL甲醇超聲萃取兩次,離心分離后,在氮氣環(huán)境中濃縮至1 mL, 經(jīng)0.22 μm濾膜過濾,進行儀器分析。

    2.5 色譜及質(zhì)譜條件

    Atlantis C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,3 μm,Waters公司),流動相:乙腈(A)和水(B),梯度洗脫程序為,0~10 min,90%B;10~11 min,90%~100%B;11~12 min,100%~90%B。柱溫40℃,流速0.8 mL/min,進樣體積:50.0 μL。使用大氣壓化學(xué)離子源(Atmospheric pressure chemical ionization,APCI),正離子掃描,多反應(yīng)監(jiān)測(Multiple reaction monitoring,MRM)模式;電暈電流:2.0 μA;離子源溫度:120℃;脫溶劑溫度:500℃;脫溶劑氣流量:600 L/h;錐孔氣流量:50 L/h。在樣品測試前,使用調(diào)諧液校正質(zhì)量軸。

    2.6 樣品測定

    用針泵直接進樣,確定了4種甾醇的質(zhì)譜分析參數(shù),列于表1。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 萃取條件的選擇

    3.1.1 萃取溶劑的選擇 考察甲醇、正己烷、二氯甲烷、正己烷二氯甲烷(1∶2, V/V)及甲醇與二氯甲烷不同比例混合溶劑(3∶2, 2∶1, 4∶1, V/V)對顆粒物樣品的萃取效果,結(jié)果見圖1。甲醇、二氯甲烷、正己烷等溶劑均可萃取顆粒物樣品中甾醇,但甲醇對4種甾醇萃取效率較高,另外,甲醇與流動相互溶性很好,故選取甲醇做萃取溶劑。

    3.1.2 萃取溶劑體積的選擇

    用特制裁刀截取6.1544 cm2的帶顆粒物樣品的濾膜,比較加入萃取溶液體積為5 mL, 6 mL, 8 mL, 10 mL及12 mL的萃取情況。結(jié)果表明, 隨著萃取溶劑量的增加,目標化合物萃取量有所增加,但體積加大,目標化合物濃度會降低,濃度過低必須經(jīng)過濃縮才能測定,且溶液體積增加濃縮損失加大。綜合各種因素,發(fā)現(xiàn)5 mL溶劑可以較完全地萃取顆粒物中的4種甾醇類化合物,同時樣品經(jīng)濃縮后的濃度在定量分析范圍之內(nèi),因此選取萃取溶劑體積5 mL進行實驗。

    3.1.3 超聲萃取次數(shù)及時間 實驗考察了超聲10, 20及30 min的萃取效果,比較了1次和2次、3次超聲的效率,發(fā)現(xiàn)隨著超聲時間的延長及次數(shù)的增加,萃取量增大。但超聲時間從20 min延長至30 min時,萃取量增加很少,而花費時間較多。超聲3次比2次萃取量大一些,但轉(zhuǎn)移、濃縮的損失也增加,因此選擇超聲2次、每次20 min萃?。ㄒ妶D2及圖3),回收率實驗表明這種萃取可以滿足顆粒物中甾醇類化合物的分析要求(表3)。

    3.2 色譜條件的選擇

    3.2.1 色譜柱的選取

    甾醇類化合物分子極性較弱,可以選取反相色譜柱進行分離。本研究比較了6種C18柱(Symmetry C18 , Agilent Eclipse XDBC18, XTerra C18, Xbridge C18, Atlantis C18和Hypersil ODS柱)及1種C8柱(XTerra C8)對4種植物甾醇的分離情況。結(jié)果表明, 大多數(shù)色譜柱可以分離膽甾醇及β谷甾醇,不能分開菜油甾醇及豆甾醇。有文獻報道在使用乙腈/異丙醇做流動相時,Waters Symmetry C18色譜柱近1 h可分開上述兩種化合物,但考慮異丙醇粘度較大,不適于做質(zhì)譜分析[11]。本實驗采用Atlantis C18色譜柱, 在乙腈、水做流動相時, 對4種甾醇類化合物實現(xiàn)了較好的分離,尤其是菜油甾醇及豆甾醇的分離度較大,同時靈敏度也較高,優(yōu)于前期報道[9,11~15]。

    3.2.3 色譜柱柱溫對分離的影響

    柱溫是影響分離度及柱效的主要原因之一,溫度升高,溶質(zhì)和溶劑分子擴散加快,且流動相的傳質(zhì)阻力減小,化合物容量因子變小??疾炝酥鶞?5℃, 30℃, 35℃, 40℃, 45℃及50℃時4種甾醇的分離情況。4種甾醇化合物的容量因子隨柱溫變化如圖5所示。柱溫過高會損壞色譜柱填料,縮短柱子使用壽命。在同等分離效果下,綜合對色譜柱性能的保護和柱效的考慮,選擇40℃作為4種甾醇的分析的色譜條件。在此溫度下,甾醇化合物分離較好,靈敏度較高,且分析時間適當(dāng)(15 min內(nèi)完成分析)。

    3.2.4 流速的選取

    流速的選擇綜合了目標化合物的分離、檢測靈敏度及色譜峰的保留時間來確定。本研究進行了幾種流速(0.3, 0.5, 0.7和0.8 mL/min)的對比實驗,發(fā)現(xiàn)在較低的流速(如0.3 mL/min)下4種甾醇的保留時間較長,靈敏度較差。隨著流速的提高,保留時間逐漸縮短,檢測靈敏度提高。至流速達到0.8 mL/min時,難分離物質(zhì)對分離度適當(dāng),靈敏度較好,保留時間也比較合適。綜合考慮各種因素,選擇0.8 mL/min的流速。

    3.2.5 進樣量的選取

    分別選取5, 10, 15, 20, 30和50 μL樣品進行分析,結(jié)果表明,色譜峰響應(yīng)值會隨著進樣量增加而增加,為保證有較高的分析靈敏度,最終選取進樣量50 μL。

    3.3 質(zhì)譜條件的選擇

    3.3.1 離子源及電離模式的選取

    3.3.2 電暈電流強度的優(yōu)化 質(zhì)譜的電暈電流強度與檢測靈敏度有一定關(guān)系,本研究進行了6種電流強度(1, 2, 3, 4, 5及6 μA)的實驗,發(fā)現(xiàn)電暈電流為2.0 μA時, 4種甾醇的信號強度最高,3.0 μA時次之,其余的條件較低(圖6),故選用2.0 μA進行實驗。

    3.3.3 脫溶劑氣溫度的優(yōu)化 本研究考察了脫溶劑氣溫度400℃,500℃,600℃,800℃的分析效果,發(fā)現(xiàn)不同溫度,實驗結(jié)果接近,其中以500℃為最好,最終選取500℃為脫溶劑氣溫度。

    3.3.4 脫溶劑氣流速的優(yōu)化

    質(zhì)譜的脫溶劑氣流速對分析靈敏度有一定影響,本研究進行了6種氣流流速(400, 500,600,700,800及1000 mL/min)的實驗,發(fā)現(xiàn)脫溶劑氣流速600 mL/min時信噪比最高,測定靈敏度最好,故選用該條件進行實驗(圖7)。

    3.4 方法確證

    3.4.1 標準曲線及檢出限 取2.3節(jié)配制的甾醇混合標準溶液,以目標組分的響應(yīng)值y對相應(yīng)的質(zhì)量濃度x(μg/mL)繪制標準曲線,并以10倍信噪比計算方法的定量限(LOQ),以3倍信噪比計算方法檢測限(LOD)列于表2。在給定的濃度范圍內(nèi),4種甾醇的線性關(guān)系良好,檢出限與衍生氣相色譜法相當(dāng)[4],可以滿足大氣顆粒物中甾醇類化合物的分析要求。

    3.4.2 方法的準確度

    向大氣顆粒物樣品中添加3個濃度水平的4種甾醇類化合物的混合標準溶液,制成低、中及高濃度的加標樣品,按照上述方法進行前處理,每個濃度水平平行操作6次,計算回收率及相對標準偏差(RSD),結(jié)果列于表3。大氣顆粒物中4種甾醇類化合物的3個濃度水平加標回收率均大于80%,6個平行樣品的相對標準偏差小于15%,方法準確度符合有機分析要求。

    3.4.3 方法的精密度 對兩種不同含量的大氣顆粒物樣品日內(nèi)連續(xù)測定6次,并進行3日內(nèi)的重復(fù)測定,結(jié)果見表4。4種甾醇類化合物的日內(nèi)重復(fù)測定標準偏差小于10%,3天的重復(fù)測定標準偏差小于20%,方法日內(nèi)及日間測定精密度較好。

    3.5 實際樣品的測定

    使用上述方法,對北京城區(qū)采集的大氣顆粒物樣品進行分析,結(jié)果見表5,分析譜圖如圖8。由表5可知,北京城區(qū)的大氣顆粒物樣品中可以檢測到4種甾醇類化合物,本方法滿足科學(xué)研究及監(jiān)測管理需求。

    4 結(jié) 論

    本實驗通過對色譜及質(zhì)譜條件進行優(yōu)化,并對大氣顆粒物樣品前處理方法進行篩選,建立了大氣顆粒物中4種甾醇類化合物的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。本方法不需衍生反應(yīng),操作簡單,分析快速,4種甾醇類化合物的加標回收率大于80%,相對標準偏差小于15%,方法檢測限能夠滿足大氣顆粒物中甾醇類物質(zhì)檢測分析的要求,適于大量樣品的分析監(jiān)測。使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析大氣顆粒物中的甾醇類化合物,拓展了環(huán)境中該類物質(zhì)分析的新思路,對后續(xù)的監(jiān)測管理工作提供了技術(shù)支持。

    References

    1 Naumoska K, Vovk I. J. Chromatogr. A, 2015, 1381: 229-238

    2 Huang L Y, Cao Y Y, Xu H, Chen G N. J. Sep. Sci., 2011, 34: 385-392

    3 Fraser M P, Cass G R, Simoneit B R T. Atmos. Environ., 1999, 33: 2715-2724

    4 HE LingYan, HU Min, HUANG XiaoFeng, ZHANG YuanHang. Acta Scientiae Circumstantiae, 2005, 25(1): 23-29

    何凌燕, 胡 敏, 黃曉鋒, 張遠航. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報, 2005, 25(1): 23-29

    5 Cimpoiu C, Hosu A, Hodisan S. J. Pharmaceu. Biomed. Anal., 2006, 41(2): 633-637

    6 ZHANG LiXia, BI YanLan, ZHANG KangYi. Grain and oil Processing and Food Machinery, 2006, 2: 53-55

    張麗霞, 畢艷蘭, 張康逸. 糧油加工與食品機械, 2006, 2: 53-55

    7 GB/T252232010. Determination of the Content of Cholesterol and Total Cholesterol in Animal and Vegetable Oils. National Standards of the People′s Republic of China

    動植物油脂. 甾醇和總甾醇含量的測定. 中華人民共和國國家標準. GB/T252232010

    8 YC/T4712013. Determination of Ergosterol in Tobacco and Tobacco Products. Occupational Standards of Tobacco Industry

    煙草及煙草制品麥角甾醇的測定. 煙草行業(yè)標準. YC/T4712013

    9 Igarashi F, Hikiba J, Ogihara M H, Nakaoka T, Suzuki M, Kataoka H. Anal. Biochem., 2011, 419: 123-132

    10 Hou C T, Wang R H, Zou Y Y, Song X N, Liu H X, Li F H, Xu L C. Food Sci., 2013, 34(14): 301-305

    11 DAI Jun, CHEN ShangWei, FANG Tao, WANG LiPing, GU XiaoHong, TANG Jian. Chinese J. Anal. Chem., 2005, 33(12): 1725-1729

    戴 軍, 陳尚衛(wèi), 方 濤, 王立平, 顧小紅, 湯 堅. 分析化學(xué), 2005, 33(12): 1725-1729

    12 Lu B Y, Zhang Y, Wu X Q, Shi J Y. Anal. Chim. Acta, 2007, 588: 50-63

    13 Madawala S R P, Andersson R E, Jastrebova J A, Almeida M, Dutta P C. Pol. J. Food Nutri. Sci., 2012, 62(3): 159-169

    14 XU WenLin, SHA Ou, QIAN JunHu, LU Ping. Journal of Instrumental Analysis, 2003, 22(6): 98-100

    許文林, 沙 鷗, 錢俊紅, 魯 萍. 分析測試學(xué)報, 2003, 22(6): 98-100

    15 Ito N, Hakamata H, Kusu F. Anal. Methods, 2010, 2: 174-179

    16 DUAN YuanXing, ZHANG Tao, CHEN JinXiong, YANG GuangYu, LIU Wei, XU Yong, ZHANG Xia. Applied Chemical Industry, 2013, 42(5): 955-957

    段沅杏, 張 濤, 陳進雄, 楊光宇, 劉 巍, 許 永, 張 霞. 應(yīng)用化工, 2013, 42(5): 955-957

    17 CaabateDíaz B, Carretero A S, FernándezGutiérrez A, Vega A B, Frenich A G, Vidal J L M, Martos J D. Food Chem., 2007, 102: 593-598

    Abstract A rapid analytical method was developed for the determination of 4 sterols in atmospheric particles by ultrasonic extraction coupled with high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry (HPLCMS /MS). After extraction by methanol and enrichment, sterols were separated on an Atlantis C18 column (100 mm×2.1 mm, 3 μm) with acetonitrile and water served as mobile phase in gradient elution, then determined by HPLCMS/MS using atmospheric pressure chemical positive ionization (APCI+) and multiple reaction monitoring (MRM). Parameters of chromatography and mass spectrometry, as well as conditions of ultrasonic extraction were optimized. The developed method provided good linearity (R>0.99) and high recoveries (80.3%-97.7%) for 4 sterols. Low detection limits were obtained as 0.015 ng/m3, with RSD less than 15% (n=6). Comparing with GC/MS, this method was more rapid, sensitive and economical because the derivation was eliminated from the procedure, thus saving a lot of resources. Samples of atmospheric particles were detected using this method, and the results indicated that this method could meet the requirements for quantitative analysis of sterols in atmosphere.

    Keywords Ultrasonic extraction; High performance liquid chromatographytandem mass spectrometry; Atmospheric particles; Sterol

    猜你喜歡
    甾醇
    高甾醇植物油研究現(xiàn)狀
    植物甾醇提取分離方法研究進展
    火麻仁植物甾醇含量測定及腸道菌培養(yǎng)對醇干預(yù)的劑量響應(yīng)
    β-谷甾醇和豆甾醇對小鼠急性結(jié)腸炎的治療作用研究
    GC-MS/FID法分析玉米胚芽油中的甾醇和甾醇酯
    豆甾醇在葵花油水包油乳狀液中抗氧化作用的研究
    玉米植物甾醇的精制、結(jié)構(gòu)表征及GC-MS分析
    補充植物甾醇可以降低膽固醇
    保健與生活(2014年4期)2014-04-29 12:19:18
    微波輔助植物甾醇油酸酯的酶促催化合成
    植物油中甾醇含量、存在形式及其在摻偽檢驗中的作用
    一个人看视频在线观看www免费| 久久精品国产亚洲av涩爱| 内地一区二区视频在线| 亚洲欧美日韩东京热| 成人毛片60女人毛片免费| 日韩制服骚丝袜av| 91精品伊人久久大香线蕉| 干丝袜人妻中文字幕| 日韩视频在线欧美| 成人亚洲精品一区在线观看 | 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 高清视频免费观看一区二区 | 麻豆成人av视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 黑人高潮一二区| av在线播放精品| 亚洲精品第二区| 国产综合懂色| 亚洲第一区二区三区不卡| 看非洲黑人一级黄片| 91久久精品国产一区二区三区| 午夜免费激情av| 亚洲国产精品国产精品| 黄色一级大片看看| 热99在线观看视频| 成人无遮挡网站| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 少妇人妻一区二区三区视频| 18禁在线播放成人免费| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产在线男女| 久久99精品国语久久久| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 国产免费又黄又爽又色| 欧美三级亚洲精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 最近2019中文字幕mv第一页| 欧美潮喷喷水| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 99热这里只有是精品50| .国产精品久久| 日韩伦理黄色片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 少妇人妻精品综合一区二区| 97超碰精品成人国产| 日韩av不卡免费在线播放| 国产av不卡久久| 国内精品宾馆在线| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲av日韩在线播放| 亚州av有码| 性色avwww在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产一级毛片七仙女欲春2| 美女黄网站色视频| 亚洲最大成人手机在线| 午夜免费观看性视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 91精品伊人久久大香线蕉| 精品久久久久久成人av| 免费大片黄手机在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 99九九线精品视频在线观看视频| 欧美丝袜亚洲另类| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩精品青青久久久久久| 少妇的逼好多水| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 麻豆成人av视频| 国产精品无大码| 国产高清国产精品国产三级 | 男女视频在线观看网站免费| 老师上课跳d突然被开到最大视频| h日本视频在线播放| 精品国产三级普通话版| 一区二区三区免费毛片| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲精品第二区| 18+在线观看网站| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 97在线视频观看| 亚洲人与动物交配视频| 日韩成人伦理影院| 日韩伦理黄色片| 亚洲高清免费不卡视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 色网站视频免费| 美女国产视频在线观看| 大香蕉97超碰在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩欧美精品v在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久人人爽人人片av| kizo精华| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 精品久久久久久久末码| 午夜久久久久精精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产成人精品婷婷| 天堂俺去俺来也www色官网 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 亚洲人与动物交配视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 色吧在线观看| 三级毛片av免费| 国产亚洲精品av在线| av国产免费在线观看| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 亚洲一区高清亚洲精品| 一个人看的www免费观看视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 最近手机中文字幕大全| 中文字幕av在线有码专区| av在线观看视频网站免费| 一区二区三区四区激情视频| 直男gayav资源| 全区人妻精品视频| 亚洲国产欧美人成| 熟妇人妻不卡中文字幕| 一区二区三区高清视频在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品福利在线免费观看| 精品久久久精品久久久| 少妇的逼水好多| 久久99蜜桃精品久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| or卡值多少钱| 亚洲不卡免费看| 插逼视频在线观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久精品久久久久久久性| 久久鲁丝午夜福利片| 日韩制服骚丝袜av| 秋霞在线观看毛片| 波野结衣二区三区在线| 色综合站精品国产| 国产久久久一区二区三区| 国产老妇女一区| 我的女老师完整版在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 午夜视频国产福利| av在线蜜桃| 91久久精品电影网| 日本免费a在线| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲av免费在线观看| 国产高清国产精品国产三级 | 午夜精品国产一区二区电影 | 老司机影院成人| 婷婷色av中文字幕| 久久99热6这里只有精品| 久久草成人影院| 午夜激情欧美在线| 欧美成人午夜免费资源| 精品久久久久久成人av| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 听说在线观看完整版免费高清| 晚上一个人看的免费电影| 大陆偷拍与自拍| 精品久久国产蜜桃| 99热这里只有精品一区| ponron亚洲| 久久综合国产亚洲精品| 国产成人精品一,二区| 男女边摸边吃奶| 综合色丁香网| 日韩电影二区| 精品国产三级普通话版| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国内精品美女久久久久久| av一本久久久久| 特大巨黑吊av在线直播| 国产爱豆传媒在线观看| 一夜夜www| 免费黄频网站在线观看国产| 美女大奶头视频| 亚洲最大成人手机在线| 看十八女毛片水多多多| 日韩强制内射视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美高清成人免费视频www| 99久国产av精品| 国产亚洲精品av在线| 亚洲色图av天堂| 亚洲自拍偷在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 成人欧美大片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 毛片女人毛片| 国产毛片a区久久久久| 精品午夜福利在线看| 国产单亲对白刺激| 久久久久久久久中文| 禁无遮挡网站| 国产亚洲最大av| 婷婷色综合www| 日本一本二区三区精品| 九草在线视频观看| 国产 一区精品| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲一区高清亚洲精品| 少妇高潮的动态图| 国产成人免费观看mmmm| 好男人视频免费观看在线| 国产大屁股一区二区在线视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 精品久久久久久久久亚洲| 18禁在线播放成人免费| 免费在线观看成人毛片| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产精品.久久久| 久久精品人妻少妇| 午夜免费激情av| 特级一级黄色大片| 国产精品一区二区三区四区久久| 内地一区二区视频在线| 免费看a级黄色片| 国产在视频线精品| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 男女边摸边吃奶| 性色avwww在线观看| 亚洲,欧美,日韩| av又黄又爽大尺度在线免费看| 啦啦啦啦在线视频资源| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 99久久中文字幕三级久久日本| 美女高潮的动态| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 99re6热这里在线精品视频| 一边亲一边摸免费视频| av线在线观看网站| 91av网一区二区| 亚洲最大成人手机在线| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 日韩亚洲欧美综合| 人体艺术视频欧美日本| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产成人一区二区在线| 一级毛片电影观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 毛片女人毛片| 高清午夜精品一区二区三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 97超视频在线观看视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产精品国产三级专区第一集| 99久久精品国产国产毛片| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 日韩欧美 国产精品| 淫秽高清视频在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 五月伊人婷婷丁香| 三级国产精品片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 国产在视频线在精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 三级毛片av免费| 最近中文字幕2019免费版| 99九九线精品视频在线观看视频| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲av免费在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 国产黄频视频在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日本黄大片高清| 欧美成人a在线观看| videos熟女内射| 26uuu在线亚洲综合色| 午夜激情欧美在线| 男女啪啪激烈高潮av片| 日韩 亚洲 欧美在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美高清成人免费视频www| 久久久国产一区二区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 97精品久久久久久久久久精品| 精品国产露脸久久av麻豆 | 午夜视频国产福利| 亚洲国产欧美在线一区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产 一区精品| 久久人人爽人人片av| 中文天堂在线官网| 乱系列少妇在线播放| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲精品视频女| av卡一久久| 一级爰片在线观看| av网站免费在线观看视频 | 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲性久久影院| 热99在线观看视频| 一本一本综合久久| 免费av观看视频| 婷婷色综合大香蕉| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲国产精品国产精品| 大话2 男鬼变身卡| 日韩大片免费观看网站| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲在久久综合| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 精品久久久久久久久亚洲| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 免费在线观看黄色视频的| 2021少妇久久久久久久久久久| 午夜免费男女啪啪视频观看| 免费在线观看黄色视频的| 久久久久网色| 免费在线观看完整版高清| av福利片在线| 久久 成人 亚洲| 97在线人人人人妻| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲国产欧美网| 国产淫语在线视频| 午夜日本视频在线| 观看美女的网站| 男人舔女人的私密视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 99九九在线精品视频| 天天影视国产精品| 日韩av不卡免费在线播放| 久久精品久久精品一区二区三区| 少妇精品久久久久久久| 香蕉国产在线看| 韩国高清视频一区二区三区| 久久99蜜桃精品久久| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 免费观看在线日韩| 亚洲国产色片| 一级片免费观看大全| 女性被躁到高潮视频| 满18在线观看网站| 一二三四在线观看免费中文在| 高清黄色对白视频在线免费看| 日本欧美国产在线视频| 香蕉丝袜av| 中文字幕精品免费在线观看视频| 制服丝袜香蕉在线| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品国产三级专区第一集| 秋霞在线观看毛片| 国产精品一国产av| 久久久久久人妻| 欧美bdsm另类| 国产深夜福利视频在线观看| 日韩大片免费观看网站| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 十八禁高潮呻吟视频| 精品久久久久久电影网| 91成人精品电影| 中文字幕色久视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产人伦9x9x在线观看 | 精品少妇内射三级| 黑丝袜美女国产一区| videossex国产| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲av免费高清在线观看| 国产成人精品久久二区二区91 | 久久精品久久久久久久性| 日本av免费视频播放| 国产精品蜜桃在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 97在线人人人人妻| 国产精品一国产av| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 免费观看无遮挡的男女| 日本91视频免费播放| 国产精品成人在线| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲久久久国产精品| 国产成人精品婷婷| 成年av动漫网址| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 大片电影免费在线观看免费| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲成人av在线免费| 男女高潮啪啪啪动态图| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲精品视频女| 美女福利国产在线| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 久久99热这里只频精品6学生| 精品一区二区三卡| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 大香蕉久久网| 精品第一国产精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲久久久国产精品| 免费观看无遮挡的男女| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲av综合色区一区| 久久精品国产自在天天线| av线在线观看网站| 2018国产大陆天天弄谢| 欧美+日韩+精品| 一区二区三区四区激情视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 美女国产高潮福利片在线看| freevideosex欧美| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲成国产人片在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 亚洲三级黄色毛片| 国产 一区精品| 中文字幕亚洲精品专区| 各种免费的搞黄视频| 精品人妻在线不人妻| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| av卡一久久| 国产成人精品久久久久久| 九色亚洲精品在线播放| 制服诱惑二区| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美日韩成人在线一区二区| 欧美日韩av久久| 色94色欧美一区二区| 最近中文字幕高清免费大全6| 一区福利在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| freevideosex欧美| 国产精品99久久99久久久不卡 | 在线看a的网站| av国产久精品久网站免费入址| 大香蕉久久网| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲,欧美精品.| 一级毛片电影观看| h视频一区二区三区| 在线观看三级黄色| 丝袜喷水一区| 少妇人妻久久综合中文| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲精品第二区| 麻豆av在线久日| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久免费观看电影| 一二三四在线观看免费中文在| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| av女优亚洲男人天堂| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲精品在线美女| 欧美日韩视频精品一区| 黄色 视频免费看| 婷婷色综合大香蕉| 久久人人97超碰香蕉20202| 少妇人妻久久综合中文| 三上悠亚av全集在线观看| 精品国产一区二区久久| 伊人久久国产一区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 制服人妻中文乱码| 午夜福利一区二区在线看| 国产视频首页在线观看| 久久av网站| 看免费av毛片| 99re6热这里在线精品视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 99re6热这里在线精品视频| 观看美女的网站| 捣出白浆h1v1| 中国国产av一级| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 国产成人精品一,二区| 成人国语在线视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 日日撸夜夜添| 亚洲伊人久久精品综合| 男人舔女人的私密视频| 日韩精品有码人妻一区| 中文字幕亚洲精品专区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 最新的欧美精品一区二区| 日韩一区二区三区影片| 婷婷色综合www| 亚洲av日韩在线播放| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲四区av| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产乱来视频区| 香蕉国产在线看| 欧美日韩亚洲高清精品| 一区二区三区激情视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美日韩亚洲高清精品| 看非洲黑人一级黄片| av线在线观看网站| 亚洲综合色惰| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | av电影中文网址| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 人妻少妇偷人精品九色| 麻豆av在线久日| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 在线观看免费日韩欧美大片| 免费观看a级毛片全部| 在线观看www视频免费| 999精品在线视频| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 日韩不卡一区二区三区视频在线| 999久久久国产精品视频| 国产爽快片一区二区三区| 久久精品国产自在天天线| 搡女人真爽免费视频火全软件| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久久久人妻| 美女国产视频在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 有码 亚洲区| kizo精华| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久99热这里只频精品6学生| a级片在线免费高清观看视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久久久久久精品精品| 国产精品av久久久久免费| 国产 精品1| 亚洲精品视频女| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产成人aa在线观看| av在线观看视频网站免费| 香蕉精品网在线| 亚洲国产av影院在线观看| tube8黄色片| 91久久精品国产一区二区三区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产在线免费精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品亚洲成a人片在线观看| 久久久精品94久久精品| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久久久久久久久久久大奶| 久久人人爽人人片av| av免费观看日本| 久久精品国产亚洲av天美| 国产有黄有色有爽视频| 国产片特级美女逼逼视频| av在线观看视频网站免费| 中文字幕制服av| 各种免费的搞黄视频| av视频免费观看在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产高清不卡午夜福利| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美日韩一级在线毛片| 国产成人精品一,二区| 久久综合国产亚洲精品| 大陆偷拍与自拍| 狂野欧美激情性bbbbbb| 免费观看a级毛片全部| 丝袜喷水一区| 中国国产av一级| 大陆偷拍与自拍| 一二三四在线观看免费中文在| 免费人妻精品一区二区三区视频| 美女视频免费永久观看网站| 色吧在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲精品久久午夜乱码| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 五月天丁香电影|