不同干燥方式對(duì)瑞香狼毒總黃酮提取及抑菌活性的影響

孫永林 湯尚文 李玉奇

摘要 以瑞香狼毒為原料，通過烘干、紅外干燥及微波干燥3種方式將瑞香狼毒干燥至恒重，考察不同的干燥方式對(duì)瑞香狼毒總黃酮含量及抑菌活性的影響，結(jié)果表明，通過紅外干燥處理提取的黃酮類化合物含量最高，烘干處理次之，而通過微波干燥方式前處理提取的黃酮類化合物含量最低。紅外干燥處理后提取的黃酮類化合物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制效果強(qiáng)于其他2種方式，可能與紅外干燥處理后得到的黃酮類化合物含量較高有關(guān)。

關(guān)鍵詞 干燥方式；瑞香狼毒；總黃酮；提?。灰志钚?/p>

中圖分類號(hào) R285 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2016）09-0282-02

Abstract The roots of Stellera chamaejasme L. were used as the raw materials to measure the effects of different drying methods（drying through the electric drum wind drying oven，infrared and microwave drying）on the flavonoids content and the antimicrobial activity. Results showed that the highest content of flavonoids was obtained via infrared drying，the next was the drying processing via the electric drum wind drying oven，and the lowest was the pretreatment via microwave drying. Additionally，the antimicrobial effect of the flavonoids on Escherichia coli. and Staphyloccocus aureus via infrared drying was stronger than that through the other two drying methods，suggested that stronger antimicrobial activity may be related to the higher flavonoids content obtained via the infrared drying pretreatment.

Key words drying methods；Stellera chamaejasme L.；flavonoids；extract；antimicrobial activity

瑞香狼毒又名斷腸草、紅狼毒，為瑞香科狼毒屬多年生草本植物瑞香狼毒（Stellera chamaejasme L.）的根。其味苦辛、有毒，具有逐水、破積、殺蟲、止痛等功效[1]。研究發(fā)現(xiàn)，黃酮類化合物是瑞香狼毒的主要化學(xué)成分，包括雙二氫黃酮、狼毒色原酮、二氫瑞香素乙、瑞香素乙和異狼毒素等[2-5]，在抗菌、抗病毒、抗癌、抗腫瘤、殺滅寄生蟲及農(nóng)業(yè)害蟲等方面具有獨(dú)特效能[6-13]。

中藥的干燥方式對(duì)藥材的質(zhì)量有著直接的影響，《本草蒙荃》記載“凡藥藏貯宜提防，倘陰干、暴干、烘干未盡其濕度，則蛀蝕霉垢朽爛不免為殃”。目前，從瑞香狼毒的根中提取黃酮類化合物一般采用將根置于干燥箱中烘干至恒重，或在陰涼處放置至完全干燥，有的則先將根陰干，然后再放入烘箱中烘干至材料發(fā)脆，因材料處理方式不同，導(dǎo)致黃酮類化合物的提取率也存在較大的差異。本研究旨在通過比較不同的干燥方式對(duì)瑞香狼毒總黃酮含量及抑菌活性的影響，篩選出一種合適的材料前處理方法，為提高總黃酮類化合物的提取效率提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑。瑞香狼毒：安徽省亳州市珍益堂中藥材有限公司；乙醇、亞硝酸鈉和硝酸鋁：分析純，襄陽(yáng)市盈達(dá)化工儀器有限公司。

1.1.2 儀器。紫外可見分光光度計(jì)：UV-2550型，日本島津公司；紅外水分快速測(cè)定儀：MS-70型，日本AND公司；電熱干燥箱：上海博迅，GZX-9246MBE；中藥切片機(jī)：永歷DYQ888，瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司。

1.2 方法

1.2.1 瑞香狼毒根的烘干處理。將瑞香狼毒根在中藥切片機(jī)上切成3 mm的切片，分別在電熱鼓風(fēng)干燥箱、紅外水分快速測(cè)定儀及微波爐內(nèi)烘干至恒重（其中電熱鼓風(fēng)干燥箱和紅外水分快速測(cè)定儀的溫度均設(shè)定為60 ℃），粉碎后，過60目篩，備用。

1.2.2 總黃酮類化合物的提取及含量測(cè)定。準(zhǔn)確稱取烘干至恒重的瑞香狼毒粉末樣品100 g裝入索氏提取器，依次加入石油醚和95 %乙醇各200 mL，分別回流24 h，減壓濃縮得浸膏。取浸膏5 g，加入蒸餾水50 mL，在60 ℃水浴條件下加熱2 h，冷卻至室溫，過濾后棄濾液，重復(fù)3次，溶劑揮干后得到總黃酮類化合物。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：精確稱取烘干至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品15 mg，用30 %乙醇溶解并定容至100 mL，濃度為0.15 mg/mL。準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，分別加入5 % NaNO2溶液0.3 mL，搖勻后靜置5 min。再加入10 % Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻后靜置6 min。加入1.0 mol/L NaOH溶液2 mL，用30%乙醇定容至刻度，混勻后靜置15 min，于510 nm處測(cè)定吸光度，以零管為空白對(duì)照，以蘆丁含量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品的測(cè)定：稱取待測(cè)樣品5 mg，用30%乙醇定容定容至10 mL，取適宜體積的待測(cè)溶液，加入5 % NaNO2溶液0.3 mL，搖勻后靜置5 min。再加入10% Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻后靜置6 min。加入1.0 mol/L NaOH溶液2 mL，用30%乙醇定容至10 mL，混勻后靜置15 min，于510 nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品中總黃酮類化合物的含量。

1.2.3 總黃酮類化合物抑菌活性測(cè)定。瑞香狼毒總黃酮類化合物的抑菌活性測(cè)定采用抑菌圈法[14]。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli.）、金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus. Frankland）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)用Excel 2003軟件計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，用Origin 8.0軟件作圖，并用SPSS 17.0分析不同處理之間的差異顯著性（P<0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

用蘆丁做標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，通過最小二乘法作線性回歸可得方程：y=1.116 9x+0.028 8，R2=0.995 1。從圖中可以看出，在0～0.6 mg范圍內(nèi)，溶液的吸光值與蘆丁含量線性關(guān)系良好。

2.2 不同干燥方式對(duì)瑞香狼毒黃酮類化合物含量的影響

不同的干燥方式對(duì)瑞香狼毒黃酮類化合物含量的影響結(jié)果見圖2，從圖中可知，黃酮類化合物的含量在烘干、紅外干燥和微波干燥條件下有顯著差異，其中通過紅外干燥處理提取的黃酮類化合物含量最高，為17.76 mg/g，烘干處理方式得到的黃酮類化合物低于紅外干燥處理方式，為13.98 mg/g，而通過微波干燥方式前處理提取的黃酮類化合物含量最低，僅為11.17 mg/g。

2.3 不同干燥方式對(duì)瑞香狼毒黃酮類化合物抑菌活性的影響

不同的干燥方式對(duì)瑞香狼毒黃酮類化合物抑菌活性的影響可通過測(cè)定紙片周圍形成的透明的抑菌圈直徑獲得，抑菌圈直徑越大，表明藥物對(duì)病原菌的抑制作用越強(qiáng)。從表1可以看出，不同干燥方式處理后提取的黃酮類化合物對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制效果強(qiáng)于大腸桿菌。3種干燥方式中，紅外干燥處理后提取的黃酮類化合物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制效果強(qiáng)于其他2種方式，可能與紅外干燥處理后得到的黃酮類化合物含量較高有關(guān)。而通過3種干燥方式提取的黃酮類化合物對(duì)蠟狀芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用在本試驗(yàn)中未檢測(cè)出。

3 結(jié)論與討論

藥材的干燥方式對(duì)藥材的品質(zhì)有著重要的影響。本研究表明，因干燥方式不同，導(dǎo)致瑞香狼毒根中黃酮類化合物的含量存在較大的差異。通過紅外干燥處理提取的黃酮類化合物含量最高，烘干處理次之，而通過微波干燥方式前處理提取的黃酮類化合物含量最低。本試驗(yàn)采用的紅外干燥法是用直管鹵素?zé)艉酮?dú)特設(shè)計(jì)的SRA（二次輻射輔助裝置）輻射器來加熱物料，經(jīng)過預(yù)設(shè)時(shí)間逐步升溫到設(shè)定溫度，干燥速度快，而且提取的黃酮類化合物含量高，說明該干燥方式兼具保質(zhì)特點(diǎn)。而藥材在烘干方式處理下需2 d左右才達(dá)到恒重，速度慢且消耗能量，微波干燥雖然速度快，但溫度較難控制，對(duì)藥材品質(zhì)的影響較大。以往研究表明，瑞香狼毒對(duì)人體常見病原細(xì)菌和真菌有較強(qiáng)的抑制作用[15-16]。因藥材前處理方式不同，導(dǎo)致提取的化合物對(duì)病原菌的抑制效應(yīng)產(chǎn)生差異，紅外干燥處理后提取的黃酮類化合物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制效果強(qiáng)于其他2種方式，可能與紅外干燥處理后得到的黃酮類化合物含量較高有關(guān)。

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