道地藥材建青黛組織培養(yǎng)技術(shù)研究

蔡宣梅 郭文杰 張潔

摘要 以建青黛頂芽為外植體，MS為基本培養(yǎng)基，研究不同激素組合的培養(yǎng)基對頂芽誘導、增殖及生根的影響。試驗結(jié)果表明：最佳頂芽誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L，最佳生根培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.05 mg/L。

關(guān)鍵詞 道地藥材；建青黛；組織培養(yǎng)；頂芽

中圖分類號 S567.9 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）09-0070-01

青黛味淡、性寒，具清熱解毒、涼血止血、定驚之功效，臨床常用于時病熱毒，發(fā)癍吐血、胸痛咯血。近年來，研究發(fā)現(xiàn)青黛的主要成分之一的靛玉紅對白血病有一定的療效，從而引起了國內(nèi)外的極大關(guān)注[1]。青黛作為一種傳統(tǒng)中藥材，主產(chǎn)于福建、河南、河北、江蘇和四川等地，其中福建產(chǎn)的品質(zhì)最佳，稱之為建青黛，為公認的名優(yōu)道地藥材。建青黛含靛藍最高可達3.5%，含靛玉紅最高可達0.35%，高于藥典的要求（含靛藍不低于2.0%，含靛玉紅不低于0.13%）。目前福建唯仙游縣書峰鄉(xiāng)有生產(chǎn)，傳統(tǒng)的繁殖方法為扦插繁殖，而常年無性繁殖會導致種源退化。植物組織培養(yǎng)具有繁殖系數(shù)大、脫病毒復壯等優(yōu)點[2-5]，然而組織培養(yǎng)方法應用在青黛上卻未見報道。本研究以青黛頂芽為外植體，建立青黛種苗工廠化生產(chǎn)的完整體系，為大量推廣優(yōu)質(zhì)福建道地青黛種苗及建青黛種質(zhì)資源保護奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試材料為福建省道地青黛，摘取幼嫩的頂芽和側(cè)芽為外植體。

1.2 培養(yǎng)條件

本試驗采用的誘導、增殖培養(yǎng)基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基本培養(yǎng)基為1/2MS（大量元素減半）培養(yǎng)基，附加不同濃度的6-BA、NAA、IBA（單位：mg/L，下同）。基本培養(yǎng)基中，蔗糖為3%，瓊脂為0.7%，pH值為5.8～6.0。培養(yǎng)條件為（25±2）℃，每天光照12 h，光照強度為2 000～2 500 lx。

1.3 試驗方法

選擇健康的無病斑的頂芽，用流水沖洗2 h，用洗衣粉浸泡10 min，用刷子輕刷，然后用自來水沖洗干凈。在超凈工作臺上用75%的酒精浸泡30 s，再用0.1%的升汞消毒8 min，無菌水沖洗4次后，接種在誘導培養(yǎng)基上。當青黛組培苗長至高約2.5 cm時切下接入8種生根培養(yǎng)基中，每瓶5株，每個處理10瓶。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素組合對建青黛頂芽初代誘導的影響

建青黛頂芽接種15 d后，基部切口處開始膨大，隨后慢慢出現(xiàn)許多綠色的小芽點，30 d左右開始分化出不定芽。

從表1可以看出，當NAA濃度不變時，隨著6-BA濃度的增加，誘導率呈增加趨勢；但當6-BA濃度為1.50 mg/L時，誘導出的苗有輕微的玻璃化；當6-BA濃度為2.00 mg/L時，誘導出的苗會玻璃化。當6-BA濃度都為1.00 mg/L時，隨著NAA濃度（0.05～0.50 mg/L）的升高，誘導率呈先上升后下降的趨勢。在NAA濃度為0.10 mg/L時，外植體的誘導率達到最高即93.33%，且苗長勢正常；而NAA濃度超過0.10 mg/L時，隨著NAA濃度的增加，誘導率卻降低。

2.2 不同激素組合對建青黛增殖的影響

從表2可以看出，在6-BA濃度為0.8 mg/L或1.0 mg/L時，培養(yǎng)基中生長的苗葉色正常，未見玻璃化現(xiàn)象，而當培養(yǎng)基中6-BA濃度為1.2 mg/L時，IBA 3個不同濃度的培養(yǎng)基中生長的苗都表現(xiàn)為葉色較淡、有輕微玻璃化現(xiàn)象。當6-BA濃度為0.8、1.0或1.2 mg/L時，IBA濃度都是為0.1 mg/L時增殖倍數(shù)最高。從苗的質(zhì)量和增殖倍數(shù)2個方面考慮，認為MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L培養(yǎng)基作為繼代增殖培養(yǎng)基較好。

2.3 不同激素組合對建青黛生根的影響

當建青黛組培苗長至高2～3 cm時切下接入生根培養(yǎng)基中。培養(yǎng)15 d后，根尖開始冒出。培養(yǎng)25 d時，組培苗的生根情況見表3。從表3可以看出，8種培養(yǎng)基都能促進生根，最佳的建青黛生根培養(yǎng)基為6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.05 mg/L，生根率可達100%。

2.4 煉苗與移栽

將已長根的組培苗小心地從培養(yǎng)瓶中取出，輕輕洗掉根部培養(yǎng)基，用多菌靈或甲基托布津浸泡30 min后，移栽到泥炭土∶珍珠巖體積比為3∶1的穴盤中，放入蓋有薄膜和遮陽網(wǎng)的大棚中管理。棚內(nèi)保持溫度20～25 ℃，相對濕度 70%～80%，成活率可達95%以上。煉苗30 d左右，當幼苗長至7～10 cm即可移栽到大田中，一般選擇春、秋季進行煉苗與移栽。

3 結(jié)論與討論

試驗通過建青黛頂芽誘導、增殖、生根等培養(yǎng)，建立了建青黛工廠化快速繁殖體系，解決了青黛種源退化的問題。張利英等[6]用草莓組培苗和自繁苗進行比較，結(jié)果表明：草莓組培苗在植物學性狀、果實性狀、豐產(chǎn)性及抗病性等方面均優(yōu)于自繁苗，其中產(chǎn)量可比自繁苗增產(chǎn)30%以上。而建青黛為多年生草本植物，扦插繁殖每年收獲產(chǎn)量不一樣，一般3年扦插1次。組培苗種植后的生長勢與扦插苗的比較、每年的產(chǎn)量、一次種植可維持高產(chǎn)量幾年等問題還有待研究。

4 參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：185.

[2] 謝利娟，韓蕾，錢永強.爆仗竹組培快繁6-BA與NAA組合濃度配比優(yōu)化分析[J].核農(nóng)學報，2005，19（3）：181-185.

[3] 王小敏，梁呈元，李維林.留蘭香組織培養(yǎng)及快速繁殖條件的優(yōu)化[J].植物資源與環(huán)境學報，2007，16（4）：38-40.

[4] 林江波，戴藝民，鄒暉，等.福建鐵皮石斛人工繁育技術(shù)研究[J].福建農(nóng)業(yè)學報，2010，25（5）：606-609.

[5] 肖哲麗，柳金風.植物組織培養(yǎng)的研究進展及新技術(shù)應用[J].寧夏農(nóng)林科技，2011，52（1）：13-14.

[6] 張利英，李賀年，張鑫，等.草莓組培苗和自繁苗田間性狀比較試驗研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2009，37（25）：11957-11958.