白頭翁湯及拆方對(duì)模型小鼠抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究

楊昌文

（三峽大學(xué)第一臨床附屬醫(yī)院，湖北省宜昌市中心人民醫(yī)院，湖北　宜昌443000）

白頭翁湯及拆方對(duì)模型小鼠抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究

楊昌文

（三峽大學(xué)第一臨床附屬醫(yī)院，湖北省宜昌市中心人民醫(yī)院，湖北宜昌443000）

目的研究白頭翁湯及組方藥物對(duì)小鼠二甲苯耳廊腫脹的抗炎作用，比較幾種抗炎效果的差異，為臨床提供試驗(yàn)依據(jù)。方法采用常規(guī)的炎癥模型，主要為二甲苯造模進(jìn)行藥效學(xué)觀察。取昆明種小鼠70只，隨機(jī)分成7組，分別灌胃白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁水提物，以阿司匹林為陽(yáng)性對(duì)照，以生理鹽水為空白對(duì)照。各組于末次給藥前測(cè)量小鼠右耳厚度，給藥后0.5 h在小鼠右耳涂20μL致炎，分別在涂后0.5、1、2、3、4 h測(cè)量小鼠右耳厚度，計(jì)算腫脹值差異進(jìn)行組間比較。取小鼠60只，分為白頭翁湯組、黃連組、黃柏組、秦皮組、白頭翁組、模型對(duì)照組，腹腔注射大腸桿菌復(fù)制腹瀉模型。觀察6 h內(nèi)小鼠的腹瀉情況。結(jié)果白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁分別具有一定的抗炎作用。在對(duì)抗二甲苯所致的小鼠炎性反應(yīng)中，其抗炎時(shí)間從長(zhǎng)到短分布順序?yàn)榘最^翁湯、黃連＞黃柏＞秦皮、白頭翁。白頭翁湯組稀便率及平均腹瀉次數(shù)均低于各拆方組。結(jié)論白頭翁湯在抗炎方面作用佳，且以黃連、黃柏為主要抗炎物質(zhì)發(fā)揮較好抗炎效果。白頭翁湯抗腹瀉能力優(yōu)于各拆方組。

白頭翁湯大黃拆方抗炎腹瀉小鼠二甲苯

《傷寒論》中白頭翁湯主要組成為白頭翁、黃連、黃柏、秦皮。全方清熱解毒，涼血止痢，為熱毒血痢之首選。方中白頭翁為君藥，性苦寒，歸大腸經(jīng)，效在清熱解毒、涼血止痢，其清腸胃之濕熱與血分之熱毒效甚佳，為治療熱毒血痢之要藥［1］。黃連瀉火解毒，燥濕厚腸，配合黃柏清熱燥濕，兩藥為臣藥，助白頭翁以發(fā)揮清熱解毒治痢之效［2］。秦皮性苦澀而寒，入大腸經(jīng)，為佐藥，既助上述3藥清熱燥濕，又起收澀止痢之功。另外，白頭翁湯中包含的小檗堿、藥根堿、巴馬汀、白頭翁素、秦皮甲素乙素等物質(zhì)有明確的殺菌、抗炎、解熱鎮(zhèn)痛及抗癌效果［3］。近來年，隨著全方及拆方對(duì)治療尚未潰破的淋巴結(jié)核、神經(jīng)性皮炎、壞死性腸炎、降血糖、抗腫瘤等方法的不斷深入研究，本試驗(yàn)對(duì)白頭翁湯及拆方的抗炎作用進(jìn)行了初步探討，為白頭翁湯的臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，普通級(jí)，共130只，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，來源于三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物白頭翁湯中白頭翁15 g，黃連6 g，黃柏12 g，秦皮12 g。其余各單藥組為白頭翁50 g，黃連30 g，黃柏50 g，秦皮50 g?；亓魉岱ㄟM(jìn)行兩次提?。旱?次，30min，紗布過濾；第2次，20min，紗布過濾。濾液合并靜置，取上清液加熱濃縮并水浴蒸干。再80℃真空干燥，獲得干浸膏備用。最終各組的得膏率為：白頭翁湯15.0%，白頭翁14.6%，黃連17.7%，黃柏9.8%，秦皮18.0%。最終配制為每種藥物1mL溶液中含有1 g生藥。所有藥材均源于安徽亳州滬譙中藥飲片廠，批號(hào)：20050922。

1.3試劑與儀器二甲苯（蚌埠化學(xué)試劑廠，分析純，批號(hào)030519）；復(fù)方阿司匹林腸溶片（南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H32026500）。HH．S-D電熱恒溫水浴鍋，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；FA-1004N電子天平，上海天平儀器廠；2K-82B型真空干燥器，上海試驗(yàn)儀器總廠；千分卡尺等。

1.4白頭翁湯及拆方對(duì)小鼠二甲苯性耳廓腫脹的作用

1.4.1分組與給藥小鼠稱體質(zhì)量后隨機(jī)編號(hào)，分成7組，每組各10只。分別是白頭翁湯組、黃連組、黃柏組、秦皮組、白頭翁組、模型對(duì)照組以及阿司匹林組。前5組中藥組分別按10g生藥/kg灌胃。模型對(duì)照組小鼠則予等容積生理鹽水灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組予以阿司匹林（0.3 g/kg）灌胃。每日1次，共3 d。

1.4.2觀察指標(biāo)小鼠右耳厚度應(yīng)用千分卡尺測(cè)3次取平均值作為正常值。末次給藥后30 min，每只小鼠右耳背均勻涂抹二甲苯20μL，再計(jì)時(shí)，于涂二甲苯后0.5、1、2、3、4 h準(zhǔn)時(shí)測(cè)量每只小鼠右耳厚度3次，取平均值記錄。以腫脹度表示炎癥程度：腫脹值=腫脹后右耳厚度-腫脹前右耳厚度。腫脹值為致炎前后厚度差。1.5白頭翁湯及拆方對(duì)小鼠大腸桿菌致腹瀉的作用

1.5.1分組與給藥60只小鼠稱體質(zhì)量后隨機(jī)編號(hào)，每組各10只，分別為白頭翁湯組、黃連組、黃柏組、秦皮組、白頭翁組、模型對(duì)照組。各組按10 g生藥/kg灌胃藥物，白頭翁湯組灌胃全方藥液，黃連組灌胃單方黃連藥液、黃柏組灌胃單方黃柏藥液、秦皮組灌胃單方秦皮藥液、白頭翁組灌胃單方白頭翁藥液、模型對(duì)照組灌胃生理鹽水。每日1次，共3 d。

1.5.2大腸桿菌致腹瀉模型參照趙榮山等的方法，末次給藥后禁食水12 h后，每只小鼠按0.2 mL/10 g體質(zhì)量腹腔注射108個(gè)/mL的大腸桿菌菌液，以建立大腸桿菌致腹瀉模型。造模4h后開始動(dòng)物開始出現(xiàn)腹瀉癥狀，致瀉率100%。

1.5.3觀察指標(biāo)造模后將小鼠入鋪有濾墊紙的單獨(dú)動(dòng)物籠內(nèi)，觀察6 h內(nèi)小鼠的腹瀉情況，每30分鐘更換一次濾墊紙，計(jì)數(shù)濾墊紙上糞便次數(shù)。小鼠糞便分為5種：（1）正常糞便；（2）糞便基本成形，含水多；（3）不成形糞便；（4）水樣便；（5）血液便。（1）（2）判定為正常，（3）（4）（5）判定為腹瀉。計(jì)算各組小鼠腹瀉數(shù)及稀便率。稀便率（%）=每只小鼠稀便數(shù)/每只小鼠總便數(shù)×100%。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以（表示，組間采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對(duì)小鼠二甲苯性耳廓腫脹的作用比較見表1。據(jù)表中數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析可見，白頭翁湯組、黃連組在4 h的實(shí)驗(yàn)中與對(duì)照組相比較，均差異顯著（P＜0.01）。阿司匹林組和黃柏組持續(xù)在2 h內(nèi)與對(duì)照組相比較，差異極顯著。在第3小時(shí)差異顯著（P＜0.05或P＜0.01），到第4小時(shí)差異不顯著（P＞0.05）。秦皮組和白頭翁組在1 h內(nèi)與對(duì)照組相比較，差異極顯著。第2小時(shí)時(shí)差異顯著（P＜0.01），之后差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，白頭翁湯組、黃連組、黃柏組、秦皮組、白頭翁組，均有抗炎作用。白頭翁湯組、黃連組抗炎作用持續(xù)較長(zhǎng)，黃柏組與陽(yáng)性對(duì)照組抗炎作用相似，持續(xù)時(shí)間較短。秦皮組、白頭翁組抗炎持續(xù)時(shí)間低于陽(yáng)性對(duì)照組。

表1　白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對(duì)小鼠二甲苯性耳廓腫脹的作用（μm，

表1　白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對(duì)小鼠二甲苯性耳廓腫脹的作用（μm，

與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別n劑量（g/kg）　正常耳厚度　二甲苯致小鼠耳廓腫脹值0.5 h 1 h 2 h 3 h 4 h模型對(duì)照組10-238.82±22.81 106.52±19.87 114.87±29.96 80.87±21.17 66.63±19.54 42.57±22.43阿司匹林組10 0．3 240.45±23.73 56.75±24.62**50.28±30.54**40.18±13.32**34.86±32.74*32.97±29.87*白頭翁湯組10 10 238.75±22.73 60.05±18.90**44.54±18.42**30.54±19.47**30.23±17.87**24.43±15.86**黃連組10 10 234.08±21.73 58.27±33.54**40.19±16.37**32.93±14.76**28.37±27.86**24.32±18.35**黃柏組10 10 236.78±18.45 54.91±25.57**42.75±17.54**38.39±17.50**32.34±28.68*28.27±17.5秦皮組10 10 238.44±22.45 58.67±40.45**54.67±13.59**42.85±28.61**3.66±32.06 32.34±14.86白頭翁組10 10 232.81±21.54 66.78±19.41**54.37±19.94**42.87±37.45**38.07±22.46 30.23±17.53

2.2白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對(duì)小鼠大腸桿菌致腹瀉的作用比較見表2。白頭翁湯組稀便率及平均腹瀉次數(shù)均低于各拆方組（P＜0.05）。

表2　白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對(duì)小鼠大腸桿菌致腹瀉的作用比較（

表2　白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對(duì)小鼠大腸桿菌致腹瀉的作用比較（

與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05；與白頭翁湯比較，△P＜0.05。

組別　稀便率（%）平均腹瀉次數(shù)2 h 4 h 6 h模型對(duì)照組78.20 6.51±2.01 8.23±3.10 12.19±3.99白頭翁湯組10 50.78*3.53±0.2*4．88±1．08*6．26±2．17*黃連組10 59.91*△5.88±1.18 6.51±2.34*△7.29±2.97*△n 10黃柏組10 62.13*△5.56±1.07 6.37±2.78*△8.90±3.23*△秦皮組10 67.85*△6.01±1.25 7.55±2.34△10.21±3.17*△白頭翁組10 58.23*△4.59±0.98*6.02±2.01*△8.74±3.00*△

3　討　論

白頭翁湯由白頭翁、黃連、黃柏以及秦皮組成。方藥簡(jiǎn)潔，但各藥配伍嚴(yán)謹(jǐn)，臨床療效經(jīng)歷年來驗(yàn)證，屢試不爽［4］。白頭翁湯現(xiàn)代多項(xiàng)研究表明其具有較好的抗炎止痢作用。部分研究者將其進(jìn)行體外抑菌研究，結(jié)果證實(shí)白頭翁湯在治療痢疾中的作用佳，主要抑制痢疾桿菌，包括志賀氏、施氏、福氏以及宋內(nèi)氏菌［5］。而也有研究證實(shí)，其在抑制金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的作用方面效果也極佳［6］。其抗炎作用即表現(xiàn)在對(duì)大鼠多種實(shí)驗(yàn)性浮腫及肉芽消炎效果顯著。炎癥是機(jī)體應(yīng)對(duì)創(chuàng)傷進(jìn)行的防御反應(yīng)，主要由血管與細(xì)胞的應(yīng)答組成。旨在消滅與清除損傷出現(xiàn)的各種致炎因子，幫助損傷修復(fù)［7］。

炎癥是機(jī)體應(yīng)對(duì)創(chuàng)傷進(jìn)行的防御反應(yīng)，主要由血管與細(xì)胞的應(yīng)答組成。旨在消滅與清除損傷出現(xiàn)的各種致炎因子，幫助損傷修復(fù)。二甲苯炎性造模的機(jī)制為：二甲苯可促進(jìn)組織中肥大細(xì)胞等釋放組胺、5-羥色胺等血管活性胺類，局部組織出現(xiàn)中微血管擴(kuò)張，通透性增加。同時(shí)，機(jī)體其他來源的細(xì)胞和血漿中炎癥介質(zhì)，可進(jìn)一步增加血管活性，造成組織液外滲，出現(xiàn)水腫。此外，炎癥發(fā)生過程中血管內(nèi)皮細(xì)胞自身?yè)p傷，可造成部分血液外滲，進(jìn)一步加重腫脹程度。炎癥、感染以及敗血癥的發(fā)生均與NO合酶相關(guān)，損傷的血管表達(dá)NO合酶，可引發(fā)NO的大量產(chǎn)生，致使血管擴(kuò)張通透性增加而水腫。白頭翁湯中主要提取成分有白頭翁素、小檗堿和秦皮乙素。研究顯示白頭翁素和小檗堿在抑制NO水平方面效果最佳。而黃連、黃柏中提取物以小檗堿、藥根堿為主，在抑制NO的同時(shí)，也可抑制對(duì)組胺引起的小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增加，是有效的抗炎成分。秦皮中含有的七葉苷、秦皮苷類以也具有抗炎作用，其中秦皮乙素可在調(diào)控微血管功能方面發(fā)揮作用，可有效降低NO生成以及阻礙細(xì)胞間黏附分子，從而在抗炎方面作用較佳［8-10］。

本試驗(yàn)中采用的白頭翁湯中白頭翁清熱解毒，黃柏瀉火除蒸、黃連泄火解毒、秦皮可收澀止痢。復(fù)方中的白頭翁、黃柏對(duì)腹瀉均有一定的抑制效果。但白頭翁清熱解毒，涼血治痢，對(duì)腹瀉的抑制效果相比黃柏更為顯著，在復(fù)方中起到了君藥的作用，而黃柏清熱燥濕、瀉火解毒，在復(fù)方中作為白頭翁的臣藥起到輔助白頭翁抗腹瀉的作用，因此復(fù)方中的各味中藥通過配伍加強(qiáng)了白頭翁原有的抗腹瀉作用，能夠有效抑制大腸桿菌引起的腹瀉。

本試驗(yàn)綜合比較可以得出，對(duì)抗二甲苯所致的小鼠炎性反應(yīng)中，各藥物組的抗炎時(shí)間由長(zhǎng)至短順序?yàn)椋喊最^翁湯、黃連＞黃柏＞秦皮、白頭翁。因此，可初步得出本實(shí)驗(yàn)研究中白頭翁湯抗炎作用的發(fā)揮主要依賴于黃連、黃柏的作用。

本項(xiàng)試驗(yàn)中為公正評(píng)定各種藥物的的抗炎作用，單用時(shí)采用同等劑量。試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)黃連在此劑量時(shí)可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)后多數(shù)小鼠死亡，其機(jī)理有待進(jìn)一步研究，也說明黃連在白頭翁湯中劑量最小是有一定道理的。

［1］范文昌，梅全喜，歐秀華，等.12種廣東地產(chǎn)清熱解毒藥材的抗炎作用研究［J］.中國(guó)藥業(yè)，2011，20（8）：28-30.

［2］周鵬志，劉鳳斌，羅琦，等.白頭翁湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道m(xù)iR-19a表達(dá)的影響［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（11）：1597-1599.

［3］胡屹屹，穆祥，胡元亮，等.白頭翁湯及其主要成分對(duì)LPS誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO、E-selectin和IL-8的影響［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，43（1）：145-151.

［4］王瑞鋒，王雪.白頭翁湯的藥理作用與臨床應(yīng)用［J］.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，25（2）：270-271.

［5］謝梅，徐春紅，胡正波，等.管碟法比較鹽酸小檗堿和黃連藥材對(duì)金色葡萄球菌的抑菌效力［J］.中國(guó)藥業(yè)，2012，21（19）：9-11.

［6］劉麗梅，柏冬，王瑞海，等.HPLC-ELSD聯(lián)用檢測(cè)白頭翁湯中白頭翁皂苷B4的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（2）：70-72.

［7］時(shí)維靜，俞浩，孫海明，等.白頭翁湯及其拆方抗腹瀉、抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2007，14（4）：257-258.

［8］張保國(guó)，梁曉夏，劉慶芳，等.白頭翁湯現(xiàn)代藥效學(xué)研究［J］.中成藥，2009，31（4）：607-608.

［9］劉海峰，陳有明，趙軍，等.白頭翁湯加減治療痢疾體會(huì)［J］.中國(guó)中醫(yī)急癥，2014，23（1）：180-181.

［10］孫俊穎，彭新宇，魏光偉，等.白頭翁湯的藥理作用研究進(jìn)展［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，37（12）：112-113.

R285.5

A

1004-745X（2016）09-1737-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.09.029

2015-05-14）