骨髓增生異常綜合征和急性髓系白血病患者血清可溶性CD44水平檢測意義

張曉霞，楊　潔，楊永賓，李　燕，李　杰，袁　軍，王瑞倉，郝洪嶺，趙　培

(河北省人民醫(yī)院，河北 石家莊 050061)

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論著

骨髓增生異常綜合征和急性髓系白血病患者血清可溶性CD44水平檢測意義

張曉霞，楊潔，楊永賓，李燕，李杰，袁軍，王瑞倉，郝洪嶺，趙培

(河北省人民醫(yī)院，河北 石家莊 050061)

目的探討骨髓增生異常綜合征(MDS)以及急性髓系白血病(AML)患者血清可溶性CD44(solCD44)表達水平檢測的臨床意義。方法選擇初診的MDS患者 63例作為MDS組，AML患者75例作為AML組，同時選取15例健康成年人作為對照組。采用ELISA法檢測各組血清solCD44s及solCD44v6水平，分析比較不同亞型(RCUD、RARS、RCMD、RAEB-1和RAEB-2型)、不同危險度(低危組、中危-1組、中危-2組、高危組)MDS患者血清solCD44s水平的差異和不同分型(M3組和非M3組)AML患者血清solCD44s及solCD44v6水平的差異。結(jié)果MDS組和AML組血清solCD44s水平均明顯高于對照組(P均<0.05)，MDS組和AML組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)； AML組血清solCD44v6水平明顯高于對照組和MDS組(P均<0.05)，MDS組與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。RCUD、RARS、RCMD、RAEB-1和RAEB-2型MDS患者血清solCD44s水平依次增加(P均<0.05)，且隨著危險度增高，血清solCD44s水平逐漸升高(P均<0.05)。M3組血清solCD44s和solCD44v6水平均明顯高于非M3組(P均<0.05)。結(jié)論MDS患者血清solCD44s水平明顯升高，與WHO分型、IPSS危險度分層水平相關(guān)，提示solCD44s水平升高與MDS患者的腫瘤負荷相關(guān)，可以作為MDS診斷分型、判斷預后的血清學參考指標；AML患者血清solCD44s及solCD44v6水平均明顯升高，且水平越高提示病情越重，預后較差，solCD44s及solCD44v6均可以作為AML診斷分型、判斷預后的血清學參考指標。

可溶性CD44s；骨髓增生異常綜合征；急性髓系白血??；急性早幼粒細胞白血病

CD44是單鏈膜表面糖蛋白，屬黏附分子家族，與細胞黏附、淋巴細胞活化和歸巢、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[1]，分標準型CD44(CD44s)和變異型CD44(CD44v)，CD44s表達于所有的成熟血細胞、多數(shù)骨髓單個核前體細胞，CD44v主要分布于上皮源性細胞和腫瘤細胞[2]，當CD44分子表達異常或功能障礙時，可引起血液的惡性腫瘤、自身免疫病和某些實體腫瘤的發(fā)展[3]。CD44在蛋白水解酶的作用下，可從細胞表面脫落形成可溶性CD44(solCD44)釋放入血。近年來大量研究表明，CD44v與造血系統(tǒng)惡性腫瘤如急/慢性白血病、淋巴瘤及多發(fā)性骨髓瘤等，特別是急性髓系白血病(AML)有密切聯(lián)系[4]，在AML、ALL、慢性粒細胞白血病(CML)及骨髓增生異常綜合征(MDS)等惡性血液病患者中均發(fā)現(xiàn)血清solCD44s水平有所升高[5-6]。但國內(nèi)對于血清solCD44在MDS和AML診斷及其分型中的相關(guān)研究報道較少。本研究以MDS和AML患者為主要研究對象，采用ELISA方法測定患者血清solCD44s和solCD44v6水平，探討solCD44s和solCD44v6在惡性血液病的診斷分型、臨床預后判斷中的意義。

1　臨床資料

1.1一般資料選擇河北省人民醫(yī)院血液科2011年1月—2013年1月收治的初診MDS患者63例作為MDS組，AML患者75例作為AML組，均符合《血液病診斷與治療標準》[7]，均通過常規(guī)骨髓形態(tài)學、病理學及細胞遺傳學等檢查確診。MDS組男40例，女23例；年齡35～82歲，中位年齡61歲；WHO分型：難治性血細胞減少伴有單系增生異常(RCUD)10例，難治性貧血伴環(huán)形鐵粒幼細胞增多(RARS)7例，難治性貧血伴有多系發(fā)育異常(RCMD)10例，難治性貧血伴原始細胞增多-1(RAEB-1)20例，難治性貧血伴原始細胞增多-2(RAEB-2)16例；IPSS危險度分層：低危組15例，中危-1組16例，中危-2組22例，高危組10例。AML組男40例，女35例；年齡10～75歲，中位年齡41歲；FAB分型：M03例，M15例，M211例，M327例，M414例，M513例，M62例。另選取同期健康體檢正常成年人15例作為對照組，男8例，女7例；年齡34～55歲，中位年齡45歲。

1.2方法采集患者治療前和健康體檢者晨起空腹靜脈血3 mL，注入無抗凝試管中，在2 h內(nèi)，以2 000 r/min離心5 min，留取上層血清置于EP管內(nèi)，分裝成每管0.5 mL，置-80 ℃冰箱中保存待測。采用人solCD44s、人solCD44v6 ELISA試劑盒(博海生物技術(shù)有限公司)，全自動酶標儀檢測血清solCD44s、solCD44v6水平。試劑盒從8 ℃取出后，開啟前先在室溫下平衡30 min，再進行標準品的稀釋(應用試劑盒提供的原倍標準品，在小試管中進行稀釋)，然后進行加樣、溫育、配液、洗滌、加酶、溫育、洗滌、顯色、終止、測定(以空白孔調(diào)零，于450 nm波長依序測量各孔的吸光度，測定在加終止液后15 min內(nèi)進行)。以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線算出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

2　結(jié)　　果

2.13組血清solCD44s和solCD44v6水平比較MDS組和AML組血清solCD44s水平均明顯高于對照組(P均<0.05)，MDS組和AML組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；以血清solCD44s水平高于470.95 μg/L定為升高，MDS組中49例(78%)、AML組中61例(81%)solCD44s水平升高。AML組血清solCD44v6水平明顯高于對照組和MDS組(P均<0.05)，MDS組與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；以血清solCD44v6高于90.17 ng/mL定為升高，MDS組中7例(11%)、AML組中49例(65%)solCD44v6水平升高。見表1。

表1　3組血清solCD44s和solCD44v6水平比較

注：①與對照組比較，P<0.05；②與AML組比較，P<0.05。

2.2不同亞型MDS患者血清solCD44s水平比較RCUD、RARS、RCMD、RAEB-1和 RAEB-2 型患者血清solCD44s水平分別為(420.07±52.48)μg/L、(446.65±43.95)μg/L、(522.32±43.78)μg/L、(586.03±57.46)μg/L、(708.97±97.83)μg/L，RCUD 組與RARS組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，其余各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)，且依次遞增。

2.3不同危險度分層MDS患者血清solCD44s水平比較低危組、中危-1組、中危-2組、高危組血清solCD44s水平分別為(428.49±50.17)μg/L、(508.75±45.29)μg/L、(610.73±43.05)μg/L、(761.11±82.32)μg/L，隨著危險度增高，血清solCD44s 水平逐漸升高，各組兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。

2.4不同分型AML患者血清solCD44s和solCD44v6水平比較M3組血清solCD44s和solCD44v6水平均明顯高于非M3組(P均<0.05)。見表2。

表2　不同分型AML患者血清solCD44s和solCD44v6水平比較

注：①與非M3組比較，P<0.05。

3　討　　論

MDS是一組異質(zhì)性的髓系惡性克隆性疾病，現(xiàn)認為基因改變和表觀遺傳修飾可能共同導致了MDS表型異質(zhì)性、無效造血及向白血病轉(zhuǎn)化[8]，而MDS可轉(zhuǎn)化為AML。一系列對AML和MDS患者的相關(guān)研究提示，solCD44在AML和MDS以及其他髓系腫瘤中具有預后意義。Nasu等[9]對6名由MDS轉(zhuǎn)化的AML患者動態(tài)分析表明，隨著MDS的進展，患者血清solCD44水平隨之升高；且在solCD44s水平升高的初治AML患者，其誘導治療的完全緩解率明顯降低，而急性白血病患者在完全緩解后solCD44s水平恢復正常但疾病復發(fā)時水平增加，因此建議將血清solCD44水平作為一項監(jiān)測急性白血病治療反應和疾病進展的指標。Loeffler-Ragg等[5]報道指出solCD44s具有判斷MDS患者預后的意義。隨后該研究小組采用單因素和多因素分析，發(fā)現(xiàn)solCD44水平的升高與較短的生存期和能獨立反映預后意義的IPSS有相關(guān)性，從而提出solCD44s可以作為影響MDS生存的一個獨立預后因素[6]，并提出solCD44s對較低風險的MDS是一個有用的預后參數(shù)，該參數(shù)擴大了對IPSS低危組和中危-1組患者之間的預測。

循環(huán)中的solCD44主要來源于CD44胞漿外段從細胞表面的水解脫落，快速增殖的惡性腫瘤細胞可能誘導產(chǎn)生更多的內(nèi)生蛋白水解酶，該物質(zhì)造成循環(huán)中solCD44水平持續(xù)上升。CD44的胞外裂解是一個活躍且受高度調(diào)控的過程，它廣泛存在于多種類型的人類腫瘤，包括髓系腫瘤，推測CD44的水解可能存在一個精細的調(diào)節(jié)機制。CD44在蛋白水解酶的作用下脫落，這對CD44依賴性的腫瘤細胞與細胞外基質(zhì)相互作用及信號通路的調(diào)控有重要影響。脫落的solCD44仍保留其生物學功能[10]，與細胞表面的CD44競爭性結(jié)合配體，參與細胞活化、誘導細胞凋亡并抑制腫瘤生長。轉(zhuǎn)染的solCD44可導致細胞增殖及細胞抗凋亡增加，表明solCD44在腫瘤細胞可能成為一個新靶點[11]。CD44胞外水解完成后，其胞內(nèi)結(jié)構(gòu)開始在具有早老蛋白依賴性的γ分泌酶的作用下水解，從膜上釋放出CD44ICD，后者在進入細胞核后可以作為包括CD44在內(nèi)的各種基因的轉(zhuǎn)錄因子，從而介導細胞間的級聯(lián)信號[12]。由此推測，CD44水解參與改變CD44的調(diào)節(jié)機制，這些調(diào)節(jié)機制在髓系腫瘤的生物學行為，如細胞增殖、分化和凋亡以及在白血病干細胞(LSC)功能及歸巢至骨髓微環(huán)境過程中是必不可少的[13]。值得注意的是，CD44是一個良好的干細胞歸巢受體，其在MDS細胞增殖中可能起一定促進作用，可作為髓系白血病一個潛在的治療靶點。

本研究結(jié)果顯示，MDS組和AML組血清solCD44s水平均明顯高于對照組，但MDS組和AML組比較差異無統(tǒng)計學意義，可能與樣本量較小有關(guān)，需擴大樣本量繼續(xù)研究探討。AML組血清solCD44v6水平明顯高于對照組和MDS組，MDS組與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義，推測其可能原因有：①不同分化發(fā)育期的淋巴細胞或不同類型腫瘤細胞表達的CD44分子不同，表達量也不同，從而脫落形成的solCD44分子也有差異，MDS的腫瘤細胞可能優(yōu)勢表達CD44s，不表達或僅少量表達CD44v6；②受外周血淋巴細胞的活化狀態(tài)影響。因此對MDS與solCD44v6的確切關(guān)系尚需進一步研究。RCUD、RARS、RCMD、RAEB-1 和RAEB-2型MDS患者血清solCD44s水平依次增加，且隨著危險度增高，血清solCD44s水平逐漸升高，提示MDS患者血清solCD44s水平與疾病分型和IPSS危險度分層密切相關(guān)。M3組血清solCD44s和solCD44v6水平均明顯高于非M3組，M3是AML中較為常見而又特殊的亞型之一，其治療過程兇險，常常出現(xiàn)高白細胞瘀滯綜合征、誘導分化綜合征及彌散性血管內(nèi)凝血等危險的并發(fā)癥，故認為solCD44s及solCD44v6水平異常增高對疾病的轉(zhuǎn)歸具有一定的預測作用。

綜上所述，MDS患者血清solCD44s水平明顯升高，與WHO分型、IPSS危險度分層水平相關(guān)，提示solCD44s水平升高與MDS患者的腫瘤負荷相關(guān)，可以作為MDS診斷分型、判斷預后的血清學參考指標；AML患者血清solCD44s及solCD44v6水平均明顯升高，由于初診時白血病患者體內(nèi)存在大量白血病細胞增殖，此時升高的solCD44s應該來源于白血病細胞[14]，因此考慮AML患者血清solCD44s和solCD44v6水平與腫瘤負荷相關(guān)，solCD44s及solCD44v6均可以作為AML診斷分型、判斷預后的血清學參考指標。但由于本研究樣本量較少，對患者的觀察期短，未做對患者療效的動態(tài)觀察及長期生存的分析，尚待今后進一步研究完善。

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Clinical significance of serum soluble CD44s of patients with myelodysplastic syndrome and acute myeloid leukemia

ZHANG Xiaoxia, YANG Jie, YANG Yongbin, LI Yan, LI Jie, YUAN Jun, WANG Ruicang, HAO Hongling, ZHAO Pei

(Hebei General Hospital, Shijiazhuang 050051, Hebei, China)

Objective It is to explore the significance of serum soluble CD44s (solCD44s) levels determing in patients with myelodysplastic syndrome (MDS) and acute myeloid leukemia (AML).Methods 63 cases of newly diagnosed MDS were selected as MDS group, 75 cases of AML as AML group, while 15 cases of healthy adults were selected as control group.The serum solCD44s and solCD44v6 levels was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The differences of the serum solCD44s levels with different subtypes (RCUD, RARS, RCMD, RAEB-1 and RAEB-2) and different levels of risk (Low risk, medium risk 1, medium risk 2, high risk) of MDS, and the serum solCD44s and solCD44v6 levels in patients with different types (M3 and no-M3) of AML were analyzed and compared.Results The serum solCD44s levels of the MDS group and the AML group were both significantly higher than those of the control group (all P<0.05), but there was no significant difference between the MDS group and the AML group (P>0.05).The serum solCD44v6 level of the AML group were significantly higher than those of the MDS group and the control group (all P<0.05), but there was no significant difference between the MDS group and the control group (P>0.05).The serum solCD44s levels were gradually increased according to the order of RCUD, RARS, RCMD, RAEB-1 and RAEB-2 in the MDS group (all P<0.05), and with the increase in the degree of risk (all P<0.05).Conclusion The serum solCD44s level of patients with MDS is significantly increased and has relationships with the WHO classification, IPSS risk stratification, suggesting that in patients with MDS, the solCD44s level is associated with tumor burden and can be used as a serological reference indicator on diagnosis and prognosis of MDS.The serum solCD44s level of the AML patients is significantly raised.Simultaneously significantly high levels of solCD44s and solCD44v6 in the serum of patients prompt a severe illness, and a poor prognosis.SolCD44s and solCD44v6 can be used as serological reference indicators of diagnostic classification and prognosis of AML.

soluble CD44s; myelodysplastic syndrome; acute myeloid leukemia; acute promyelocytic leukemia

張曉霞，女，碩士，研究方向為惡性血液病的診療。

楊潔，E-mail：yjyyb313@163.com

河北省衛(wèi)生廳青年科技課題(20120006)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.27.001

R733.7

A

1008-8849(2016)27-2965-04

2016-03-30