板藍(lán)根及其所含靛藍(lán)和靛玉紅對(duì)小鼠腎有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體OCT1和OCT2的影響

張 娜，奇錦峰，孫 晨，余文浩，王永輝，林 梅（.廣州中醫(yī)藥大學(xué)藥理教研室，廣東廣州 50006；.駐馬店人民醫(yī)院藥劑科，河南駐馬店 46000；.佛山南海中醫(yī)院西藥房，廣東佛山 5800）

板藍(lán)根及其所含靛藍(lán)和靛玉紅對(duì)小鼠腎有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體OCT1和OCT2的影響

張 娜1，奇錦峰1，孫 晨1，余文浩1，王永輝2，林 梅3
（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)藥理教研室，廣東廣州 510006；2.駐馬店人民醫(yī)院藥劑科，河南駐馬店 463000；3.佛山南海中醫(yī)院西藥房，廣東佛山 528200）

目的 探討板藍(lán)根飲片水煎液（DRI）、板藍(lán)根顆粒（GRI）及其所含成分靛藍(lán)、靛玉紅對(duì)小鼠腎有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體（OCT）中2個(gè)主要亞型OCT1和OCT2的影響。方法 NIH小鼠每組60只，分別ig給予DRI 1.6 和6.4 g·kg-1（生藥量），GRI 0.615和2.460 g·kg-1，靛藍(lán)0.008和0.640 mg·kg-1，靛玉紅0.0192和1.5360 mg·kg-1，每天2次，連續(xù)5 d。同時(shí)設(shè)純水和0.5%羧甲纖維素鈉（CMC）為對(duì)照組，糊精加蔗糖（各1.5 g·kg-1）添加劑組和奎尼丁（0.025 g·kg-1）陽性對(duì)照組。末次給藥后60 min靜脈注射二甲雙胍（Met）5 mg·kg-1，給Met后1.0，2.5，5.0，7.5，10.0和20.0 min時(shí)每組分別各取10只小鼠處死，收集全血并摘取雙腎，右腎勻漿后測(cè)定Met蓄積量，左腎用于檢測(cè)OCT mRNA表達(dá)。另取NIH小鼠每組10只，同法給藥，摘取左腎制備腎切片進(jìn)行Met攝取實(shí)驗(yàn)。用高效液相色譜法測(cè)定血清、腎組織及腎切片勻漿液中Met濃度；藥動(dòng)學(xué)軟件（DAS 2.0）分析血清及腎組織中Met的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)；實(shí)時(shí)定量PCR法測(cè)定小鼠腎OCT1和OCT2 mRNA的表達(dá)。結(jié)果 與純水對(duì)照組比，0.5%CMC組和蔗糖加糊精組各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均無顯著性差異；DRI 6.4 g·kg-1、GRI 2.460 g·kg-1、靛藍(lán)0.640 mg·kg-1和靛玉紅1.5360 mg·kg-1組血液藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均出現(xiàn)顯著變化（P＜0.05，P＜0.01）：t1/2β延長13%～97%，Vd減少13%～72%，Cl降低9%～65%，AUC0-20 min增加13%～135%；各供試物組腎組織Met蓄積量顯著升高（P＜0.01）；腎切片Met攝取量均明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）；腎組織OCT1和OCT2 mRNA表達(dá)水平均不同程度下調(diào)（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論 DRI、GRI、靛藍(lán)和靛玉紅在所用劑量下對(duì)小鼠腎OCT1和OCT2均有明顯抑制作用，DRI和GRI的這種抑制作用可能主要來自其所含的靛藍(lán)和靛玉紅。

板藍(lán)根；靛藍(lán)；靛玉紅；二甲雙胍；有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體

生理pH下約40%的常用處方藥是有機(jī)陽離子，這些化合物最終由腎、肝和脈絡(luò)叢的有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體（organic cation transporters，OCT）系統(tǒng)處理［1］。OCT是溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)（solute carrier，SLC）超家族中SLC22A基因大家族的成員［2］，其主要成員OCT1和OCT2主要表達(dá)于腎近曲小管上皮細(xì)胞基底膜側(cè)，參與多種內(nèi)、外源性物質(zhì)，包括臨床藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)及排泄。轉(zhuǎn)運(yùn)體的易調(diào)控性是引起代謝性藥物相互作用的原因之一，而OCT也具有這種特性。藥物相互作用一方面可導(dǎo)致藥物的藥效減弱或毒性增加，另一方面亦可作為降低藥物毒副作用的輔助手段［3］。OCT介導(dǎo)的藥物相互作用已引發(fā)不少嚴(yán)重的藥害事件，例如噴他脒和呋喃二脒［4］、鉑類衍生物［5］和雙胍類藥物［6］。

近年來，關(guān)于板藍(lán)根的不良反應(yīng)時(shí)有報(bào)道，其中不乏致腎衰的案例［7］。本實(shí)驗(yàn)室已發(fā)表的板藍(lán)根致腎衰的可能機(jī)制是抑制了有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體（organic anion transporters，OAT）中的幾個(gè)主要成員［8］。本文報(bào)道板藍(lán)根及其所含靛藍(lán)（indigo）和靛玉紅（indirubin）對(duì)腎OCT中的2個(gè)主要亞型OCT1 和OCT2的影響。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物、藥物、試劑和儀器

SPF級(jí)NIH小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量22～30 g，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（粵）2013-0020。飼養(yǎng)條件為室溫20～26℃，濕度50%～70%，12 h明暗交替，隨意攝食飲水。動(dòng)物福利和實(shí)驗(yàn)均符合相關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理要求。板藍(lán)根飲片水煎液（decoction of Radix Isatidis，DRI），廣州采芝林藥業(yè)有限公司，批號(hào)YPA4H0001，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院黃海波教授鑒定為北板藍(lán)根；板藍(lán)根顆粒（granules of Radix Isatidis，GRI），廣州市香雪制藥股份有限公司，批號(hào)201309108；靛藍(lán)（98%，批號(hào)110716）、靛玉紅（95%，批號(hào)110717）、鹽酸二甲雙胍（metformin，Met，97%，批號(hào)M107827）、奎尼?。╭uinidine，98%，批號(hào)1308376）和辛烷磺酸鈉（98%，批號(hào)L8707），均購自阿拉丁試劑有限公司；Folin-酚蛋白定量試劑盒，北京鼎國昌盛生物技術(shù)公司；總RNA提取試劑、PrimeScriptTMRT試劑盒和SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒，均購自日本TaKaRa公司；特異性引物（上海生工生物工程有限公司）序列［9］見表1。甲醇為色譜純；其他常用試劑均為市售分析純。

Himac CR22G高速冷凍離心機(jī)，日本日立制作所；G7-953T組織勻漿機(jī)，日本As One公司；WFG7200紫外可見分光光度計(jì)，尤尼柯上海儀器有限責(zé)任公司；SmartSpec plus核酸蛋白檢測(cè)儀，美國Bio-Rad公司；ABI7500實(shí)時(shí)定量PCR儀，美國Applied Biosystems公司；日立L2000高效液相色譜系統(tǒng)：L2130泵，L2420紫外檢測(cè)器，L2200自動(dòng)進(jìn)樣器，上海天美科學(xué)儀器有限公司。

板藍(lán)根水提物的制備［10］及板藍(lán)根類供試物所含靛藍(lán)和靛玉紅的定量方法同文獻(xiàn)［11］。

1.2OCT功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)［12］

Tab.1 Primer sequences for real time PCR［9］

受試小鼠隨機(jī)分為12組：純水對(duì)照組，0.5%羧基纖維素鈉（sodium carboxymethyl cellulose，CMC）對(duì)照組（奎尼丁、靛藍(lán)、靛玉紅均用CMC研磨成細(xì)膩的混懸液），糊精加蔗糖添加劑組（各1.5 g kg-1），奎尼丁0.025 g·kg-1陽性對(duì)照組，DRI 1.6和6.4 g·kg-1（生藥量）組，GRI 0.615和2.460 g·kg-1組，靛藍(lán)0.008和0.640 mg·kg-1組，靛玉紅0.0192和1.5360 mg·kg-1組，每組60只，各供試物灌胃給藥20 mL kg-1，每天2次，連續(xù)5 d。末次給藥60 min后，所有受試小鼠iv給予Met 5 mg·kg-1。給Met后1.0，2.5，5.0，7.5，10.0和20.0 min時(shí)每組各取10只小鼠頸椎脫臼處死取全血，室溫放置60 min后3000×g離心5 min，取血清-20℃保存；迅速摘取雙腎并即刻存入-80℃冰箱，右腎用于OCT功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，左腎用于OCT mRNA表達(dá)量檢測(cè)。取出-80℃保存的小鼠右腎，剪成2 mm小塊放入電動(dòng)勻漿器中，加入5倍量的磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）后勻漿（20 s×5次，每次間隔10 s），20 000×g離心30 min后棄沉淀，F(xiàn)olin-酚法測(cè)定上清中蛋白質(zhì)含量。按文獻(xiàn)［13］方法測(cè)定腎組織和血清中Met含量。日本島津公司C18色譜柱150 mm×4.6 mm，粒徑5 μm；流動(dòng)相：磷酸二氫鈉5 mmol L-1，含辛烷磺酸鈉2 mmol L-1，有機(jī)相為甲醇。水相∶有機(jī)相= 80∶20（V∶V）。流速1.0 mL min-1，室溫25℃，檢測(cè)波長235 nm，進(jìn)樣量20 μL。

1.3腎切片攝取Met實(shí)驗(yàn)［12］

取SPF級(jí)NIH小鼠，每組10只，給藥方法同1.2（糊精加蔗糖對(duì)照組略）。末次給藥后60 min處死，迅速摘取左腎于已消毒的瓷板上。用無菌手術(shù)刀片從腎門沿長軸將腎均分成2份。每份沿長軸切成均等3條（約2 mm厚），再將其均等切成3塊。冰冷PBS涮洗后用濾紙吸干，放入24孔培養(yǎng)板（內(nèi)有氧飽和的PBS 1 mL，含Met 0.604 mmol L-1，每孔1個(gè)腎），置5%CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育20 min，每隔5 min振搖5 s。取出培養(yǎng)板后迅速加入250 μL甲醇振搖混勻以終止反應(yīng)。按1.2方法制備腎切片勻漿和測(cè)定蛋白，并測(cè)定腎切片中Met濃度，色譜條件同1.2。Met的攝取量以mg g-1蛋白表示，并計(jì)算出各組攝取量占對(duì)照組攝取量的百分比。

1.4實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)腎組織OCT mRNA水平

從-80℃冰箱中取出各受試鼠左腎提取總RNA，操作步驟按照RNA提取試劑盒說明書進(jìn)行。取A260 nm/A280 nm比值在1.8～2.2的樣本進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄操作。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)用PrimeScriptTMRT試劑盒，在ABI 7500實(shí)時(shí)定量PCR儀上進(jìn)行。反應(yīng)條件為37℃15 min，85℃31 s，1個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)用SYBR Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒。反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性30 s，進(jìn)入循環(huán)階段，每個(gè)循環(huán)包括95℃變性15 s，56℃退火30 s，72℃延伸31 s，共40個(gè)循環(huán)。以GAPDH作為內(nèi)參照，用2- Ct法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)水平。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

血中Met的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（t1/2β，Vd，Cl，AUC0-20 min）及腎組織中Met蓄積量的AUC0-20 min由藥動(dòng)學(xué)軟件DAS 2.0計(jì)算［14］。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)用表示，以統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）及最小顯著性檢驗(yàn)（LSD）。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1DRI和GRI中靛藍(lán)和靛玉紅的含量

靛藍(lán)和靛玉紅含量測(cè)定顯示，本研究所用DRI中每克含靛藍(lán)29.45 μg（0.002945%），靛玉紅3.12 μg（0.000312%），GRI中每克含靛藍(lán)3.03 μg（0.000303%），靛玉紅3.92 μg（0.000392%），遠(yuǎn)低于文獻(xiàn)報(bào)道的板藍(lán)根飲片含靛藍(lán)和靛玉紅分別為0.000005%～0.09574%和0.0～0.08639%［11，15-16］。

2.2OCT功能檢測(cè)結(jié)果

2.2.1血中Met的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)變化

由系列Met標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.2441～250.0 mg L-1，10個(gè)濃度梯度）得標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=60370.0X-8723.4，R=0.999，以此標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出血清及腎組織中Met濃度。日內(nèi)變異0.41%～5.52%，日間變異3.65%～8.85%，重現(xiàn)性92.81%～105.14%。

小鼠血中Met的藥-時(shí)曲線（圖1）符合二室模型，可用等式Cs=Ae-at+Be-βt描述，Cs是在iv后t （min）時(shí)的Met濃度。血中Met的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。純水、CMC和糊精加蔗糖3個(gè)對(duì)照組所測(cè)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無顯著差異；與純水對(duì)照組相比，t1/2β在DRI 6.4 g·kg-1、GRI 0.615和2.460 g·kg-1、靛藍(lán)0.640 mg·kg-1、靛玉紅0.0192和1.5360 mg·kg-1組顯著延長（P＜0.05，P＜0.01）；Vd在DRI 6.4 g·kg-1、靛藍(lán)0.640 mg·kg-1和靛玉紅1.5360 mg·kg-1組顯著降低（P＜0.01）；Cl在DRI 1.6和6.4 g·kg-1、GRI 2.460 g·kg-1、靛藍(lán)0.640 mg·kg-1和靛玉紅1.5360 mg·kg-1組顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），AUC0-20 min在各供試物高劑量組均顯著增加（P＜0.01）。

Fig.1 Effect of decoction of Radix Isatidis（DRI），granules of Radix Isatidis（GRI），indigo and indirubin on metformin（Met）concentration in serum of mice.Quinidine 0.025 g·kg-1，DRI 1.6 and 6.4 g·kg-1，GRI 0.615 and 2.460 g·kg-1，indigo 0.008 and 0.640 mg·kg-1，indirubin 0.0192 and 1.5360 mg·kg-1were ig given，respectively，twice a day for 5 d.Sixty minutes after the last ig drugs，Met 5 mg·kg-1was iv given.Blood samples were collected at 1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 and 20.0 min after iv Met.，n=10.*P＜0.05，**P＜0.01，compared with water control group.

Tab.2 Effect of DRI，GRI，indigo and indirubin on pharmacokinetic parameters of Met in serum

2.2.2小鼠腎組織中Met蓄積量的改變

小鼠腎組織中Met的藥-時(shí)曲線見圖2。Met在小鼠腎組織的蓄積量（AUC0-20 min）見表3。純水、CMC和糊精加蔗糖組之間無顯著差異；與純水對(duì)照組相比，DRI 1.6和6.4 g·kg-1、GRI 2.460 g·kg-1、靛藍(lán)0.640 mg·kg-1及靛玉紅1.5360 mg·kg-1組Met蓄積量顯著增加（P＜0.01）。

2.3腎切片Met攝取量的改變

小鼠腎切片攝取Met的結(jié)果見表4。各供試物組Met攝取量均低于純水對(duì)照組（P＜0.05，P＜0.01），其中DRI 6.4 g·kg-1和靛玉紅1.5360 mg·kg-1組Met攝取量＜純水對(duì)照組的60%（P＜0.01）。

Fig.2 Effects of DRI，GRI，indigo and indirubin on Met concentration in kidney of mice.See Fig.1 for the mouse treatment.，n=10.*P＜0.05，**P＜0.01，compared with water control group.

Tab.3 AUC0-20 minof Met in blood and kidney of mice after treatment with DRI，GRI，indigo and indirubin

Tab.4 Effect of DRI，GRI，indigo and indirubin on Met uptake by kidney slices of mice

2.4小鼠腎組織中OCT mRNA表達(dá)水平的改變

各供試物組小鼠腎組織OCT1和OCT2 mRNA的表達(dá)水平見圖3。與純水對(duì)照組相比，DRI 6.4 g·kg-1和靛玉紅1.5360 mg·kg-1組OCT1和OCT2 mRNA表達(dá)水平均下調(diào)（P＜0.05，P＜0.01）；GRI 2.460 g·kg-1和靛藍(lán)0.640 mg·kg-1組OCT1 mRNA表達(dá)水平下調(diào)（P＜0.05，P＜0.01）。

3　討論

轉(zhuǎn)運(yùn)體是一類跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)體內(nèi)各種內(nèi)、外源性化合物的功能蛋白，在藥物吸收、分布、排泄、藥效發(fā)揮以及藥物毒副作用中起關(guān)鍵作用［2-3］。藥物經(jīng)腎小管表皮細(xì)胞的分泌由眾多轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)，如有機(jī)陽離子型化合物由攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體OCT在近曲小管基底膜側(cè)吸收入管腔以便排出體外［17］。

本研究以Met為探針?biāo)幒涂岫殛栃詫?duì)照［18］，用體內(nèi)和體外方法檢測(cè)了板藍(lán)根及其所含2種成分對(duì)小鼠腎OCT1和OCT2功能及其基因的調(diào)控，進(jìn)而推測(cè)板藍(lán)根及其所含靛藍(lán)和靛玉紅對(duì)人腎主要OCT（OCT1和OCT2）是否有影響。

DRI臨床用量為每人10～15 g，每天1次（本研究取每人13 g），GRI臨床用量為每次5～10 g，每天3～4次（本研究取每人5 g）［10］。依據(jù)黃繼漢等［19］的建議，本研究將小鼠等效于人臨床用量的8倍設(shè)為低劑量，32倍設(shè)為高劑量，DRI和GRI劑量分別為1.6，6.4 g kg-1和0.615，2.460 g·kg-1（生藥量）。靛藍(lán)和靛玉紅有抗菌作用，長期以來都被作為DRI、GRI及大青葉等中藥的活性成分和質(zhì)控及工藝考察的指標(biāo)［11，15-16］。因此，本研究將其作為板藍(lán)根中的主要活性成分予以觀察。本研究所用DRI和GRI所含靛藍(lán)、靛玉紅總體上低于文獻(xiàn)報(bào)道［11，15-16］，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果仍顯示它們對(duì)小鼠腎OCT1及OCT2有明顯的抑制作用。

文獻(xiàn)檢索未發(fā)現(xiàn)GRI中的添加劑糊精和蔗糖對(duì)藥物代謝酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體有何明顯影響［10］。本研究體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，糊精加蔗糖組與純水或CMC對(duì)照組間均未見任何顯著性差異，故在PCR實(shí)驗(yàn)中省略了該對(duì)照組。

本研究預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血中Met濃度在0～30 min各時(shí)間點(diǎn)間差異明顯，故正式實(shí)驗(yàn)在0～20 min設(shè)了6個(gè)時(shí)間點(diǎn)。血中Met的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)顯示，與純水對(duì)照組相比，DRI、GRI、靛藍(lán)和靛玉紅高劑量組t1/2β延長了13%～97%；DRI、靛藍(lán)和靛玉紅高劑量組Vd降低了13%～72%；DRI 2個(gè)劑量組和靛玉紅高劑量組Cl減少了9%～65%；各供試物高劑量組AUC0-20 min增加了13%～135%。表明DRI、GRI、靛藍(lán)和靛玉紅對(duì)小鼠腎OCT功能有明顯的抑制作用。

通常認(rèn)為AUC是最重要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，故本研究參照文獻(xiàn)［20］對(duì)各供試物的血清及腎組織AUC予以關(guān)注。各供試物腎組織與血清AUC的比值與純水或CMC對(duì)照組的比值相近，均在0.452～0.560，說明血中Met濃度升高后腎組織中Met蓄積量也同比例增加，即在此過程中可能沒有或少有其他藥物代謝酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體參與Met的消除。

在體外腎切片攝取Met預(yù)實(shí)驗(yàn)中摸索了孵育液中Met的最佳濃度和最佳孵育時(shí)間，Met濃度在0.604 mmol L-1、孵育時(shí)間以20 min為宜。在該實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，各供試物組腎切片Met攝取量均明顯低于純水對(duì)照組（為溶媒對(duì)照組的23%～54%），說明各供試物對(duì)腎OCT攝取Met的功能有不同程度的干擾。

小鼠腎OCT mRNA表達(dá)研究結(jié)果表明，DRI、 GRI、靛藍(lán)和靛玉紅高劑量組與純水對(duì)照組相比均出現(xiàn)不同程度的下調(diào)，此結(jié)果與OCT功能檢測(cè)結(jié)果相吻合。這進(jìn)一步表明，DRI、GRI、靛藍(lán)和靛玉紅可明顯抑制小鼠腎OCT功能。

DRI和GRI及其所含成分靛藍(lán)、靛玉紅在所分析的Met主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（t1/2β、Vd、Cl和AUC0-20min）、腎組織Met蓄積量、體外腎切片攝取Met量及OCT1 和OCT2 mRNA表達(dá)等結(jié)果均與抑制劑奎尼丁相似。因此，推斷DRI、GRI及其所含成分靛藍(lán)、靛玉紅可能對(duì)人OCT1和OCT2也有干擾，提示在服用陽離子型化學(xué)藥物時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎同時(shí)使用板藍(lán)根及其制劑，以確保臨床用藥的有效性和安全性。

OCT家族分布廣泛，幾乎遍布全身各組織，且處方藥中約40%屬于有機(jī)陽離子型化合物［1］，由此可預(yù)見某化合物若對(duì)OCT產(chǎn)生干擾作用，則此作用影響范圍很大。以口服降糖藥Met為例，腎分泌是雙胍類藥物消除的主要途徑，腎功能障礙時(shí)會(huì)造成雙胍類藥物的血藥濃度明顯升高，最終導(dǎo)致乳酸中毒?？诜﨧et發(fā)生乳酸中毒時(shí)，＞50%患者死亡［21］。

2010版《中國藥典》中有35個(gè)處方含有板藍(lán)根［10］。本研究團(tuán)隊(duì)已報(bào)道了板藍(lán)根及其所含成分抑制小鼠Oat1，Oat2和Oat3各亞型［8］。本研究結(jié)果表明，上述供試物同樣也抑制小鼠OCT1和OCT2。由這些結(jié)果不難看出，板藍(lán)根及其所含靛藍(lán)、靛玉紅對(duì)腎的確存在影響，提示應(yīng)進(jìn)行必要的臨床試驗(yàn)對(duì)此進(jìn)行驗(yàn)證。

致謝：本校2012級(jí)藥學(xué)專業(yè)部分畢業(yè)實(shí)習(xí)生參與了本研究，在此表示謝意。

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Effects of Radix Isatidis and contained indigo and indirubin on organic cation transporters OCT1 and OCT2 in mouse kidney

ZHANG Na1，QI Jin-feng1，SUN Chen1，YU Wen-hao1，WANG Yong-hui2，LIN Mei3
（1.Department of Pharmacology，College of Chinese Materia Medica，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China；2.Pharmacy Department，Zhumadian People′s Hospital，Zhumadian 463000，China；3.Pharmacy Department，Nanhai Hospital of Chinese Medicine，F(xiàn)oshan 528200，China）

OBJECTIVE To investigate the effect of Radix Isatidis and its constituents indigo and indirubin on two principal subtypes of organic cation transporters（OCT）OCT1，OCT2 in vivo in mice. METHODS Decoction of Radix Isatidis（DRI）1.6 and 6.4 g·kg-1，granules of Radix Isatidis（GRI）0.615 and 2.460 g·kg-1，indigo 0.008 and 0.640 mg·kg-1and indirubin 0.0192 and 1.536 mg·kg-1were ig given to NIH mice（60 mice per group），twice a day for 5 d.Four control groups were set up，including the vehicle of water，0.5%sodium carboxymethyl cellulose（CMC），additives of sucrose plus dextrin （1.5 g·kg-1）and positive control quinidine（0.025 g·kg-1）.Sixty minutes after the last dosing，all the mice were iv given metformin（Met）5 mg·kg-1，and at 1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 and 20.0 min after Met iv，10 mice in each group were sacrificed to collect whole blood and kidneys respectively.The right kidney was homogenized for Met accumulation test and the left one used to extract total RNA for analysis of OCT1 and OCT2 mRNA expressions by real-time PCR.The contents of Met in sera and kidneys were quantified by HPLC.Major pharmacokinetic parameters of Met in sera were analyzed by pharmacokinetic software（DAS 2.0）.RESULTS There was no significant difference between water control group，0.5% CMC group and sucrose plus dextrin group in any examined item.Compared with vehicle control group （water and 0.5%CMC group），all the related pharmacokinetic parameters in DRI 6.4 g·kg-1，GRI 2.46 g·kg-1，indigo 0.640 mg·kg-1and indirubin 1.536 mg·kg-1groups were changed significantly （P＜0.05，P＜0.01）.The elimination half time（t1/2β）was prolonged 13%-97%，volume of distribution reduced by 13%-72%，clearance（Cl）reduced by 9%-65%，and the area under the concentration-time curve（AUC0-20 min）increased by 13%-135%.AUC0-20 minobtained from renal Met accumulations was significantly increased（P＜0.01）while Met uptake by kidney slices was reduced（P＜0.05，P＜0.01）.The expressions of OCT1 and OCT2 mRNA were obviously down-regulated（P＜0.05，P＜0.01）.CONCLUSION The mouse renal OCT1 and OCT2 are significantly inhibited by DRI，GRI，indigo and indirubin.The inhibitory effect of Radix Isatidis on OCT1 and OCT2 probably arises from indigo and indirubin contained.

Radix Isatidis；indigo；indirubin；metformin；organic cation transporters

QI Jin-feng，Tel：13711301907，E-mail；qijinfeng2005@aliyun.com

R285.1

A

1000-3002（2016）02-0127-08

10.3867/j.issn.1000-3002.2016.02.007

2015-06-19接受日期：2015-12-03）

（本文編輯：齊春會(huì)）

張 娜，女，碩士研究生，主要從事藥動(dòng)學(xué)研究。

奇錦峰，E-mail；qijinfeng2005@aliyun.com，Tel：13711301907