貴州名牌產(chǎn)品前列舒樂顆粒淫羊藿苷HPLC含量測(cè)定研究

郭婷　許乾麗　茅向軍等

[摘要]目的 建立用高效液相色譜法測(cè)定前列舒樂顆粒中淫羊藿苷含量的方法。方法 采用Waters Cts柱，流動(dòng)相為乙腈-水（24：76），檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。結(jié)果 淫羊藿苷在0.0615～0.738μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.02%，RSD=2.31%（n=6）。結(jié)論 結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，結(jié)果穩(wěn)定。

[關(guān)鍵詞]高效液相色譜法；前列舒樂顆粒；淫羊藿苷；含量測(cè)定

[中圖分類號(hào)]R286 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2095-0616（2016）11-41-03

前列舒樂顆粒收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十二冊(cè)，由淫羊藿、黃芪、蒲黃、車前草和川牛膝等五味藥組成，具有補(bǔ)腎益氣，化瘀通淋的功效。用于腎脾雙虛，血瘀濕阻，氣化不利所致的淋癥、癃癥，前列腺增生，慢性前列腺炎；面色晃白，神疲乏力，腰膝酸軟，小腹墜脹，小便不爽，點(diǎn)滴不出，或尿頻、尿急、尿道澀痛等癥。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無含量測(cè)定項(xiàng)目。由于淫羊藿為方中主要藥物，而淫羊藿苷為其主要的藥理活性成分之一，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)，研究建立用HPLC法測(cè)定淫羊藿苷含量的方法，方法可靠，可更好地用于控制其質(zhì)量。

1儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀，LC-20AT輸液泵，CTO-20A柱溫箱，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣裝置；SPD-20A紫外檢測(cè)器；CBM-20A通訊集成器；LC-Solution色譜工作站。TCQ-250超聲波清洗器（北京醫(yī)療設(shè)備二廠）。淫羊藿苷對(duì)照品（中檢所，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110737-200512）。前列舒樂顆粒樣品（國(guó)藥準(zhǔn)字Z52020270）及缺淫羊藿的陰性樣品由貴州關(guān)德興寶芝林藥業(yè)有限公司提供。乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

液相色譜柱：Waters，SunFireTM C₁₈（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（24：76），檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μL。在該色譜條件下，淫羊藿苷的保留時(shí)間約為17.5min，陰性對(duì)照在淫羊藿苷位置處無干擾峰，說明處方中其他藥味對(duì)測(cè)定結(jié)果無影響，樣品中淫羊藿苷和其相近的其它峰分離完全（分離度>0.5），理論板數(shù)以淫羊藿苷計(jì)不低于4000。色譜見圖1。

2.2對(duì)照品溶液的制備

取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1mL含淫羊藿苷25μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取前列舒樂顆粒裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)、混勻，精密稱取1g，精密加入70%甲醇20mL，稱定重量，超聲20min，取出，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜0.45μm濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性對(duì)照溶液的制備

取處方中缺淫羊藿的陰性對(duì)照樣品，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5線性關(guān)系考察

精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含淫羊藿苷0.0615mg的對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液1、3、5、7、9、12μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，做線性回歸，回歸方程為Y=2.20×106X+4.46×103，r=0.9995，結(jié)果表明淫羊藿苷在0.0615～0.738μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.6精密度試驗(yàn)

精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積，結(jié)果其峰面積的RSD為0.22%，表明儀器精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取10μL同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果，淫羊藿苷平均峰面積為279536，RSD為2.14%，表明供試液在12h內(nèi)具備良好的穩(wěn)定性。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)前列舒樂顆粒6份，精密稱定，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果淫羊藿苷平均含量為0.3232mg/g，RSD為2.23%，說明本法具有較好的重復(fù)性。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

分別精密稱取6份已知含量（0 3232mg/g）的樣品約0.5g，精密加入淫羊藿苷（0.01538mg/mL）對(duì)照品溶液10mL，再精密加入70%甲醇10mL，分別按上述“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，見表1。

2.10樣品含量測(cè)定

分別取前列舒樂顆粒（10批）適量，分別按上述“2.2”項(xiàng)下方法制備10批樣品的供試品溶液，再分別精密吸取對(duì)照品溶液與10批供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，見表2。

3討論

經(jīng)過超聲處理及加熱回流兩種方法的對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)兩者提取效果基本一致，超聲處理相對(duì)簡(jiǎn)單，故采用超聲處理的前處理提取方法。

本研究分別試驗(yàn)了乙醇，70%乙醇，50%乙醇，甲醇，70%甲醇和50%甲醇共6種提取溶劑，試驗(yàn)結(jié)果表明，采用70%的乙醇作為提取溶劑的提取效率最高。對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行了比較，比較了10，20，30，40，60和90min，由實(shí)驗(yàn)得出，當(dāng)提取20min時(shí)，即可將制劑中的淫羊藿苷提取完全，而且由實(shí)驗(yàn)得出，超聲時(shí)間越長(zhǎng)，雜質(zhì)越多，造成分離困難，故選擇超聲處理20min即可。

文獻(xiàn)報(bào)道淫羊藿苷的測(cè)定方法主要有二階導(dǎo)數(shù)分光光度法、紫外分光光度法、高效薄層掃描法、高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法。隨著色譜技術(shù)的發(fā)展以及廣泛應(yīng)用，高效液相色譜法以其操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高和重現(xiàn)性好得到了越來越多的應(yīng)用，本文通過對(duì)提取方法的考察優(yōu)化，建立了高效液相色譜法測(cè)定貴州名牌產(chǎn)品前列舒樂顆粒中淫羊藿苷含量的方法，經(jīng)方法學(xué)表明該方法快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，很好地解決了一般中藥成分含量測(cè)定中的干擾成分多、難以分離的問題，可作為一種很好的前列舒樂顆粒中淫羊藿苷的含量測(cè)定方法，并為前列舒樂顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供依據(jù)。