不同產(chǎn)地及不同采收期五味子中木脂素含量比較

葛會奇　徐月

[摘要]目的 通過測定不同產(chǎn)地及不同采收期五味子中木脂素的含量，為明確五味子的適宜產(chǎn)地及適宜采收時間提供依據(jù)。方法 采用Ecosil Cts-AQ色譜柱（250ram×4.6mm，5μm），乙腈-水為流動相，進(jìn)行梯度洗脫，流速1mL/min，檢測波長為217nm。結(jié)果 不同產(chǎn)地五味子中木脂素含量差異明顯，遼寧東部山區(qū)（丹東、本溪）所產(chǎn)五味子中混合木脂素含量較高，含量在0.9658%～1.1232%之間；不同采收期五味子中木脂素含量差異不大。結(jié)論遼寧東部山區(qū)（丹東、本溪）適合五味子栽培，九月份是五味子的適宜采收期。

[關(guān)鍵詞]五味子；HPLC；木脂素；不同產(chǎn)地；不同采收期

[中圖分類號]R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]2095-0616（2016）11-38-04

五味子是木蘭科植物五味子Sehisandrachinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果實。五味子是遼寧省的主產(chǎn)藥材，有遼五味之稱。如果通過研究，能夠科學(xué)規(guī)范引導(dǎo)五味子種植，確定五味子的適宜采收期、適宜種植區(qū)域?qū)⒋蟠筇岣呶逦蹲淤|(zhì)量，將為遼寧藥都（本溪）注入新的活力。

五味子中含有木脂素、揮發(fā)油、多糖及有機(jī)酸等成分，我們對不同產(chǎn)地、不同采收期的五味子進(jìn)行全成分研究，以期從化學(xué)成分角度為五味子的適宜采收期、適宜種植區(qū)域的確定提供依據(jù)。木脂素類成分為五味子中主要活性成分，本文是對不同產(chǎn)地、不同采收期五味子中木脂素含量的比較研究。

1儀器與試藥

1.1實驗儀器

Waters高效液相色譜儀（Waters e2695 pump、Waters2998檢測器，Empower3數(shù)字處理軟件）；KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療器械有限公司）；AE240型十萬分之一分析天平（瑞士METTLER）；FA1004B電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2實驗藥材

五味子由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)王冰教授鑒定。

1.3實驗試劑

五味子醇甲（1106-101018），五味子醇乙（1327-091027），五味子酯甲（1330-110116），五味子甲素（0764-200006），五味子乙素（110765-200205）均購自中國藥品生物制品檢定研究院；五味子丙素（A0593）購于成都曼思特生物科技有限公司。甲醇、乙腈為色譜純，娃哈哈純凈水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

Ecosil C₁₈色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0-20min，55%A；20～25min，55%～75%A：25～40min，75%～65%A：40～45min，65%～55%A）；檢測波長217nm；流速1mL/min；進(jìn)樣量10μL；柱溫30℃。色譜圖見圖1。

2.2對照品溶液制備

精密稱取五味子醇甲、醇乙、甲素、酯甲、乙素、丙素對照品適量，置5mL容量瓶中，配制成濃度分別為0.076、0.046、0.01552、0.03528、0.05504、0.02272mg/mL的五味子混合對照品溶液，4℃冰箱中保存，備用。

2.3供試品溶液制備

取五味子粉末（過60目篩）約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，稱重，超聲30min，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.4線性關(guān)系考察

精密吸取上述混合對照品，分別進(jìn)樣1、5、10、15、20μL，依上述色譜條件進(jìn)行測定，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程見表1。

2.5精密度試驗

精密吸取混合木脂素對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、丙素的RSD分別為0.64%、1.48%、0.55%、0.90%、0.90%、1.39%，均小于3%，表明儀器性能良好。

2.6穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一五味子供試品溶液10μL，分別在0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣測定，結(jié)果五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、丙素6種木脂素峰面積的RSD分別為0.51%、1.50%、2.14%、2.52%、1.32%、1.62%，表明供試品在10h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗

精密稱取同一五味子粉末6份，各0.25g，按“2.3”項下制備供試品溶液，依本實驗方法測定并計算含量，結(jié)果五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、丙素6種木脂素的含量的RSD分別為1.22%、2.03%、2.81%、1.56%、2.15%、2.34%，表明方法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率試驗

取已知含量的五味子粉末0.12g，精密稱定，共6份。根據(jù)樣品中五味子醇甲的含量，加入混合對照品1.7mL，按“2.3”項下方法操作，并按“2.1”項下色譜條件測定，計算五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素的加樣回收率平均值分別為95.13%、97.11%、97.28%、97.53%、98.06%、98.25%，RSD分別為1.54%、0.90%、1.22%、1.40%、1.07%、1.09%。

2.9樣品測定

取不同產(chǎn)地及采收期五味子樣品，粉碎，過60目篩，分別按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別依相應(yīng)的色譜條件進(jìn)行HPLC測定，記錄峰面積，計算含量，結(jié)果見表2～3。

由表2可知，混合木脂素含量以遼寧東部地區(qū)丹東、本溪含量較高，在0.9658%～1.1232%之間，其他地區(qū)在0.8348%～0.9343%之間。結(jié)果表明，遼寧東部地區(qū)丹東、本溪產(chǎn)地的五味子混合木脂素含量較高。

由表3可知，本溪產(chǎn)地不同采收期的五味子中混合木脂素的含量未見差異，含量均在1.11%左右，可見9月份五味子中木脂素含量變化不明顯，9月份均適宜采收。

3討論

五味子木脂素類成分具有抗炎、抗氧化、抗病毒及抑制潰瘍等藥理作用，有文獻(xiàn)報道，木脂素成分具有較強(qiáng)的保肝作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，五味子中木脂素類成分主要用于治療消化系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等疾病。由此，五味子被廣泛用于中醫(yī)臨床方劑和中藥制劑中，并已開發(fā)研制聯(lián)苯雙酯、雙環(huán)醇和五仁醇膠囊等保肝降酶藥物。本實驗對五味子中的代表性有效成分木脂素類成分進(jìn)行研究，對確定五味子的適宜種植區(qū)域及適宜采收期是有明顯意義的。

五味子中含有多種木脂素，其中五味子醇甲是2015版中國藥典含量測定的指標(biāo)性成分。本實驗對多種五味子木脂素同時進(jìn)行含量測定，包括五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、丙素等，來探討不同產(chǎn)地及不同采收期對五味子混合木脂素的影響。

研究表明，遼寧東部（丹東、本溪）所產(chǎn)五味子中木脂素含量較高。遼寧東部多為山區(qū)，多年來一直對五味子有栽培。本研究結(jié)果從有效成分含量的角度驗證了遼寧東部山區(qū)適宜五味子的種植。五味子一般成熟期在九月份內(nèi)，研究表明在成熟期內(nèi)木脂素含量變化不十分明顯，如果以木脂素含量為依據(jù)，可確定九月份均適宜采收。

五味子中尚含有揮發(fā)油、多糖及有機(jī)酸等成分，我們將對不同產(chǎn)地、不同采收期的五味子進(jìn)行全成分研究，以期從化學(xué)成分角度為五味子的適宜采收期、適宜種植區(qū)域的確定提供依據(jù)。