miR-200b靶向DNMT3A抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖與誘導(dǎo)凋亡

羅衛(wèi)民，羅湘玉，郭家龍，林稱意，張軍

miR-200b靶向DNMT3A抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖與誘導(dǎo)凋亡

羅衛(wèi)民，羅湘玉，郭家龍，林稱意，張軍△

目的 探討miR-200b是否通過靶向調(diào)控DNMT3A抑制人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖與誘導(dǎo)凋亡。方法運用qRT-PCR檢測miR-200b在不同非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)；將miR-200b mimics、scramble、DNMT3A-siRNA、control-siRNA分別轉(zhuǎn)染于A549細(xì)胞，其中scramble與control-siRNA分別作為miR-200b mimics與DNMT3A-siRNA的陰性對照組。采用Western blot檢測A549細(xì)胞中DNMT3A蛋白表達(dá)；采用MTT與AnnexinV-FITC/PI染色法分別檢測A549細(xì)胞的增殖與凋亡，比較miR-200b mimics與DNMT3A-siRNA對A549細(xì)胞增殖與凋亡的影響。結(jié)果 qRT-PCR結(jié)果顯示，miR-200b在非小細(xì)胞肺癌A549、H1299、L78、H460細(xì)胞中的表達(dá)均明顯低于正常人支氣管上皮16HBE細(xì)胞，其中以A549細(xì)胞下調(diào)最為明顯（P＜0.05）。Western blot結(jié)果顯示，外源過表達(dá)miR-200b或沉默DNMT3A能明顯下調(diào)A549細(xì)胞中DNMT3A蛋白的水平。MTT結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-200b mimics或沉默DN?MT3A 48 h、72 h、96 h后，反映細(xì)胞增殖的光密度（OD）值與各自陰性對照組比較明顯減?。≒＜0.05）。AnnexinVFITC/PI染色結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-200b mimics或沉默DNMT3A后，A549細(xì)胞的凋亡率分別為（23.33%±0.90%、20.41%±0.70%）均高于各自陰性對照組（5.28%±0.55%、5.68%±0.47%，P＜0.05）。結(jié)論 miR-200b通過下調(diào)DNMT3A抑制人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖與誘導(dǎo)凋亡。

微RNAs；癌，非小細(xì)胞肺；細(xì)胞增殖；細(xì)胞凋亡；miR-200b；DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶3A

MicroRNAs（miRNAs）最初在秀麗隱桿線蟲中被發(fā)現(xiàn)，是一類高度保守的單鏈非編碼小RNA。目前，在人類基因組中已發(fā)現(xiàn)超過700種miRNAs，大約調(diào)控人類30%的轉(zhuǎn)錄本［1］。miRNAs通過與靶mRNAs 3′非編碼區(qū)結(jié)合，導(dǎo)致翻譯抑制或mRNA降解，從而沉默靶基因的表達(dá)。研究表明miRNAs參與各種細(xì)胞過程的調(diào)控，包括細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、分化以及凋亡，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要癌基因或抑癌基因樣作用［2］。研究顯示miR-200b在胃癌［3］、膠質(zhì)瘤［4］、乳腺癌［5］、宮頸癌［6］中表達(dá)下調(diào)，并對腫瘤具有抑制作用。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A （DNMT3A）在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，如在肺癌細(xì)胞中外源高表達(dá)miR-101通過靶向調(diào)控DNMT3A抑制肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移［7］。目前有關(guān)miR-200b與DNMT3A在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中的研究尚少見報道。本研究旨在探討miR-200b在NSCLC中的生物學(xué)作用及相關(guān)作用機制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞系 人NSCLC細(xì)胞株A549、H1299、L78、H460細(xì)胞，人支氣管上皮細(xì)胞株16HBE細(xì)胞均由中山大學(xué)腫瘤研究所惠贈。細(xì)胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)，置于37℃、5%CO2的恒溫箱中培養(yǎng)。

1.2 主要材料 Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑及PCR引物購自美國Invitrogen公司；miR-200b mimics及scramble購自美國Ambion公司；DNMT3A-siRNA及control-siRNA質(zhì)粒購自Santa Cruz公司；DNMT3A抗體和β-actin抗體購自美國Epigentek公司；RPMI 1640培養(yǎng)基和小牛血清購自Gibco公司；Annexin V-EGFP細(xì)胞凋亡檢測試劑盒購自南京凱基生物科技公司；MTT粉購自美國Sigma公司。

1.3 qRT-PCR檢測miR-200b在不同NSCLC細(xì)胞中及轉(zhuǎn)染miR-200b mimics的A549細(xì)胞中的表達(dá)水平 分別收集A549、H1299、L78、H460、16HBE細(xì)胞以及轉(zhuǎn)染miR-200b mimics的A549細(xì)胞，用RNA提取試劑盒提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。PCR擴(kuò)增反應(yīng)為20 μL體系，包括：PCR primers（5 μmol/L）0.4 μL，Taq DNA polymerase（5 U/μL）0.2 μL，RT product 2.0 μL，2×SYBR Mix 10 μL，滅菌蒸餾水7.4 μL。循環(huán)體系為：95℃3 min；95℃12 s，62℃35 s，72℃30 s，40個循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，在不同細(xì)胞株中所測定的miR-200b的相對表達(dá)量采用2-ΔΔCt法分析。

1.4 瞬時轉(zhuǎn)染miRNA 培養(yǎng)A549細(xì)胞，將scramble、miR-200b mimics、control-siRNA、DNMT3A-siRNA分別轉(zhuǎn)染于A549細(xì)胞中。消化細(xì)胞并吹打制成5×104個細(xì)胞/mL的懸液，按2 mL/孔鋪至6孔板內(nèi)，放置于37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細(xì)胞匯合度達(dá)30%～50%用于轉(zhuǎn)染。在無菌EP管中配好lipofectamin2000及待轉(zhuǎn)染試劑；室溫放置20 min，使脂質(zhì)體與miRNA mimics形成復(fù)合體。用無血清培養(yǎng)液輕輕洗滌待轉(zhuǎn)染細(xì)胞，加入1 mL無血清RPMI 1640，然后將孵育好的復(fù)合體混合溶液加至6孔板中，將細(xì)胞置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染6 h后換成有RPMI 1640完全細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48 h。

1.5 Western blot檢測各組細(xì)胞DNMT3A的表達(dá)水平 實驗分4組：scramble組、miR-200b mimics組、control-siRNA組、DNMT3A-siRNA組；其中scramble組與control-siRNA組分別作為miR-200b mimics組與DNMT3A-siRNA組的陰性對照組。分別收集上述4組轉(zhuǎn)染細(xì)胞并提取細(xì)胞總蛋白，BCA法測定蛋白濃度。各組取等量樣本，進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳后，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂牛奶封閉，加入DNMT3A抗體或β-actin抗體，4℃過夜。TBST洗膜30 min，加入二抗室溫孵育1 h，TBST洗膜30 min，然后加ECL發(fā)光劑，X線片曝光、顯影、定影。

1.6 MTT法檢測細(xì)胞增殖 細(xì)胞分組同1.5。消化各組細(xì)胞，取200 μL即5×103個細(xì)胞接種于96孔板中，設(shè)復(fù)孔6個，分別培養(yǎng)24、48、72、96 h待至臨近飽和時，每孔加20 μL MTT液，孵育4 h，每孔中加入DMSO 150 μL，低速振蕩10 min，選擇波長為570 nm，在酶標(biāo)儀上測定各孔光密度（OD）值，實驗重復(fù)3次。

1.7 AnnexinV-FITC/PI檢測細(xì)胞凋亡 細(xì)胞分組同1.5。收集各組培養(yǎng)至80%左右融合，用PBS液洗滌細(xì)胞2次，離心，取約1×106個細(xì)胞，加入100 μL的結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞。加5 μL AnnexinV-FITC混勻，再加1 μL PI混勻。室溫下避光反應(yīng)15～30 min，上機，流式細(xì)胞儀檢測。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。所有結(jié)果均以±s表示。兩組比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Boferroni法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-200b在不同NSCLC細(xì)胞株中表達(dá)水平比較 qRT-PCR結(jié)果顯示，與16HBE細(xì)胞比較，miR-200b在NSCLC A549、H1299、L78、H460細(xì)胞中的表達(dá)均明顯下調(diào)，其中以A549細(xì)胞下調(diào)最為明顯，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=10.528，P=0.001），見圖1。

Fig.1 The expressions of miR-200b in different non-small cell lung cancer cells and human bronchial epithelial cells detected by qRT-PCR圖1qRT-PCR檢測miR-200b在不同NSCLC細(xì)胞株與人支氣管上皮細(xì)胞中的表達(dá)

2.2 各組miR-200b轉(zhuǎn)染效率及其對DNMT3A蛋白表達(dá)的影響 qRT-PCR結(jié)果顯示，與scramble組比較，miR-200b mimics組A549細(xì)胞中miR-200b的表達(dá)水平明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=20.350，P＜0.01），見圖2。Western blot結(jié)果顯示，miR-200b mimics組和DNMT3A-siRNA組DNMT3A蛋白表達(dá)水分別平較scramble組和control-siRNA組明顯降低，提示在NSCLC A549細(xì)胞中miR-200b能下調(diào)DNMT3A蛋白表達(dá)，見圖3。

Fig.2 The transfection efficiency of miR-200b mimics in A549 cells validated by qRT-PCR圖2 qRT-PCR驗證miR-200b mimics在A549細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率

Fig.3 The effect of miR-200b on the expression of DNMT3A protein detected by Western blot assay圖3 Western blot檢測miR-200b對DNMT3A蛋白的影響

2.3 miR-200b對NSCLC細(xì)胞增殖的影響 MTT結(jié)果顯示，miR-200b mimics組和DNMT3A-siRNA 組A549細(xì)胞的增殖能力在48 h、72 h、96 h后明顯受到抑制，與各自對照組比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（48 h：F=8.874，P=0.006；72 h：F=16.713，P= 0.001；96 h：F=16.468，P=0.001），提示外源高表達(dá)miR-200b或沉默DNMT3A表達(dá)能抑制A549細(xì)胞的增殖，見圖4。

2.4 miR-200b對NSCLC細(xì)胞凋亡的影響 miR-200b mimics組和DNMT3A-siRNA組A549細(xì)胞凋亡率分別為23.33%±0.90%、20.41%±0.70%，均高于各自對照組 5.28%±0.55%、5.68%±0.47%（F= 181.305，P＜0.001），提示外源高表達(dá)miR-200b或沉默DNMT3A表達(dá)能誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡，見圖5。

Fig.4 The effects of miR-200b and DNMT3A-siRNA on proliferation ability of A549 cells detected by MTT assay圖4MTT法檢測miR-200b和DNMT3A-siRNA對A549細(xì)胞增殖能力的影響

Fig.5 The effects of miR-200b and DNMT3A-siRNA on apoptotic rates of A549 cells detected by Annexin V/propidium iodide staining圖5 凋亡實驗檢測miR-200b和DNMT3A-siRNA對A549細(xì)胞凋亡率的影響

3 討論

3.1 肺癌的發(fā)展現(xiàn)狀 肺癌是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因，其中80%的肺癌為NSCLC［8］。在過去5年中，我國NSCLC患者呈迅速增長趨勢。盡管目前臨床治療和術(shù)后監(jiān)測策略有了大幅改善，但NSCLC患者根治術(shù)后5年生存率只有30%～60%［9］。因此，闡明其發(fā)生發(fā)展的潛在調(diào)控機制以及尋找有效治療靶點迫在眉睫。雖然目前在調(diào)控肺癌相關(guān)基因的研究中已取得一定的進(jìn)展，但這些異?；虻牟±砩砉δ芎蜐撛跈C制尚不清楚。

3.2 miR-200b在腫瘤中的研究狀況 目前，研究者對miR-200家族的表達(dá)模式與功能在不同的腫瘤中進(jìn)行了廣泛的研究，但仍存有爭議。miR-200家族包括miR-200、miR-200b、miR-200c、miR-429 和miR-141［10］。研究顯示，miR-200家族參與不同的病理生理過程，并在多種腫瘤中發(fā)揮抑癌作用，如結(jié)腸癌、胰腺癌、胃癌以及子宮內(nèi)膜癌［11-13］。研究發(fā)現(xiàn)，miR-200b在前列腺癌與胃癌中參與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、腫瘤干細(xì)胞的形成與維持以及腫瘤的侵襲［14-15］；在膠質(zhì)瘤中表達(dá)下調(diào)，并靶向CREB1抑制腫瘤細(xì)胞增殖［4］；在乳腺組織和細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，外源高表達(dá)miR-200b通過靶向Sp1抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與誘導(dǎo)凋亡［5］。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-200b在不同NSCLC細(xì)胞中表達(dá)水平與人支氣管上皮細(xì)胞相比均下調(diào)。在NSCLC細(xì)胞中外源高表達(dá)miR-200b后，細(xì)胞的增殖能力明顯受到抑制，而發(fā)生凋亡的細(xì)胞也明顯增多，表明miR-200b能抑制NSCLC細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

3.3 DNMT3A在腫瘤中的研究 DNMT3A是一種從頭甲基轉(zhuǎn)移酶，調(diào)節(jié)哺乳動物CpG甲基化。CpG二核苷的胞嘧啶甲基化是重要的表觀遺傳修飾，高甲基化水平是基因啟動子轉(zhuǎn)錄沉默的特征。DN?MT3A在胚胎形成與疾病發(fā)生的動態(tài)DNA甲基化過程中發(fā)揮重要作用，高甲基化水平使腫瘤抑制基因沉默，從而參與腫瘤的發(fā)生［16-17］。有研究表明，DNMT3A在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，如乳腺癌［16］、肝癌［17］、腎癌［18］、胃癌［19］、膠質(zhì)瘤［20］、宮頸癌［21］。在乳腺癌中miR-143通過直接靶向DNMT3A抑制乳腺癌細(xì)胞增殖［16］。在肝癌中 miR-450a通過靶向DNMT3A抑制肝癌細(xì)胞增殖［17］。DNMT3A在腎細(xì)胞癌中高表達(dá)與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后生存明顯相關(guān)［18］。在胃癌細(xì)胞中miR-200b通過靶向DNMT3A抑制腫瘤細(xì)胞的遷移與侵襲［19］。miR-29s通過靶向DNMT3A抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移［20］。miR-182通過下調(diào)DNMT3A誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡［21］。

3.4miR-200b與DNMT3A在NSCLC中的研究 本研究表明，在NSCLC細(xì)胞中高表達(dá)miR-200b能下調(diào)DNMT3A蛋白水平，進(jìn)一步在NSCLC細(xì)胞中沉默DNMT3A后，不僅NSCLC細(xì)胞的增殖能力受到抑制，而且凋亡的細(xì)胞數(shù)也增多，表明miR-200b可能通過下調(diào)DNMT3A抑制NSCLC細(xì)胞增殖與誘導(dǎo)凋亡。

綜上所述，miR-200b在NSCLC中表達(dá)下調(diào)，并通過下調(diào)DNMT3A抑制NSCLC細(xì)胞增殖與誘導(dǎo)凋亡，提示miR-200b是一個潛在的治療靶點，為今后NSCLC的靶向治療提供了新的實驗依據(jù)。

［1］Esquela-KerscherA.Thelin-4microRNA：Theultimate micromanager［J］.Cell Cycle，2014，13（7）：1060-1061.doi：10.4161/cc.28384.

［2］Garzon R，Calin GA，Croce CM.MicroRNAs in cancer［J］.Annu Rev Med，2009，60：167-179.doi：10.1146/annurev.med.59.053006.104707.

［3］Guo R，Ning XH，Jiang K，et al.Methylation of miR-200b and its effects on proliferation，invasion of gastric cancer cell line MGC-803［J］.Tianjin Med J，2015，43（4）：340-344.［郭蓉，寧向紅，姜葵，等.甲基化調(diào)節(jié)miR-200b的表達(dá)及其對胃癌MGC-803細(xì)胞增殖、侵襲能力的影響［J］.天津醫(yī)藥，2015，43（4）：340-344］. doi：10.11958/j.issn.0253-9896.2015.04.002.

［4］Peng B，Hu S，Jun Q，et al.MicroRNA-200b targets CREB1 and suppresses cell growth in human malignant glioma［J］.Mol Cell Biochem，2013，379（1/2）：51-58.doi：10.1007/s11010-013-1626-6.

［5］Yao Y，Hu J，Shen Z，et al.MiR-200b expression in breast cancer：a prognostic marker and act on cell proliferation and apoptosis by targeting Sp1［J］.J Cell Mol Med，2015，19（4）：760-769.doi：10.1111/jcmm.12432.

［6］Xia W，Li J，Chen L，et al.MicroRNA-200b regulates cyclin D1 expression and promotes S-phase entry by targeting RND3 in HeLa cells［J］.Mol Cell Biochem，2010，344（1/2）：261-226.doi：10.1007/s11010-010-0550-2.

［7］Yan F，Shen N，Pang J，et al.Restoration of miR-101 suppresses lung tumorigenesis through inhibition of DNMT3a-dependent DNA methylation［J］.Cell Death Dis，2014，5：e1413.doi：10.1038/ cddis.2014.380.

［8］Tiseo M，Bordi P，Bortesi B，et al.Bio-FAST trial group.ERCC1/ BRCA1 expression and gene polymorphisms as prognostic and predictive factors in advanced NSCLC treated with or without cisplatin ［J］.Br J Cancer，2013，108（8）：1695-1703.doi：10.1038/bjc.2013.

［9］Lu S，Azada MC，Ou SH.Choroidal metastasis response to crizotinib in a ROS1-rearranged NSCLC patient［J］.Lung Cancer，2015，87 （2）：207-209.doi：10.1016/j.lungcan.2014.12.011.

［10］Gregory PA，Bert AG，Paterson EL，et al.The miR-200 family and miR-205 regulate epithelial to mesenchymal transition by targeting ZEB1 and SIP1［J］.Nat Cell Biol，2008，10（5）：593-601.doi：10.1038/ncb1722.

［11］Tian Y，Pan Q，Shang Y，et al.MicroRNA-200（miR-200）cluster regulation by achaete scute-like 2（Ascl2）：impact on the epithelialmesenchymal transition in colon cancer cells［J］.J Biol Chem，2014，289（52）：36101-36115.doi：10.1074/jbc.M114.598383.

［12］Li W，Lebrun DG，Li M.The expression and functions of microRNAsin pancreaticadenocarcinoma and hepatocellularcarcinoma［J］.Chin J Cancer，2011，30（8）：540-550.doi：10.5732/ cjc.011.10197.

［13］Bai JX，Yan B，Zhao ZN，et al.Tamoxifen represses miR-200 microRNAs and promotes epithelial-to-mesenchymal transition by up-regulating c-Myc in endometrial carcinoma cell lines［J］. Endocrinology，2013，154（2）：635-645.doi：10.1210/en.2012-1607.

［14］Mongroo PS，Rustgi AK.The role of the miR-200 family in epithelial-mesenchymaltransition［J］.Cancer Biol Ther，2010，10 （3）：219-222.

［15］Katoh M，Igarashi M，F(xiàn)ukuda H，et al.Cancergenetics and genomics of human FOXfamily genes［J］.Cancer Lett，2013，328 （2）：198-206.doi：10.1016/j.can le t.2012.09.017.

［16］Ng EK，Li R，Shin VY，et al.MicroRNA-143 is downregulated in breast cancer and regulates DNA methyltransferases 3A in breast cancer cells［J］.Tumour Biol，2014，35（3）：2591-2598.doi：10.1007/s13277-013-1341-7.

［17］Weng Z，Wang D，Zhao W，et al.microRNA-450a targets DNA methyltransferase 3a in hepatocellular carcinoma［J］.Exp Ther Med，2011，2（5）：951-955.

［18］LiM，WangY，SongY，etal.Expressionprofilingand clinicopathological significance of DNA methyltransferase 1，3A and 3B in sporadic human renal cell carcinoma［J］.Int J Clin Exp Pathol，2014，7（11）：7597-7609.

［19］Tang H，Deng M，Tang Y，et al.miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression ［J］.Clin Cancer Res，2013，19（20）：5602-5612.doi：10.1158/ 1078-043 2.CCR-13-1326.

［20］Xu H，Sun J，Shi C，et al.miR-29s inhibit the malignant behavior of U87MG glioblastoma cell line by targeting DNMT3A and 3B［J］. Neurosci Lett，2015，590：40-46.doi：10.1016/j.neulet.2015.01.060.

［21］Sun J，Ji J，Huo G，et al.miR-182 induces cervical cancer cell apoptosis through inhibiting the expression of DNMT3a［J］.Int J Clin Exp Pathol，2015，8（5）：4755-4763.

（2016-01-05收稿 2016-03-01修回）

（本文編輯 李鵬）

miR-200b suppresses proliferation and induces apoptosis in non-small cell lung cancer cells by targeting DNMT3A

LUO Weimin，LUO Xiangyu，GUO Jialong，LIN Chengyi，ZHANG Jun△Department of Cardiothoracic Surgery，the Affiliated Shiyan Taihe Hospital of
Hubei College of Pharmacy，Shiyan 442000，China
△

Objective To investigate whether miR-200b suppresses proliferation and induces apoptosis of non-small cell lung cancer cells by targeting DNMT3A.Methods A qRT-PCR was employed for detecting the expression of miR-200b in different non-small cell lung cancer cells and human bronchial epithelial cells.A549 cells were transfected with miR-200b mimics，scramble，DNMT3A-siRNA and control-siRNA，respectively.The scramble and control-siRNA were served the negative control of miR-200b mimics and DNMT3A-siRNA，respectively.Western blot assay was conducted to detect the expression of DNMT3A protein in A549 cells.MTT and Annexin V/propidium iodide staining were employed to detect the proliferation ability and apoptosis rate of A549 cells.The effects of miR-200b mimics and DNMT3A-siRNA on the proliferation and apoptosis rate of A549 cells were compared between groups.Results Results of qRT-PCR showed that the expression of miR-200b was significantly down-regulated in A549，H1299，L78 and H460 cells than that of 16HBE cells.Among them，the most obviously reduction was found in A549 cells（P＜0.05）.Western blot assay showed that the level of DNMT3Aproteinwasinhibitedbyrestored miR-200b or knock-down DNMT3A in A549 cells.After transfection of miR-200bmimicsorknock-downDNMT3Afor48h，72 hand96h，MTTshowedthattheODvalues，whichreflectedtheopticaldensityofcellproliferationweresignificantlylowerthanthose inthecontrolgroup（P＜0.05）.AnnexinV/propidiumiodidestainingshowedthatapoptosisratesofA549cellsaftertransfectionof miR-200bmimicsorknock-downDNMT3Awere（23.33%±0.90%and20.41%±0.70%），comparedwiththecontrolgroup（5.28%± 0.55%and5.68%±0.47%，P＜0.01）.Conclusion miR-200bsuppressescellproliferationandinducesapoptosisbytargeting DNMT3Ainnon-smallcelllungcancer.

microRNAs；carcinoma，non-small-cell lung；cell proliferation；apoptosis；miR-200b；DNMT3A

R734.2

A

10.11958/20150421

湖北省教育廳科學(xué)研究計劃指導(dǎo)性項目（B2015477）

湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院心胸外科（郵編442000）

羅衛(wèi)民（1978），男，碩士研究生，副主任醫(yī)師，主要從事食管癌、肺癌臨床研究

△通訊作者 E-mail：dengmin2006@163.com