DC-CIK聯(lián)合放化療對小細胞肺癌患者免疫功能的影響

康紅剛張靜 王寶中 劉美榮聊城市人民醫(yī)院腫瘤科，山東聊城252

DC-CIK聯(lián)合放化療對小細胞肺癌患者免疫功能的影響

康紅剛#張靜 王寶中 劉美榮
聊城市人民醫(yī)院腫瘤科，山東聊城2520000

目的探討細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）、樹突狀細胞（DC）免疫治療聯(lián)合放化療對小細胞肺癌患者外周血淋巴細胞亞群的影響及療效。方法收集60例小細胞肺癌患者資料，其中32例患者采用DC-CIK聯(lián)合放化療（化療方案為依托泊苷+順鉑/依托泊苷+卡鉑/伊立替康+順鉑，放療方案為適形調(diào)強放療技術(shù)）為聯(lián)合治療組；28例進行放化療的患者為對照組。治療結(jié)束2周后采用流式細胞儀檢測外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細胞、Treg細胞及相關(guān)因子IFN-γ、IL-2、IL-10、TGF-β1的變化，并評價療效。結(jié)果聯(lián)合治療組IFN-γ治療后較治療前升高，IL-10、TGF-β1較治療前降低（P＜0.05）；聯(lián)合治療組患者外周血CD3+CD8+、CD3+CD4+、NK細胞治療后水平高于對照組（P＜0.05）；而Treg細胞、IL-10、TGF-β1治療后水平低于對照組（P＜0.05）。對照組患者外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細胞治療后較治療前下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；細胞因子在治療前后無變化。雖然聯(lián)合組疾病控制率較對照組高，但差異無統(tǒng)計學意義（87.50%vs 71.43%，P＞0.05）。結(jié)論自體DC-CIK治療可以改善小細胞肺癌聯(lián)合放化療患者的細胞免疫功能，是否能改善生存需進一步研究。

DC-CIK；小細胞肺癌；過繼性免疫細胞治療；放化療

Oncol Prog，2016，14（5）

小細胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）是肺癌的一種主要類型，惡性程度高，侵襲性強，臨床進展明顯快于非小細胞肺癌，預后差。目前主要治療方法為同步放化療，對于耐受差的患者可行序貫化放療。放化療對機體的免疫功能有一定的損傷［1］，在殺傷腫瘤細胞的同時，也可能通過免疫抑制而增加惡性腫瘤患者疾病進程中復發(fā)、轉(zhuǎn)移的概率。細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokine induced killer，CIK）具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺滅腫瘤細胞的優(yōu)點，且增殖快，具有腫瘤識別能力，已經(jīng)作為新一代抗腫瘤過繼細胞免疫治療在臨床中廣泛應用。樹突狀細胞（dendritic cell，DC）是目前所知的體內(nèi)功能最強大的專職抗原遞呈細胞，是唯一能激活幼稚T細胞的抗原遞呈細胞［2］，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)聯(lián)。DC與CIK共培養(yǎng)可促進CIK的增殖，并增強細胞免疫應答的功能，從而發(fā)揮抗腫瘤的功能［3］。本研究通過檢測治療前后T細胞亞群比例及細胞因子水平的變化從而觀察DC-CIK聯(lián)合放化療對小細胞肺癌患者免疫功能的影響。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取聊城市人民醫(yī)院2012年5月至2014年3月收治的經(jīng)病理學檢查確診為小細胞肺癌的患者共60例，患者心臟、肝、腎功能可耐受化放療及生物治療，血象正常，Karnofsky評分≥70分。32例接受化放療及DC-CIK治療的患者為聯(lián)合治療組，28例單純行化放療患者為對照組，兩組臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（表1）

表1　兩組患者的臨床特征

1.2治療方案

兩組采用的化療方案：依托泊苷+順鉑/依托泊苷+卡鉑/伊立替康+順鉑，根據(jù)化療療效2～4個周期后行三維適形放療，放療后根據(jù)病情至少進行2個周期化療。聯(lián)合治療組生物治療方案：在化療前采用單采機采集患者外周單個核細胞，體外培養(yǎng)DC及CIK，CIK經(jīng)DC誘導后將培養(yǎng)好的DC及CIK細胞回輸給患者?；剌敃r避開化療，分3次回輸（細胞數(shù)＞10×109/次），患者每個月進行一次治療，直至病情進展或放棄治療，至少完成3次治療。

1.3檢測指標

在第一次回輸DC-CIK前及完成3次DC-CIK治療結(jié)束后2周抽血送檢，采用流式細胞儀檢測T細胞亞群：CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細胞、Treg細胞的變化情況；應用ELISA檢測治療前后γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）、白介素-2（interleukin-2，IL-2）、白介素-10（interleukin-10，IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）變化情況。

1.4近期療效評價

按照RECIST實體瘤近期療效判定標準分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）、疾病進展（PD）。治療結(jié)束后2周評價療效，疾病控制率=（CR+PR+SD）例數(shù)/總例數(shù)×100%，患者出院后醫(yī)院對其進行定期跟蹤隨訪，統(tǒng)計每組病例的無疾病進展時間（PFS）。

1.5統(tǒng)計學方法

應用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，采用方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1兩組患者治療前后外周血 TT細胞亞群水平的比較

兩組患者均完成了放化療，且治療前兩組免疫功能指標比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。在放化療結(jié)束時，聯(lián)合治療組患者共接受3個周期以上的DC-CIK治療。治療后聯(lián)合治療組CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細胞比例高于對照組，而Treg細胞比例低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。聯(lián)合治療組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+比例治療后較治療前比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），NK細胞比例比治療前升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對照組中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細胞治療后較治療前降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2　兩組患者外周血中T T細胞亞群水平的比較（%±s）

表2　兩組患者外周血中T T細胞亞群水平的比較（%±s）

注：*與同期對照組比較，P＜0.05；#與本組治療前比較，P＜0.05

指標CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+Treg細胞NK細胞聯(lián)合治療組（n=32）治療前61.41±10.05 31.82±7.21 33.12±5.02 6.03±0.16 14.70±4.87治療后64.14±12.51 33.61±9.12*36.15±7.76*3.40±0.14*23.31±4.21*#對照組（n=28）治療前62.10±4.12 32.25±7.01 32.42±2.32 5.97±0.18 15.20±3.35治療后49.36±9.82#21.03±7.54#20.83±2.12#4.96±0.13 8.31±4.16#

2.2兩組患者治療前后細胞因子水平比較

治療前兩組患者IFN-γ、IL-2、IL-10、TGF-β1水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。治療結(jié)束后2周時，聯(lián)合治療組IFN-γ水平較治療前升高，而IL-10和TGF-β1水平較治療前下降，且低于對照組治療后水平，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對照組各種細胞因子與治療前比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（表3）

表3　兩組患者治療前后IFN-IFN-γ 、IL-IL-2 2、IL-IL-1010、TGF-TGF-β 1 1水平比較（pg/ml，±s）

表3　兩組患者治療前后IFN-IFN-γ 、IL-IL-2 2、IL-IL-1010、TGF-TGF-β 1 1水平比較（pg/ml，±s）

注：*與同期對照組比較，P＜0.05；#與本組治療前比較，P＜0.05

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2.3兩組療效的比較

聯(lián)合治療組中位隨訪時間12個月（8～24個月），中位PFS 6.3個月（4～11個月），其中17例尚在隨訪中；對照組中位隨訪時間9個月（6～24個月），中位PFS 5.1個月（3～10個月），其中13例尚在隨訪中；兩組PFS比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。聯(lián)合治療組的疾病控制率為87.50%，雖高于對照組的71.43%，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（表4）

表4　兩組患者的近期療效

3　討論

小細胞肺癌惡性程度高，在確診的時候多數(shù)為局部晚期或廣泛期。對于局部晚期腫瘤，以放化療為主的綜合治療為主要治療手段，廣泛期則選擇化療或姑息減癥治療。近十余年，隨著免疫學及分子生物學在惡性腫瘤治療決策中的深入研究和廣泛應用，免疫治療已成為腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點。免疫治療通過提高機體免疫系統(tǒng)識別和殺傷腫瘤細胞的能力而發(fā)揮作用，且不良反應輕微，具有廣闊的研究和應用前景。與其他惡性腫瘤相比，小細胞肺癌在免疫治療方面仍未取得突破，可能與確診時即出現(xiàn)較大的腫瘤負荷，復雜的腫瘤異質(zhì)性，缺乏特異性的治療靶點等有關(guān)。既往研究提示亦可能通過免疫治療來誘導小細胞肺癌患者的免疫應答，從而達到抗腫瘤的目的［4］。

腫瘤患者自身免疫力較正常低，在進行放化療后免疫力會進一步降低［1］。DC-CIK是目前改善患者免疫力及抗腫瘤的常用免疫治療方法。DC和CIK是目前臨床上抗腫瘤過繼性細胞免疫治療的兩種常用細胞，前者識別腫瘤抗原，激活細胞毒性T淋巴細胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL），主導Th1型免疫應答，后者通過細胞毒作用，分泌細胞因子（如IL-2、IL-12、IFN-γ等）及誘導細胞凋亡等途徑殺傷腫瘤細胞。DC與CIK共培養(yǎng)后，既可促進DC的成熟，又能促進CIK的增殖，表達CD3+CD56+雙陽性的細胞增多，從而產(chǎn)生特異性和非特異性雙重抗腫瘤效應，DC-CIK還可釋放炎性因子，如TNF、IFN-γ、GM-CSF等，不僅對腫瘤細胞有直接殺傷作用，而且還可以通過重建和提高患者全身的機體免疫功能，降低免疫抑制T細胞（Treg）及減少相關(guān)細胞因子（IL-10、TGF-β1），從而使其抑制T細胞的增殖、活性及使NK細胞介導的細胞毒作用降低［5］。DC-CIK已經(jīng)在非小細胞肺癌［6-7］、腎癌［8］、宮頸癌［9］、食管癌［10］、胃癌［11］等高抗原表達的中晚期惡性腫瘤中進行臨床試驗，研究結(jié)果均顯示DC-CIK細胞治療的不良反應輕微，改善機體免疫力及抗腫瘤作用明顯，患者能獲得較長的生存期，較高的疾病緩解率及生存質(zhì)量。

人體外周血淋巴細胞CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細胞、Treg細胞、IL-2、IFN-γ、IL-10、TGF-β1等是反映人體特異性和非特異性細胞免疫及體液免疫功能的指標［12］。本研究中聯(lián)合治療組治療后CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細胞比例高于單純化放療組，而Treg細胞低于單純化療組，結(jié)果提示DC-CIK治療改善了聯(lián)合治療組患者的免疫。聯(lián)合治療組治療后與治療前比較，CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+細胞比例無明顯變化，NK細胞、IFN-γ較治療前升高，而IL-10、TGF-β1治療后較治療前降低，這一結(jié)果可能是因為DC-CIK治療抵消了放化療對機體免疫功能的損傷。對照組患者雖然免疫抑制細胞、抑制性細胞因子治療前后變化不明顯，但NK細胞降低，考慮與腫瘤的免疫抑制及放化療的免疫抑制作用有關(guān)。研究表明DC-CIK細胞可以提高機體的細胞免疫及體液免疫功能，彌補了放化療對免疫功能的損傷，迅速增強人體免疫系統(tǒng)，提高患者自身抗腫瘤能力，延長患者的生存期。這與國內(nèi)張俊萍等［13］的研究結(jié)果一致。

本研究結(jié)果顯示DC-CIK細胞聯(lián)合放化療治療與單純放化療患者比較，聯(lián)合治療提高了疾病控制率及PFS時間，但差異無統(tǒng)計學意義。國內(nèi)鐘國成等［14］在晚期小細胞肺癌進行DC-CIK細胞姑息治療中發(fā)現(xiàn)患者免疫功能好轉(zhuǎn)，且反應率比姑息治療組提高。本研究結(jié)果與其改善免疫功能的結(jié)果一致。Ding等［15］在小細胞肺癌進行DC-CIK維持治療的臨床試驗中發(fā)現(xiàn)局限期小細胞肺癌患者中PFS無差異，但提高了OS；而廣泛期患者PFS及OS都有提高。以上兩項關(guān)于小細胞肺癌的研究，客觀緩解率及PFS都有改善，但本研究未得到陽性結(jié)果，分析其原因可能與選擇的患者情況有關(guān)，所有的患者都為初治，且小細胞肺癌對放化療都比較敏感，且與病例數(shù)較少有關(guān)，需要進一步延長隨訪時間及擴大樣本量。

［1］Shi L，Zhou Q，Wu J，et al.Efficacy of adjuvant immunotherapy with cytokine-induced killer cells in patients with locally advanced gastric cancer［J］.Cancer Immunol Immunother，2012，61（12）：2251-2259.

［2］Ilett EJ，Prestwich RJ，Melcher AA.The evlolving role of dendritic cells in cancer therapy［J］.Expert Opin Biol Ther， 2010，10（3）：369-379.

［3］Niam M，Linn YC，F(xiàn)ook Chong S，et al.Clinical scale expansion of cytokine-induced killer cells is feasible from healthy donors and patients with acute and chronic myeloid leukemia at various stages of therapy［J］.Exp Hematol，2011，39（9）：897-903.

［4］TaniT，TanakaK，IdezukaJ，etal.RegulatoryTcellsinpraneoplastic neurological syndromes［J］.J Neuroimmunol，2008，196（1-2）：166-169.

［5］Peggs KS，Quezada SA，Allison JP.Cancer immunotherapy：co-stimulatory agonists and co-inhibitory antagonists ［J］.Clin Exp Immunol，2009，157（1）：9-19.

［6］Wang S，Wang Z.Efficacy and safety of dendritic cells cocultured with cytokine-induced killer cells immunotherapy for non-small-cell lung cancer［J］.Int Immunopharmacol，2015，28（1）：22-28.

［7］杜春娟，劉亮，曹水，等.細胞因子誘導的殺傷細胞治療87例非小細胞肺癌臨床療效評價［J］.中國腫瘤臨床，2012，39（9）：519-523.

［8］Wang H，F(xiàn)eng F，Zhu M，et al.Therapeutic efficacy of dendritic cells pulsed by autologous tumor cell lysate in combination with CIK cells on advanced renal cell carcinoma［J］. Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi，2015，31（1）：67-71.

［9］Chen B，Liu L，Xu H，et al.Effectiveness of immune therapy combined with chemotherapy on the immune function and recurrence rate of cervical cancer［J］.Exp Ther Med， 2015，9（3）：1063-1067.

［10］Yan L，Wu M，Ba N，et al.Efficacy of dendritic cell-cytokine-induced killer immunotherapy plus intensity-modulated radiation therapy in treating elderly patients with esophageal carcinoma［J］.Genet Mol Res，2015，14（1）：898-905.

［11］孫偉紅，魏曉芳，趙鵬，等.胃癌患者DC-CIK治療前后外周血Treg細胞及相關(guān)細胞因子的變化［J］.中國腫瘤生物治療雜志，2015，22（1）：79-83.

［12］Emens LA，Reilly RT，Jaffee EM.Breast cancer vaccines：maximizing cancer treatment by tapping into host immunity［J］.Endocr Relat Cancer，2005，12（1）：1-17.

［13］張俊萍，毛光華，史天良，等.DC-CIK聯(lián)合化療治療晚期非小細胞肺癌的臨床療效［J］.中國腫瘤生物治療雜志，2011，18（4）：424-429.

［14］鐘國成，吳超群，馮懷志，等.DC瘤苗聯(lián)合CIK姑息治療廣泛期小細胞肺癌的臨床分析［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2014，22（11）：2593-2596.

［15］Ding X，Cao H，Chen X，et al.Cellular immunotherapy as maintenance therapy prolongs the survival of the patients withsmallcelllungcancer［J］.JTransl Med，2015，13：158.

The effect of DC-CIK combined with chemoradiotherapy on the immune function of SCLC patiennttss

KANG Hong-gang#ZHANG Jing WANG Bao-zhong LIU Mei-rong
Department of Oncology，People's Hospital of Liaocheng，Liaocheng 252000，Shandong，China

ObjectivectiveTo evaluate the effect of dendritic cell（DC）-cytokine induced killer cells（CIK）combined with chemoradiotherapy in T-lymphocyte subsets of small cell lung cancer（SCLC）patients.Methodethod60 patients with SCLC were included in this study，in which 32 patients who were treated by DC-CIK+chemoradiotherapy（etoposide/irinotecan+ cisplatin/carboplatin；conformal modulating radiotherapy）were stratified as the study group；another 28 patients were treated with chemoradiotherapy alone during the same period，which was the control group.Flow cytometry was applied to detect the changes of CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，NK cell，Treg cell and related cytokines of IFN-γ，IL-2，IL-10，TGF-β1 in peripheral blood.ResultesultThe IFN-γ level was increased（P＜0.05），while IL-10 and TGF-β1 levels were significantly decreased after treatment in study group（P＜0.05）；the levels of CD3+CD8+，CD3+CD4+，and NK were higher in study group than that of control group after treatment（P＜0.05）；furthermore，the levels of Treg cell and IL-10，TGF-β1 were significantly lower in study group as compared with control group（P＜0.05）；in the control group，the levels of CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，and NK cells were significantly decreased after treatment（P＜0.05），while the cytokines remained stable.The study group had a higher though insignificant disease control rate as compared with control group （87.50%vs 71.43%，P＞0.05）.ConclusionusionTreatment with autologous DC-CIK therapy combined with chemoradiotherapy improve the immune function of patients with small cell lung cancer，while further study is needed to determine the potential survival benefits.

rdsDC-CIK；small cell lung cancer；adoptive immune cell therapy；chemoradiotherapy

R734. 2

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.05.17

（corresponding author），郵箱：sdkhg80@126.com

2015-11-05）